PPT学习交流
9
过敏原 II
PPT学习交流
相关过敏原 ~ 5%
无关成分 ~ 95%
10
过敏原 II
过敏原
• 蛋白或糖蛋白 • 小分子量物质, 15 – 20 kDa
过敏原的命名:
• 对于纯化过敏原: 拉丁文缩写 + 序号
例如. 桦木花粉(betula verrucosa) : Bet v1; Bet v2...
• 满足新过敏原组合的需要:
– 市场信息反馈
– 目标过敏原的定位和其它参数确认
– 提供特殊过敏原的原材料
– 提供阳性血清
PPT学习交流
38
二、过敏原常见方法学比较
既往病史
皮试:
刺试, 抓试, 皮外试, 皮内试
实验室检查:
IgE检测 CAST (细胞抗原刺激实验)
激发试验: (金标准) - 鼻腔激发试验 - 双盲稳定剂控制的食物刺激试验 (DBPCFC)
PPT学习交流
39
二、过敏原常见方法学比较
PPT学习交流
40
二、过敏原常见方法学比较
类别
方法
特点
体内
皮肤针刺试验
强烈反应时容易互相混淆结果
（皮内试验点、刺试验或 刺痕试验）
斑贴试验
价格便宜、快速，但对过敏原的质量控制有严格要求，患者痛苦， 无法避免对于高过敏体质患者具有一定生命危险性的问题 同时试验多种抗原时，容易不同的抗原液交叉混合
超敏反应是机体对某抗原初次应答后，再次接受相同抗原刺激时，发 生的一种以机体生理功能紊乱或组织细胞损伤为主的特异性免疫应答。
PPT学习交流
3
过敏原
吸入过敏原 食物过敏原 接触过敏原 输注过敏原 空气中的吸入过敏原 (例如. 植物花粉, 动物毛发, 室内灰尘或虫螨等)
PPT学习交流
4
过敏原
吸入过敏原 食物过敏原 接触过敏原 输注过敏原
读
PPT学习交流
31
特异性IgE分级标准及临床意义
类别
0 1 2 3 4 5 6
浓度[kU/l]
<0.35 0.35-0.7 0.7-3.5 3.5-17.5 17.5-50 50-100
>100
sIgE水平 未检出 低 中 高
很高（+） 特高（++） 特高（+++）
临床意义 不过敏 较敏感 有临床症状
PPT学习交流
27
总IgE ELISA: 结果解释举例
特异性 IgE 总IgE
特异性 IgE 总IgE
患者1
5 IU/ml (kU/l)
200 IU/ml
特异性 IgE 总IgE
患者2
5 IU/ml (kU/l) 25 IU/ml
PPT学习交流
28
总IgE ELISA: 总结
• 简单和快捷的实验操作 • 低检出限 (1IU/ml) • 高重复性 (批内实验: 5%) • 通过4份标准品计算定量结果 • 标准品学习交流
23
检测IgE
步骤1: 步骤2:
总IgE • ELISA
特异性 IgE EUROLINE
PPT学习交流
24
总IgE ELISA
Example for a standard curve
2
1,5
标准品 500 IU/ml
Extinction
1
100 IU/ml
0,5
10 IU/ml
0
PPT学习交流
29
特异性 IgE
• EUROLINE
DP 3713 E － 吸入性及食物性过敏原
•ALLERCOATTM6
PPT学习交流
30
特异性 IgE EUROLINE
• 简便和快捷的实验操作 • 仅需少量样本 (过夜温育) • 结果基于广泛应用的EAST分级系统 • 与 Pharmacia CAP具有良好的相关性 • 自动温育 • 通过EUROLineScan程序实现结果的自动判
重 很重 特重 特重
PPT学习交流
32
特异性 IgE EUROLINE 血清温育
AP标记二抗 AKP
颜色反应 底物 色原
膜条
抗原提取物
60 min 未稀释
温育
过夜 1:11 稀释
清洗 3 x 5min
60 min 二抗反应
清洗 3 x 5min
10 min 底物温育 自动化判读或肉眼观察
PPT学习交流
斑贴试验主要是检测Ⅳ型变态反应，敏感程度不太高。
体外
鼻粘膜激发试验（SNPT）
食物激发试验 （DBPCFC）
血清学检验
患者试验过程较痛苦
无法避免对于高过敏体质患者具有一定生命危险性的问题 操作等较繁琐
食物过敏检测金标准
对于食物过敏反应严重的患者较危险 操作麻烦，需要病床观察 患者试验过程较痛苦
对患者来说使用安全，适合儿童，可避免强烈的皮肤反应 避免其它皮肤病造成的误判 使用方面，少量血清一次即可完成数十种种过敏原的检测 适用于对食物过敏的患者，效应器官不在皮肤 适用于用抗组胺类或激素类治疗而不能停药者
Bet v1 Bet v2
Bet v3
Bet v2 Bet v6 Bet v8
Bet v7
Bet v1 Bet v4
PPT学习交流
21
过敏原诊断与治疗
• 诊断方面 • 即往病史 • 皮试 • 实验室检测 • 激发实验
• 治疗方面 • 特异性免疫治疗 成功率低于100%
PPT学习交流
22
过敏原血清学检测
42
二、欧蒙过敏原产品特性及印迹法特点
欧蒙过敏原体外诊断的优势
同类产品中单一膜条内过敏原数量最多 不添加任何增效剂 针对中国人设计的过敏原 对患者来说不存在风险 不需停止服用抗组胺药物 独家包被有CCD指示带，解释交叉反应的假阳性结果 所有厂家中样本使用体积最小（100ul）
快速测试过敏原，整个实验完成仅需要2.5-3小时
核 Platzhalter
坏
合物
Platzhalter
数分钟内
数小时到一天
数小时到一天
T-细胞介导反应 12小时到数周
花粉热
药物过敏
farmers lungs
接触过敏反应 (Ni)
PPT学习交流
18
PPT学习交流
19
Ⅰ型变态反应
PPT学习交流
20
I型过敏反应
确认对桦树花粉过敏的患者… …个体分别与不同的桦树花粉过敏原反应，如：Bet v1 ... Bet v8
• 在膜条上完成功能测试
PPT学习交流
16
免疫反应
PPT学习交流
17
4种过敏反应类型 (超敏反应) by Coombs und Gell (1963)
Type I
Type II
Type III
Type IV
早期反应
细胞毒反应
免疫复合物形成
细胞免疫反应
IgE-介导肥大细胞脱 IgG/IgM介导血细胞的破 持续产生IgG/IgM 免疫复
• 所有的试剂生产商通常都检测特异性IgE • 在检测方法上存在差异 • 结果通常不能避免非特异性反应
PPT学习交流
15
过敏原生产和质量控制
• 来源: • 由欧蒙生化和分子生物学生产部负责生产 • 从著名的过敏原生产厂商购买商品化的产品
• 质量控制:
• 通过电泳分离的方法检测过敏原成分
• 通过免疫印迹的方法检测其过敏原反应性
PPT学习交流
地中海 中东
• 地中海吸入 • 中东吸入 • 中东食物 • Inhal. Screen
AE • Food Screen AE • 海湾吸入 • 海湾食物
37
特异性 IgE 欧蒙印迹法各种组合
• 为不同过敏原组合提供可能: – 在一条膜条上包被36种以上过敏原 – 大约170种以上过敏原
过敏原血清学检测
PPT学习交流
1
目录
一.过敏原概述 二.过敏原常见方法学比较 三.欧蒙过敏原产品特性及印迹法的特点 四.过敏原体外检测常见问题及解答
PPT学习交流
2
一、过敏原概述
1906年von Piguet提出了allergy一词。其概念为：机体对抗原刺激产生 的一种“改变了反应性”的状态。这种状态可能是保护性的，即产生 了免疫力；也可能是破坏性的，即产生了超敏反应。
33
EUROLINE检测系统
PPT学习交流
34
特异性 IgE 欧蒙印迹法自动化
• 结果判读: EUROLineScan
PPT学习交流
35
PPT学习交流
36
欧蒙印迹法过敏原谱
中欧
• 吸入 • 儿童吸入 • 食物 • 特应性 • 交叉反应 • 儿童 • 昆虫毒液
亚洲
• 中国吸入 • 中国食物 • 中国特应性 • 韩国吸入 • 1+2 • 韩国食物 • 1+2 • 东南亚吸入 • 东南亚食物
> 参考范围 < 参考范围
可能存在过敏反应 一般无过敏反应
PPT学习交流
26
总IgE ELISA: 结果解释
1. 总IgE 超出参考范围大多数是由于过敏反应导致 • 例外: 寄生虫病; 免疫抑制; HIV; 重度烧伤
2. 临床相关特异性IgE结果 • 与总IgE相关的特异性IgE浓度越高，患者临床过敏反应的可能 性就越大.
PPT学习交流
7
过敏的损害
过敏是以损害粘膜为主要表现的
过敏性结膜炎（眼粘膜） 过敏性鼻炎（鼻粘膜） 过敏性哮喘（气管粘膜） 过敏性紫癜（皮肤粘膜） 过敏性肠绞痛（肠粘膜） 过敏性紫癜肾炎（肾内粘膜） 心脏有粘膜组织，心脏是肯定会受到损 。心肌酶升高，特别是特