DB3205T2012021荷花种质资源保存及提纯复壮技术规范前言荷花因兼具观赏、净化水环境等功能，在休闲农业、绿化美化、环境净化等方面具有宽敞应用前景。

荷花要紧以种藕进行无性繁育，种质容易退化。

目前苏州市各类生态园及湿地系统中荷花得到广泛应用，但普遍存在品种杂乱、种性退化等问题，荷花种质资源储存与提纯复壮尚缺少技术规范。

为规范荷花种质资源储存与提纯复壮技术，防止荷花种质资源流失与品种退化，推动标准化荷花种质储存与提纯复壮技术应用，依照《中华人民共和国标准法》，特制订本标准。

本标准编写按GB/T 1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》。

本标准由苏州市农业委员会提出。

本标准起草单位：苏州市农业科学研究院、苏州市相城区荷花湿地公园开发。

本标准要紧起草人：李静会、徐正庭、李欣、姜红卫、徐君、杨雪星。

荷花种质资源储存及提纯复壮技术规范1范畴本标准规定了荷花种质资源储存及提纯复壮的术语和定义、种质资源种植储存技术、荷花种质资源试管苗储存技术、荷花种质资源分藕提纯复壮技术、荷花种质资源组培提纯复壮技术。

本标准适用于荷花种质资源储存及提纯复壮。

2规范性引用文件下列文件关于本文件的应用是必不可少的。

凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB 4285 农药安全使用标准GB/T 8321.(1～9) 农药合理使用准则(所有部分)NY/T 837-2004 莲藕栽培技术规程3术语和定义下列术语的定义适用于本标准。

3.1荷花本标准中荷花指观赏花的莲藕品种。

3.2荷花种质资源携带不同遗传物质的莲植物的统称，包括野生种、地点品种、选育品种、品系、专门遗传材料。

4种质资源种植储存技术4.1 种质资源圃建设4.1.1 环境条件临近水源，远离污染源，邻近无高大树木、建筑物等，有充足的阳光。

4.1.2 资源圃规格资源圃由若干个品种池组成，一份资源种植一个池，池的数量由需要储存的种质资源数量决定。

单个品种池长、宽各为1.2m～3m，面积为2m2～4m2，各品种池间完全隔断，间隔在0.8m以上。

为防止漏水和便于操作，资源圃品种池一样采纳半地下式，2/3在地下，1/3在地上。

资源圃主体一样为混凝土或砖砌结构，亦可依照立地条件和投入规模选用其他建池材料。

4.1.3 池底池底土壤先拌和生石灰，分层用机械整平压实，再铺10cm厚C15混凝土抹平，切割好伸缩缝。

简易条件也可在机械密实后用5cm×12cm×24cm规格实心砖平铺，再抹1.5cm厚水泥砂浆。

4.1.4 池埂池埂宜用空心砖砌成。

共用进水口的品种池池埂高为25cm～30cm，灌溉时水能越过池埂流通。

不共用进水口的品种池埂高为40cm～50cm。

品种池之间的池埂宽度0.8m以上，周围排水沟池埂宽为20cm～30cm。

池埂表面抹1.5cm厚水泥砂浆。

4.1.5 灌水沟和排水沟灌水沟与排水沟分开，一样灌水沟在中间，排水沟在四周，保证每个品种池水能灌溉到里面去，遇到大雨时水能越过池埂进入排水沟排出。

进水也可用管道连通到每个品种池。

进水沟或孔的底边高于品种池底面10cm～15cm，排水沟略低于品种池土层高度。

4.1.6 土壤品种池中土层厚度在15cm～20cm，土质疏松肥沃，土壤有机质含量较高，ph值为5.5～7.5的水稻土、菜园土均适宜种植，品种池中土壤3年须更换一次。

4.2 资源圃田间栽培治理技术4.2.1 土壤预备前一年冬前将土壤翻耕，拌好有机肥，拌腐熟粪肥45000kg/hm2或商品有机肥4500kg/hm2，冬季充分冻融，早春土壤过筛后入池。

4.2.2 上水宜于种藕定植前3d～5d上水充分浸泡土壤，耙平泥面。

4.2.3 基肥施用在冬前有机肥充足的情形下基肥能够不施，有机肥不足能够适量施用基肥，宜于定植前15d施少量15:15:15复合肥，用量0.8 kg/m3～1.0 kg/m3土壤。

4.2.4 种藕选择种藕必须是藕身健壮、无病虫害，具有顶芽、侧芽和叶芽的完整藕，并严格区分品种。

4.2.5 种藕贮运应符合NY/T 837-2004规定。

4.2.6 定植4.2.6.1 定植时刻应在日平均气温达15℃以上时开始定植。

苏州地区在3月下旬至4月中旬定植。

4.2.6.2 定植方法种质资源圃内每池按1支/m2的密度种植。

种藕以20º～25º角斜插入土，藕头入泥5cm～15cm，藕梢翘露泥面。

种藕种植时保持池面差不多无水。

4.2.7 资源圃田间治理4.2.7.1 追肥于定植后每隔25d～30d追肥，第1次在1片～2片立叶长出时，第2次在封行前，第3次在结藕前。

每次施腐熟粪肥22500kg/hm2或尿素150kg/hm2～225kg/hm2，15:15:15复合肥300kg/hm2～375kg/hm2。

施肥前将水位降低，追肥时氮磷钾配合使用。

施肥后应及时浇水冲叶，防止灼伤叶片。

4.2.7.2 水层治理水层治理遵循前期浅、中期深、后期又浅的原则。

不同时期的适宜水深分别为：定植期至萌芽时期3cm～5cm；生长中期开始抽生立叶至封行前5cm～10cm，封行期至结藕期10cm～25cm；结藕期至枯荷期5cm～10cm；莲藕留地越冬期间3cm～5cm。

4.3 病虫害及杂草防治4.3.1 要紧病虫草害危害荷花的要紧病害有莲藕腐败病、褐斑病；虫害有斜纹夜蛾、莲缢管蚜、莲潜叶摇蚊、稻食根叶甲、克氏原螯虾及椎实螺、福寿螺；要紧草害为杂草。

4.3.2 防治原则坚持“预防为主，综合防治”的植保方针，优先采纳“农业防治、物理防治和生物防治”措施，配套使用化学防治措施的原则。

严禁使用高毒高残留农药。

农药使用应符合GB 4285和GB/T 8321.(1～9)规定。

4.3.3 防治方法莲藕腐败病应选用抗病品种、栽植无病种藕，尽量减少人为造成地下茎伤口。

于种植前3d～5d，每公顷施生石灰750kg；或种藕用50%多菌灵可湿性粉剂800倍液或70%甲基硫菌灵可湿性粉剂800倍液浸泡1min。

莲藕褐斑病一样每公顷用50%多菌灵可湿性粉剂1:1000倍液，于发病初期喷雾1次，或75%百菌清可湿性粉剂1:600倍液，于发病初期喷雾1次；病情严峻时交替用药。

斜纹夜蛾可用黑光灯或频振式杀虫灯诱杀成虫，或用糖6份、醋3份、白酒1份、水10份及90%敌百虫1份（重量比）调匀配成糖醋液诱杀成虫；人工摘除卵块或扑杀幼虫；分散后的幼虫每公顷用国产Bt粉剂500～800倍液喷雾防治，或5%定虫隆（抑太保）1500倍液喷雾1次；病情严峻时交替用药。

莲缢管蚜清除水生杂草，专门是水生寄生植物。

宜用黄板诱杀有翅成虫，或50%抗蚜威可湿性粉剂1:1200倍液喷雾。

莲潜叶摇蚊如用90%晶体敌百虫800～1000倍液喷杀，前期摘去受害较重的叶片，隔1周喷1次，连续喷3次。

稻食根叶甲冬季排干积水，促使越冬幼虫死亡，清除野生寄主，减少成虫取食及产卵场所。

用茶籽饼粉300kg/hm2耕入田中消灭幼虫。

克氏原螯虾（龙虾）在定植前7d每公顷用2.5%溴氰菊酯乳油3000倍液平均浇泼1次，水深保持3cm。

椎实螺、福寿螺于定植前7d，每公顷可施用灭螺鱼安（20％硫酸烟酰苯胺粉）7.5kg或2%三苯醇锡粒剂15kg～20kg撒于田间，水深保持3cm。

杂草定植前，结合耙地清除杂草；定植后至封行前，人工拔除杂草，清理绿萍与苔藓。

4.4 采收莲子资源圃品种池中荷花结的莲子要及时套袋采收（或在成熟前套袋），随熟随采，防止散落到池中，或者在成熟前将莲蓬剪除，防止品种混杂。

4.5 种藕出圃种藕出圃时刻为种藕生长休眠期，一样在二月中下旬。

起挖后将藕鞭剪掉，留主藕、子藕和孙藕。

对种藕进行分品种、分类、分级贮藏：一样将种藕直截了当假植在水池中，有条件可将种藕放入温度为5℃～8℃、湿度为90％～95％的冷库中储存。

5荷花种质资源试管苗储存技术5.1 外植体取材取材时刻：在莲藕萌发期（2月～4月）或结藕期（10月～12月）取材；取材要求：选取符合原品种特性、无明显病虫害症状的大田植株，挖出莲藕茎段，切取2cm～3cm长的饱满顶芽。

5.2 外植体表面消毒切取莲藕的顶芽，在自来水下洗净，并用洗衣粉溶液浸泡15min，在流水状态下冲洗1 h以上，转入无菌操作室。

在无菌条件下，外植体先用75％的乙醇浸泡30s，再用0.1％升汞浸泡5min，无菌水冲洗 5次，每次30s以上，将材料置于无菌烧杯中备用。

5.3 茎尖剥取将解剖镜置于超净工作台上，用75%酒精擦拭2遍，打开超净工作台风机与紫外灯，消毒2h。

将表面消毒的材料置于灭过菌的滤纸上，用消毒的镊子和手术刀在解剖镜下剥离外层幼叶，切取0.3mm～0.5mm顶端带2个叶原基的茎尖组织。

5.4 分化培养将剥取的茎尖组织接种在经高温消毒（121℃，15min）过的分化培养基（MS+0.05 mg/L～0.5 mg/L BA，3％蔗糖，0.7%琼脂粉）上，封口后置于25℃±2℃，光照1500lux～2000lux，每天光照12h的条件下培养，通过1个月～2个月分化培养可获得试管苗。

5.5 继代培养储存在超净工作台上操作，将分化试管苗的丛芽切割，分为单芽或带1个腋芽的茎段，在无菌状态下转入高温消毒过的继代培养基（MS+0.3mg/L～0.5mg/L BA，3％蔗糖），置于20℃±2℃，光照1500lux～2000lux，每天光照12h的条件下培养，继代周期为90d，待新芽形成后，重复上述步骤。

5.6 生根培养将试管苗切成带2片～3片叶或1个～2个腋芽的茎段接入生根培养基（MS+0.05mg/L～0.1mg/L NAA + 1.0mg/L～2.0mg/L BA，3%蔗糖）中，培养20d左右能够长出较多的根。

5.7 炼苗移栽将已长根且长势正常的试管苗拿到室外，闭瓶炼苗5d～7d后再敞瓶炼苗2d。

将试管苗取出洗净根部附着的培养基，栽入2cm～3cm深的浅水灭菌基质（70%泥土+30%泥炭土），覆盖有透气孔的塑料薄膜，在温度20℃～25℃、遮荫条件下培养7d～10d，揭膜。

喷洒适当营养液，经3周培养可移栽至小池或缸中种植，一样于5月～7月移栽，前期晴天注意遮荫、雨天注意防止雨水冲刷。

大田移栽成活后，认真对比该品种的品种特性，辨别株型、长势、花色、花型、花期、着花密度、叶色等特点，通过品种鉴定的种苗所结的种藕，翌年春天可收成作为该品种的原种种藕。

6荷花种质资源分藕提纯复壮技术6.1 方法采纳改良混合选择方法，即单株选择、分系比较、二圃制（株系圃、原种圃)。

6.2 种藕来源6.2.1 单株选择提纯用种藕来源从株系圃中选优或从育种单位购买，第一年种植到种质资源圃进行初选。