测定管 （T0）
0..020
测定管 （T1）
0.020
测定管 （T2）
0.020
测定管 （T3）
0.020
测定管 （T4）
0.020
葡萄糖 标准液 （ml）
蒸馏水 （ml）
—— 0.020
0.020 ——
—— ——
—— ——
—— ——
—— ——
—— ——
酶酚混 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 合试剂 （ml）
次日清晨空腹抽静脉血2ml（称为空腹血浆血 糖，即FPG），然后将75g葡萄糖溶于200 ~300ml温开水中（儿童按每千克体重1. 75g）， 令受试者5min内服 下。服后半小时、1小时、 2小时、3小时各抽一次血，取七支试管按下表 操作：
血清 （ml）
空白管 （B）
——
标准管 （S）
——
反应方程式：
GOD
葡萄糖+O2+H2O———— 葡萄糖酸+2H2O2
POD
2H2O2+4-氨基安替比林+苯酚————红色醌类化合物
2、邻甲苯胺法：葡萄糖为一含醛基的己糖，在酸 性条件下加热，可脱水生成5-羟甲基-2-呋喃甲醛， 后者与邻甲苯胺缩合成青色的Suchiff碱。 Suchiff碱 颜色的深浅与样品中葡萄糖的含量成正比与进行同 样处理的标准葡萄糖液相比较，即可求出样品中葡 萄糖的含量。由于邻甲苯胺只与醛糖作用显色，故 此种测定方法不受血液中其他还原物质的干扰，测 定时也无需除去血浆或血清中的蛋白质。
800ml蒸馏水中加温助溶，冷却后加蒸馏水定容至1L。
6、葡萄糖标准贮存液（100mmol/L）
称取已干燥恒重的无水葡萄糖1.802g，溶于约70ml 12mmol/L苯甲酸溶液中，以12mmol/L苯甲酸溶液定
容至100ml。2h后方可使用。（防止氧化的作用 ， 葡萄糖为单糖，含醛基，易氧化成羧基，加入 苯甲酸，平衡向左移动 ）
应用GOD-POD法测定血糖浓度来检测葡 萄糖耐量
实验器材与试剂：
器材： 5ml移液管 50或100ul微量可调式移液器 721E分光光度计 1cm比色皿 37℃恒温水浴
试剂：
1、0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.0）
称取无水磷酸氢二钠8.67g及无水磷酸二氢钾5.3g溶 于蒸馏水800ml中，调pH7.0，定容至1L。
葡萄糖氧化酶法是利用葡萄糖氧化酶氧化β葡 萄糖产生葡萄糖酸内酯和双氧水的反应而建 立。血糖的酶法测定是利用酶的特异性催化 而建立起来的，具有高度的特异性，同时， 可以避免使用化学方法中的一些有害试剂等。 操作过程简便，便于自动化检测
临床上OGTT主要适用于下列情况：（1） 无糖尿病症状，空腹血糖异常，或偶尔出 现糖尿，或有明显糖尿病家族史者；（2） 有糖尿病症状，血糖水平不够糖尿病诊断 标准者；（3）妊娠期或甲状腺功能亢进出 现糖尿者；（4）不明原因肾病与视网膜病 者。
7、葡萄糖标准工作液（5mmol/L） 吸取葡萄
糖标准贮存液5.00ml放于100ml容量瓶中，用
12mmol/L苯甲酸溶液稀释至刻度，混匀。
实验步骤：
受试者前三天正常饮食，停用影响血糖的各种 药物，如胰岛素、肾上腺皮质素、儿茶酚胺等。 试验前1天晚餐后即不再进食（即空腹10~14小 时）。
混匀，置37℃水浴中，保温15min，在波 长510nm处比色，以空白管调零，读取标 准管及测定管吸光度。然后分别计算出葡 萄糖浓度C0、C1、C2、C3、C4。
口服葡萄糖耐量试验
实验目的
掌握酶法测定血清葡萄糖浓度的原理 掌握血糖变化的临床生理意义 掌握口服葡萄糖耐量试验的原理，适用
人群和临床意义。
实验原理
葡萄糖耐量试验（OGTT）是一种葡萄糖负荷 试验，用于检查人体胰岛素B细胞功能和机体 对糖的调节能力。正常人进食后血糖都会暂时 性升高，30~60分钟后可升到最高峰，但一般 不超过8.9mmol/L，2小时左右又会回到空腹 水平。这种现象称为耐糖现象。若内分泌失调 或神经系统功能紊乱，则调节功能失常，食入 大量糖后血糖浓度可急剧上升，短时间不能恢 复到原值，称为耐糖失常现象。所以观察耐糖 现象可以了解调节血糖的各种机能是否健全。
血清葡萄糖浓度测定方法
1、GOD-POD法：以过氧化物酶作指示酶的 偶联酶反应定量法。葡萄糖氧化酶（GOD） 利用氧将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，同时释放 过氧化氢。过氧化物酶（POD）催化过氧化 氢氧化色素原（如4-氨基安替比林和苯酚）， 并使色素原氧化成色素，即Trinder反应。红 色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。
其反应如下：
血糖测定方法归纳
血糖的测定方法按测定原理可分为无机化学方法、 有机化学方法和生物化学方法三类。此外，还有固 相酶法、电化学法及质谱法等。常用的是分光光度 法和酶学方法。分光光度法中常见的是邻甲苯胺法， 是利用葡萄糖在加热的有机酸溶液中与某些芳香族 胺类，可生成有色衍生物这一原理建立的。酶学方 法有葡萄糖氧化酶法、己糖激酶法和葡萄糖脱氢酶 法等。(己糖激酶法)原理是用已糖激酶催化葡萄糖同 ATP反应，产生葡萄糖－6－磷酸及ADP，葡萄糖－ 6－磷酸在葡萄糖－6－磷酸脱氧酶存在时，同 NADP＋作用．产生NADPH及6—磷酸葡萄糖酸内 酯，NADPH在340nm有吸收峰。
反应方程式：
[H+]
葡萄糖——5-羟甲基-2-呋喃甲醛+3H2O
加热
5-羟甲基-2-呋喃甲醛+邻甲苯胺——Schiff碱+H2O
3、其他方法举例
福林—马尔露斯（Folin-Malmors）超微量法： 在热碱溶液中的葡萄糖可将高铁氰化钾还原 为低铁氰化钾，后者再与硫酸高铁盐作用生 成亚铁氰化铁（普鲁士蓝），与同样处理的 葡萄糖标准液进行比色，即可求出血糖含量。
2、酶试剂 取过氧化物酶12000U，葡萄糖氧化
酶1200U，4-氨基安替比林10mg，置4℃保存，可 稳定存放3个月。
3、酚溶液 称取重蒸馏酚100mg溶于蒸馏水
100ml中，用棕色瓶贮存。
4、酶酚混合试剂 将酶试剂及酚溶液L苯甲酸溶液 取苯甲酸1.4g，于