对季铵碱、盐 对有机酸、酚类
pKa 2-10
pKa <1.0
pKa >10
pKa 2-8
选择 Oasis® MCX 选择 Oasis® WAX 选择 Oasis® WCX 选择 Oasis® MAX
套用方法1
样品预处理
激活/平衡 上样
清洗: 2% 甲酸
淋出段 1: 100% MeOH
淋出段 2: 5% 氨℃：阿莫西林等抗生素 ✓ 加稳定剂：卡托普利等 ✓ 立即测试：维生素C等
一、生物样品的一般处理原则
• 生物样品均匀化
• 体液样品： 尿液、血浆——涡旋混匀
• 固体样品： 组织、粪便——加入适量溶剂进行高速匀浆
一、生物样品的一般处理原则
• 结合物水解
• 无乳化现象 • 使用溶剂安全价格低廉 • 萃取效率高 • 处理速度快，具有一定通量
• 易于同时萃取出目标药物及其代谢产物，包括极性 强的Ⅱ相代谢产物
• MCX固相萃取柱 • 反相作用和阳离子交换
作用
• 酸性环境中含氮碱性基 团与磺酸基结合
• 酸性药物呈分子状态发 生反相结合作用
对有机碱:
对有机强酸
中性物质
套用方法2
样品预处理
• Ⅱ相代谢产物如葡萄糖醛酸结合物、硫酸酯类结合物 • 极性大、亲水性、不易于提取富集
• 酸水解：简便、快速，不具备专一性，注意药物是否 被破坏
• 酶水解：β-葡萄糖苷酶、硫酸酯酶，专一性强，时间 长，实验费用高
二、生物样品预处理方法
• 预处理的目的： 去蛋白，释放药物 样品纯化和富集 满足分析方法灵敏度的需要 防止分析仪器的污染和劣化 满足大量样品分析的需要 微量、快速
• 溶剂的选择与纯度的要求 • 有机溶剂相和水相的体积 • 水相的pH 值
二、生物样品预处理方法
• 常用的液液萃取溶剂：
❖ 正己烷
❖ 叔丁基甲醚
极
性
❖ 乙醚
增
❖ 乙酸乙酯
加
❖ 正丁醇*
• 相似相容原理进行选用
• 沸点低、易于挥散和浓集
• 不易乳化、不影响紫外检测
• 体积选择依实验考察
二、生物样品预处理方法
• 水相的pH值
• 水相pH值主要由药物的pKa确定 • 对于碱性药物最佳pH值要高于pKa值1～2个pH单位 • 对于酸性药物要低1～2个pH单位
• 碱性药物在碱性pH值、酸性药物在酸性pH值介质 中提取
• 血浆加入1M NaOH进行碱化后用适合溶剂提取
二、生物样品预处理方法
• 液液萃取的优点：
一、生物样品的一般处理原则
• 生物样品贮存 • 生物样品均匀化 • 结合物水解
• 生物基质的性质 • 测定对象的性质
一、生物样品的一般处理原则
• 生物样品的贮存
• 采集哪种生物样品：血浆、血清、全血、尿、组织…
✓ 血浆酯酶引起的水解——血浆样品—加入酯酶抑制剂 ✓ 微生物导致的腐败——尿液样品—加入防腐剂冷藏
二、生物样品预处理方法
• 固相萃取
• 操作： • 活化 • 上样 • 淋洗 • 洗脱 • 收集 • 直接进样或者
浓缩后进样
与色谱理论相同
二、生物样品预处理方法
二、生物样品预处理方法
• 采用离心或者抽真空 的办法，以一定离心 力或者流速，进行上 样、淋洗和洗脱
二、生物样品预处理方法
• 固相萃取的优点：
生物体内药物分析选论
生物体内样品及其预处理技术
生物体内药物分析的特点
常规药物分析：原料药物和药物制剂分析 真伪鉴别、纯度检查、含量测定 共存杂质、制剂辅料、复方药物
生物体内药物分析：复杂生物样品的微量分析 药物浓度低 样品采量少 干扰成分多
研究对象
• 血样 • 尿液 • 唾液 • 胆汁 • 组织器官
生物样品种类可分为
均匀生物样品： 血液（血浆、血清、全血）、尿液、唾液、胆汁、 乳汁、脑脊液、淋巴液、汗液和性腺分泌液等体液 呼出气体
非均匀生物样品： 心、肝、肾、脾、肺、脑、胃、肠、子宫或睾丸、 脂肪、肌肉、皮肤等器官、组织 粪便排泄物
检测组分
即生物样品中的药物及其代谢物等
（1）原形药物的测定； （2）游离药物的监测； （3）活性代谢产物的监测； （4）药物对映体的监测； （5）作用部位药物浓度的测定； （6）体内内源性物质的测定。
生物样品来源
临床前 吸收试验 组织分布试验 代谢 排泄 毒代动力学
临床 临床药代动力学 制剂生物利用度及生物等效性
生物样品种类
生物样品种类选取的一般原则：
（1）必须是能够反映出浓度与药物效应 之间关系；
（2）易于获得； （3）便于处理，适合于分析； （4）根据不同目的与要求进行选取。
生物样品种类
二、生物样品预处理方法
• 应用中注意问题：
• 去蛋白后的上清直接进样对色谱分离及色谱柱和仪 器的影响 ❖ 色谱峰形 ❖ 液质联用分析中的基质效应
• 检测灵敏度是否足够
二、生物样品预处理方法
• 液液萃取
• 操作：
• 血浆＋一定体积萃取溶剂→振荡/涡旋萃取3～ 5min→3500rpm离心10min→取上清液氮气下吹干→流动相 复溶后进样分析
二、生物样品预处理方法
• 常用的生物样品预处理方法 • 沉淀蛋白 • 液液萃取 • 液固提取
二、生物样品预处理方法
• 沉淀蛋白
• 操作：
50μl血浆＋150 μl甲醇→涡旋1min→3500rpm离心10min→取 上清液进样分析
• 常用沉淀剂： • 与水能混溶的有机溶剂——甲醇、乙腈 • 酸性沉淀剂——三氯醋酸、高氯酸
预处理方法
• 分离 • 纯化 • 浓集
实验结果 测定
• 动物实验 • 方法学考察和验证
• 样品前处理 • 样品分析 • 数据处理
具体考虑生物体内药物分析的研究对象即生 物体内样品，则需要从生物样品来源、样品种 类和检测组分三方面来讨论。
1. 生物样品来源：决定于研究的目的 人体与动物
2. 生物样品种类：如体液、器官、组织和排泄物等 3. 检测组分：即生物样品中的药物及其代谢物等
• 选择性高 • 便于纯化和富集 • 操作方便 • 对仪器的污染小
• 缺点：
• 易产生乳化 • 操作费时，不易于自动化
二、生物样品预处理方法
• 液固提取
• 固相萃取
• 超声提取——对于固体生物样品，如粪便，组织等， 匀浆处理后，用合适的有机溶剂进行液固萃取，涡 旋振荡提取或者超声提取，上清液吹干或者进行第 二次液液萃取，以便进一步的纯化富集