土壤过氧化氢酶活性的测定土壤过氧化氢酶,高锰酸钾滴定法（周礼恺，张志明.土壤酶活性的测定方法[J].土壤通报，1980，11(5)：37-38.）（1）所用试剂①0.3%的过氧化氢(现配)：1ml过氧化氢（30%）定容至100ml② 1.5M硫酸：80ml浓硫酸定容至1L③0.02M高锰酸钾（最多保存2周）：3.16g高锰酸钾定容至1L（2）测定步骤①取2g过1mm筛的风干土样，置于100ml锥形瓶中，然后注入40ml蒸馏水和5ml0.3%过氧化氢。
另设对照（往瓶中注入40ml蒸馏水和5ml0.3%过氧化氢，不加土样）。
②将瓶塞紧，置于120次/分钟往返式摇床上（温度调至25度，放干水），震荡20min。
停止震荡，注入5ml1.5M硫酸以终止反应。
将瓶中内容物用定量滤纸过滤。
③取25ml滤液用0.02M高锰酸钾滴定至微红色。
（对照，将5ml0.3%过氧化氢与40ml水、5ml1.5M的硫酸混合，取25ml该混合液，用0.02M的高锰酸钾滴定至微红色）。
（3）结果计算从用于滴定原始的过氧化氢所消耗的高锰酸钾的量（A）中，减去用于滴定土壤滤液的高锰酸钾的量(B)，获得的差（考虑高锰酸钾滴定度的校正值T）即为土壤的过氧化氢酶活性：（A-B）﹡T。
过氧化氢酶活性以20min1g干土的0.02M 的高锰酸钾的ml数表示，单位0.02M MnkO4ml/20min·g蔗糖酶,3，5二硝基水杨酸比色法（关松荫.土壤酶及其研究法[M].北京：农业出版社，1986：275-276.）（1）所用试剂①3，5二硝基水杨酸溶液：称2.5g二硝基水杨酸，溶于100ml2M氢氧化钠（8gNaOH溶于100ml水）和250ml水中，再加150g酒石酸钾钠，用水稀释至500ml（不能超过7d）②PH5.5磷酸缓冲液：1/15 mol/L磷酸氢二钠(23.87 g Na2HPO4·12H2O溶于1 L蒸馏水中)25mL加1/15 mol/L磷酸二氢钾(9.078 g KH2PO4 溶于1 L蒸馏水中)475mL即成。
③8%蔗糖溶液：8g蔗糖用蒸馏水定容至100ml④甲苯⑤标准葡萄糖溶液：将葡萄糖先在50-58 ℃条件下，干燥至恒重。
然后取500 mg溶于100mL苯甲酸溶液中(5 mg/mL)，即成标准葡萄糖溶液。
再用标准液制成1 mL含0.3-1.3 mg 葡萄糖的工作溶液。
（即吸取5mg/ml的标准液3、5、7、9、11、13ml定容至50ml）标准曲线绘制：取1ml不同浓度的工作液，并按与测定蔗糖酶活性同样的方法进行显色，比色后以光密度值为纵坐标，葡萄糖浓度为横坐标绘制成标准曲线。
（2）操作步骤⑥称5 g风干土，置于50 mL三角瓶中，注入15 mL8％蔗糖溶液，5 mL pH 5.5磷酸缓冲液和5滴甲苯。
⑦摇匀混合物后，放入恒温箱，在37 ℃下培养24 h。
到时取出，迅速过滤。
从中吸取滤液l mL，注入50 mL容量瓶中，加3 mL 3，5-二硝基水杨酸并在沸腾的水浴锅中加热10min，随即将容量瓶移至自来水流下冷却3 min。
⑧溶液因生成3-氨基-5-硝基水杨酸因而呈橙黄色，最后用蒸馏水稀释至50 mL，并在分光光度计上于波长508 nm处进行比色。
⑨为了消除土壤中原有的蔗糖、葡萄糖而引起的误差，每一土样需做无基质对照，整个试验需做无土壤对照。
（3）结果计算蔗糖酶活性以24h后1g土壤葡萄糖的毫克数表示：葡萄糖（mg）=a﹡4式中a表示从标准曲线查得得葡萄糖毫克数4表示换算成1g土的系数淀粉酶,3，5二硝基水杨酸测定（关松荫.土壤酶及其研究法[M].北京：农业出版社，1986：278-280.）（1）所用试剂①1%淀粉②甲苯③PH5.5磷酸缓冲液：1/15 mol/L磷酸氢二钠(23.87 g Na2HPO4·12H2O溶于1 L蒸馏水中)25mL加1/15 mol/L磷酸二氢钾(9.078 g KH2PO4 溶于1 L蒸馏水中)475mL即成。
④3，5二硝基水杨酸溶液：称2.5g二硝基水杨酸，溶于100ml2M氢氧化钠（8gNaOH溶于100ml水）和250ml水中，再加150g酒石酸钾钠，用水稀释至500ml（不能超过7d）⑤麦芽糖标准溶液：将麦芽糖先在50-58 ℃条件下，干燥至恒重。
然后取500 mg溶于100 mL苯甲酸溶液中(5 mg/mL)，即成标准麦芽糖溶液。
再用标准液配置成1ml含0.5-1.5mg麦芽糖的工作溶液。
（即分别吸取5 mg/mL标准液5、7、9、11、13、15ml定容至50ml）标准曲线的绘制：分别取不同浓度麦芽糖标准液1ml，移入50ml容量瓶中，加2ml3，5二硝基水杨酸溶液，并在沸腾的水域中加热5min。
然后将瓶移到自来水下冷却。
定容后在分光光度计上于508nm处进行比色。
（2）操作步骤①称5g土壤，置于50ml三角瓶中，注入10ml1%淀粉溶液，再加10mlPH5.6的磷酸缓冲液和5滴甲苯。
摇匀后，在37 ℃恒温箱中放置24h。
②培养结束后，将悬液过滤。
取1ml滤液移入50ml容量瓶中，然后按绘制标准曲线的显色方法进行比色测定。
试验应设无基质的对照和无土壤的对照。
淀粉酶活性，以24h后1g土壤中麦芽糖的毫克数表示。
土壤脲酶活性的测定脲酶,苯酚钠比色法测定（关松荫.土壤酶及其研究法[M].北京：农业出版社，1986：296-297.）（1）试剂配制①PH6.7的柠檬酸盐缓冲液：取184g柠檬酸溶于300ml蒸馏水中，另取147.5g氢氧化钾溶于水，再将两种溶液合并。
用1M的氢氧化钠将PH值调至6.7，并用水稀释至1L.②苯酚钠溶液：称62.5g苯酚溶于少量乙醇中，加2ml甲醇和18.5ml丙酮，然后用乙醇稀释至100ml（A），保存在冰箱中。
称27g氢氧化钠溶于100ml水中(B)，保存在冰箱中。
使用前，将A、B两液各20ml混合，并用蒸馏水稀释至100ml备用。
③次氯酸钠溶液：用水稀释制剂，至活性氯的浓度为0.9%（将5.2%的次氯酸钠稀释6倍），溶液稳定。
④10%尿素⑤甲苯⑥氮的标准溶液: 精确称取0.4717g硫酸铵溶于水并稀释至1000ml，则得1ml含0.1mg氮的标准液。
标准曲线绘制：吸取稀释的标准液1、3、5、7、9、11、13ml，移入50ml容量瓶中，然后加蒸馏水至20ml。
再加4ml苯酚钠溶液和3ml次氯酸钠溶液，边加边摇匀。
20min 后显色定容。
1h内在分光光度计上于波长578nm处比色。
根据光密度值与溶液浓度绘制标准曲线。
（2）操作步骤①取5g风干土，置于50ml三角瓶中，加1ml甲苯。
15min后加10ml10%尿素液和20mlPH6.7柠檬酸盐缓冲液。
②摇匀后在37℃恒温箱中培养24h。
过滤后取3ml滤液注入50ml容量瓶中，然后按绘制标准曲线显色方法进行比色测定。
（3）结果计算脲酶活性以24h后1g土壤中NH3-N毫克数表示。
NH3-N（mg）=a×2a表示从标准曲线查得得NH3-N毫克数；2表示换算成1g土的系数。
土壤PH及电导率的测定采用水：土=5：1. 震荡30min，静置。
用PH计和电导仪测定。
碱解扩散法（1）仪器：50套扩散皿，恒温箱，1个半微量酸式滴定管，1个玻璃棒，1支2ml移液管，1支10ml移液管.（2）试剂：① 1.8mol/L氢氧化钠溶液；称取化学纯氢氧化钠72克，用水溶解后冷却定容到1L②2%硼酸溶液（W/V）；称10克硼酸用约60度热蒸馏水溶解，冷却稀释到500ml，最后用稀释盐酸或NaOH调节pH至4.5（定氮混合指示剂显淡红色）③定氮混合指示剂；分别称取0.1克甲基红和0.5克溴甲酚绿指示剂，放入玛瑙研体，并用100ml95%酒精溶解。
此液应用稀盐酸或稀氢氧化钠，调解pH至4.5。
④0.01mol/L盐酸标准溶液：量取0.85ml浓盐酸稀释到1L。
⑤特制碱性胶液；加40克阿拉伯胶和50毫升水于烧杯中，温热至70-80℃搅拌促溶，冷却约1小时，加入20毫升甘油和30毫升饱和K2CO3水溶液，搅匀放冷，离心除去泡沫及不溶物，将清液贮于玻璃瓶中备用。
⑥硫酸亚铁粉。
分析纯。
空气中易氧化，需看清颜色。
（3）操作步骤①称土，加还原剂：称取过100目风干土样2克和1克硫酸亚铁，均匀铺在扩散皿外室中，水平轻轻旋转扩散皿，使样品均匀铺平，切忌土样飞入扩散皿内室。
②加吸收剂-加碱-封闭：在扩散皿内室中加入2ml2%硼酸溶液，并滴加1滴定氮混合指示剂，然后再扩散皿的外室边缘涂上特制碱性胶液，胶液不宜涂得过多，但要涂匀，然后盖上毛玻璃，并旋转数次，使毛玻璃与皿边缘完全粘合，无气泡，以防漏气，再慢慢转开毛玻璃的一边，使扩散皿露出一条狭缝，迅速加入1.8mol/L氢氧化钠溶液10ml于皿的外室中，立即用毛玻璃盖严。
加氢氧化钠时应防止溅在内室边缘或毛玻璃盖上，以免影响测定结果。
③放入恒温箱：水平的轻轻旋转扩散皿，使溶液与土壤充分混匀，用橡皮筋固定，随后放入40度恒温箱中，24小时后取出。
④滴定：取出扩散皿，用0.01mol/L盐酸标准溶液，半微量滴定管滴定内室硼酸中所吸收的氨量，由蓝色到微红色为终点，记下盐酸用量。
⑤空白试验：要做空白试验，方法同上，只是不加土样。
（4）结果计算碱解氮含量(mg/kg)=C×（V-V0）×14×103/M式中：C-0.01mol/L盐酸标准液的浓度(mol/L)V-样品滴定时用去标准液的体积（ml）V0-空白滴定时用去标准液的体积14-氮原子的摩尔质量（g/mol）103-换算系数M-样品质量注意事项：1.特制碱性溶胶必须先溶解再混合，否则会结块。
2. 36%～38%浓盐酸是12mol/L3.注意扩散皿一定要刷干净，尤其是内室，否则一加硼酸，就会立刻变成蓝色。
如变成蓝色，则需重新做。
钼锑抗比色法（1）仪器：塑料杯，往复式震荡机，分光光度计（2）试剂① 0.03mol/L氟化铵-0.025mol/L盐酸浸提剂称取1.11g氟化铵溶于800ml水中，加1mol/L盐酸（42ml浓盐酸溶于500ml水中）25ml，然后稀释至1L，贮于塑料瓶中。
②钼锑抗试剂称取酒石酸锑钾(KSbOC4H4O6)0.5克，溶于100毫升水中，制成0.5％的溶液。
另称取钼酸铵20克溶于450毫升水中徐徐加入208.3毫升浓硫酸，边加边搅动，再将0.5％的酒石酸锑钾溶液100毫升加入到钼酸铵液中，最后加至1升，充分摇匀，贮于棕色瓶中，此为钼锑混合液。
临用前(当天)称取1.5克左旋抗坏血酸溶液于100毫升钼锑混合液中，混匀。
此即钼锑抗试剂。
(有效期24小时，如贮于冰箱中，则有效期较长。
③ 0.8M H3BO34.95g硼酸定容至100ml即可。