第四章 基因功能分析手段
功能分析的结果
• 某种疾病标记基因 • 治疗某种疾病
1、分子水平 1.1 mRNA表达分析 1.2 蛋白表达分析
2、转基因验证
所有实验的设计都需 要有重复、各种对照
1.1 mRNA表达分析 1.1.1 半定量RT-PCR
实施步骤： ① RNA样品提取 ② cDNA合成（反转录） ③ 管家基因调模板浓度 ④ 目的基因PCR扩增，电泳检测看亮度
拟南芥 水稻 棉花 玉米 大豆
功能研究 绿色超级稻 抗虫棉 抗病，抗旱 抗除草剂
Thanks！
1.1.4 RNA原位杂交技术
实施步骤： ① 制备探针 ② 组织切片 ③ 原位杂交及图片分析
1.2 蛋白表达分析 1.2.1 western blot
1.2.2 免疫组化技术
实施步骤： ① 制备或购买抗体 ② 组织切片 ③ 杂交及图片分析
Байду номын сангаас
1.2.3 流式细胞术
2 转基因分析
转基因植物
1.1.2 实时定量RT-PCR（Real-Time PCR）
实施步骤： ① RNA样品提取 ② cDNA合成（反转录） ③ 稀释模板 ④ 管家基因和目的基因同时配置反应，上机 ⑤ 提取数据，进行分析
1.1.3 Northern Blot
1.1.3 基因芯片技术 公司定制芯片或者购买通用芯片 委托公司做或者自己做