制备色谱和分析色谱的比较
制备色谱 分离目的 色谱模型 仪器设备 分析色谱
单位时间内获得符合 获得混合物中各组分的信 纯度的物质量 息（定性定量） 非线性色谱 线性色谱 制备柱、高流量、大 高压稳流、高精度进样、 进样、低检测（高通 高灵敏检测（高重现性） 量）
2.制备薄层色谱
2.1制备薄层色谱法概述 2.2常规制备薄层色谱（PTLC）
点样工具：微量注射器；玻璃毛细管。 点样方法：液体直接点样法；固体添埋法。
样点式样：点型；线型；条型。
点样应注意的问题：

点样斑点的大小：一般点样斑点直径不大于 2mm；点样带应尽可能狭窄，以获 得更好的分离效果。如点样带太宽，可用高极性溶剂展开至点样带上方 2cm处 进行浓缩，然后将铺板干燥后再用展开剂展开。 点样量：适当的点样量，可使斑点集中，点样量过大，易拖尾或扩散；点样量 过少，不易检出。0.25mm薄层，一般点样量为几微克～几百微克作定性分析； 2mm层厚，点样量可达几十毫克～几百毫克作制备。 点样位置：距底边约1~2cm的起始线上，点与点之间的距离一般为1~1.5cm。

单一溶剂的极性顺序为（从小到大）： 石油醚→环己烷→四氯化碳→三氯乙烯→苯→甲苯→二氯甲 烷→氯仿→乙醚→乙酸乙酯→乙酸甲酯→丙酮→正丙醇→甲 醇→吡啶→乙酸 混合溶剂的极性顺序（从小到大）： 苯∶氯仿（1+1）→ 环己烷∶乙酸乙酯（8+2）→氯仿∶丙 酮（ 95+5 ） → 苯∶丙酮（ 9+1 ） → 苯∶乙酸乙酯（ 8+2 ） → 氯仿∶乙醚（9+1）→苯∶甲醇（95+5） →苯∶乙醚（6+4） →环己烷∶乙酸乙酯（1+1）→氯仿∶乙醚（8+2）→氯仿∶ 甲醇（99+1）→苯∶甲醇（9+1）→氯仿∶丙酮（85+15）→ 苯∶ 乙 醚（ 4+6 ） → 苯∶ 乙酸乙酯 （ 1+1 ） → 氯仿∶ 甲醇 （ 95+5 ） → 氯仿∶丙酮（ 7+3 ） → 苯∶乙酸乙酯（ 3+7 ） → 苯∶乙醚（1+9） →乙醚∶甲醇（99+1） →乙酸乙酯∶甲醇 （99+1）→苯∶丙酮（1+1）→氯仿∶甲醇（9+1）
泛的应用。

医药方面
由于薄层色谱的快速、简便与实效性，广泛应用于中草药品种鉴别和成分分
析、中成药鉴别和质量标准研究、合成药物的定性鉴别、纯度检查、稳定性考 察和药物代谢以及合成工艺监控分析、生化和抗生素研究等方面。 应用薄层扫描即薄层色谱与紫外分光光度或荧光光度分析联用，可进行各种 药物的定量分析。
• 设备简单（薄层板，点样器，展开缸…） • 操作方便（仪器自动化，直接与检测仪连用） • 分离快速（需十至几十分钟，同时展开多个试样） • 灵敏度及分离度（分辨率）高 • 处理样品量较大 • 适用于挥发性较小或热敏性物质
2.1.3基本原理
薄层色谱法是利用各成分对同一吸附剂吸附能力不同，使其在 流动相（溶剂）流过固定相（吸附剂）的过程中，连续的产生吸 附、解吸附、再吸附、再解吸附，从而达到各成分的互相分离的 目的。
常用商品硅胶
硅胶P----制备用硅胶
硅胶H----不含粘合剂 硅胶G----含煅石膏粘合剂 硅胶F----含荧光物质 硅胶F254----在254nm紫外光下呈强烈黄绿色荧光背景。
硅胶粒径范围影响
越细越均匀，分离度越高， 粒径范围宽，分离效率低，怎么办？
------薄层厚度的渐变 薄层厚度从底部到前沿逐渐加大，这样展开剂的速度随着展 开的进行逐渐变慢，样品谱带在展开过程中逐步富集，可保 持较窄的谱带。

生物样品与毒物分析
薄层色谱法分析的生物样品多为血清、血浆或尿液等,用来进行药物生物利 用度的分析,检测临床用药的血药浓度,以利于诊断临床疾病等。毒物分析如 植物毒素、真菌毒素、兴奋剂、药物中毒、走私毒品、农药以及尸检、刑 侦破案等方面的样品分析。
2.3加压制备薄层色谱（OPLC）
2.4离心制备薄层色谱 (CTLC) 2.5制备薄层色谱的应用
2.1制备薄层色谱法概述
2.1.1概念
薄层色谱是以适宜的固定相均匀涂布于平面载 体上，点样，然后以合适的溶剂展开，达到分 离、鉴定和定量的目的。常用TCL来表示。 属于固－液吸附色谱
2.1.2薄层色谱法特点


（2）流动相（ 展开剂）的选择
展开剂选择是能否达到理想分离的关键。在薄层色谱中，一般 先选择单一溶剂作展开剂，但对难分离组分，则需要使用二元、 三元甚至多元的混合溶剂。

在混合展开剂中 占比例较大的弱极性溶剂在展开剂中主要起溶解物质和基本分 离作用； 占比例小的强极性溶剂则起调整改善被分离物质的保留值及选 择性的作用； 中等极性的溶剂起着使极性相差较大溶剂混合均匀的作用。
（4）样品的收集
在确定色带位置后，可 用刮刀或一与真空收集器相 连的管形刮离器将该色带吸 附剂从板上刮下。后一种方 法因吸附剂持续与气流接触 ，所含的纯化合物有被氧化 的危险， 并不适用于易氧 化的物质。
脱脂棉
接真空泵
吸附剂 玻璃管
注意事项
a.无论采用何种回收方法，都应以极性尽可能小的溶剂将化合 物从吸附剂中提取出来(1g吸附剂约使用5m选择展开剂一般需要针对吸附剂的种类、活度和被分 离混合物的组成及各成分的性质结构等情况综合而定。 a.分离非极性物质，选择非极性展开剂和高活性吸附剂； b.分离强极性物质，选择强极性展开剂和活性低的吸附剂； c.分离中等极性物质，选择中等极性展开剂和活性的吸附剂。 小原则：被分离物质和展开剂之间的极性关系应符合“相似相 溶原理”。该原则可用于确定展开剂的大致范围。
常用显色剂


硫酸：硫酸-乙醇(1:1)溶液，喷后110℃烤15分钟，不同有机 物显不同的颜色； 0.05%高锰酸钾溶液：还原性物质显黄色，背景淡红色； 酸性重铬酸钾：5%重铬酸钾浓硫酸溶液，必要时150℃烤薄层； 5%磷钼酸乙醇溶液：喷后120℃烤，还原性物质显蓝色，再用 氨气熏，背景无色。



样品的浓度应在5％～10％左右。
图 3—28
各种点样方式示意图
（2）展开
将点好样的薄板与流动相接触，使两相相对运动并带动样品 组分迁移的过程称为展开。 展开的容器：除了专用的色谱缸外，常见玻璃标本缸、染色缸、 广口瓶、大量筒、大试管等可作为其代用品。
展开方式：上行法、下行法、双向法、梯次上行法。


2.2.3 薄层色谱的操作
（1）点样 上样是进行PTLC分离的一个最关键的步骤。
剂 (如己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯等)，点样后溶 剂能迅速挥发，以减少色斑的扩散。 上样之前薄层板最好先用甲醇展开一次，以除去可能存在 的杂质。 样品溶解：上样前先将样品溶于少量溶剂，难挥发性溶剂 可引起点样带变宽，因此最好选用挥发性溶
第七章 制备色谱技术
主要内容
1 2 3 概述 制备薄层色谱法 常规柱色谱技术
1.概述
采用色谱技术制备纯物质，即分离一种或多种色谱纯物质； “制备”这一概念指获得足够量的单一化合物。 化学结构、生物活性筛选 实验室研究 30~50mg
分析用标准品 小批量生产
产业化制备
>100mg >50g
>1000g
优点
分离所需时间短，扩散效应相应减小； 加压使得某些润湿能力较差的流动相也可应用； 与靠毛细管作用的色谱方法相比，OPLC由于采用更细颗 粒的吸附剂及更长的色谱板，因而分离效果更好。 适合分离小量（50~100mg）已经部分纯化了得样品。
2.4 离心制备薄层色谱法
离心薄层色谱技术主要是在经典的PTLC基础上运用离心力以 促使流动相加速流动，是一种强迫流动相移动的方法。
薄层厚度/mm
分离长度/cm 分离模式 组分分开方法 典型上样量/mg
0.5-2
18 线形 离线 50-150
0.5-2
18 线形 在线 50-300
1-4
12 环形 在线 50-500
分离谱带数
2-5
2-7
2-12
2.5制备薄层色谱的应用
薄层色谱法具有设备简单、操作方便、分离快速、灵敏度及 分辨率高等特点，在医药、生物、环境、食品等各领域得到了广
优点





分离速度快； 使用溶剂少，经济环保； 操作简单，占用空间小，性能稳定； 薄层板可反复使用，不需刮离吸附剂； 可进行梯度洗脱，条件更优化 ； 进样量大，一次最多可分离2g。 适合合成和天然产物的制备分离。
不同制备薄层色谱法的比较
参数 流动相迁移方法 PTLC 毛细作用 OPLC 加压 CTLC 离心
选择展开剂时的注意事项

对普通酸性组分：特别是离解度较大的弱酸性组分应在展开剂 中加入一定比例的酸，可防止拖尾现象； 对碱性物质：如某些生物碱，多数情况选用氧化铝为吸附剂， 选用中性溶剂为展开剂。若采用硅胶为吸附剂，则选用碱性展 开剂为宜；但对某些碱性较弱的生物碱可使用中性展开剂。 理想的展开剂应能使混合物分离后各组分的Rf值相差尽可能大， 各组分理想的比移值在0.2-0.8之间。
Rf的特性和应用： 在固定条件下，特定化合物的Rf值是一个常数。因此，在条 件完全相同的情况下，Rf值可以作为该化合物定性检定的物理 指标，就像测定熔点或其它物理常数一样。为了获得相同的色 谱条件，通常是把未知样和标准样同时滴加在同一块薄板上。
2.2常规制备薄层色谱法
2.2.1薄层板的制备
2.2.2色谱条件的选择
2.2.3薄层色谱的操作
2.2.1薄层板的制备
常采用湿法：平铺法和涂铺法。
硅胶
混合
黏合剂
平铺
涂铺器
自然干燥一夜 105-120℃活化
煅石膏 或羧甲基纤维素钠水溶液