基酸 C.分离DNP-氨基酸 D.层析法定性DNP-氨基酸，得出N端氨基酸的种
类、数目
Corey & Pauling
第三节 肽
一、肽的结构
几个重要的概念：肽、肽键、氨基酸 残基、N端C端、多肽、二硫键、
酰氨平面
第四节 蛋白质的结构
（一）、蛋白质的一级结构 定义 举例：胰岛素的一级结构
（二）、空间结构包含的内容 1、蛋白质的二级结构
（1）、定义
（2）、包含内容
α-螺旋结构 β-折叠结构 β-转角结构
（3）、超二级结构： αα、 βαβ、βββ、 β曲折
• 层析法鉴定
• Edman降解法的改进方法--- DNS-Edman降解法 – 用DNS(二甲基萘磺酰氯)测定N端氨基酸 • 原理DNFB法相同 • 但水解后的DNS-氨基酸不需分离，可直接用电泳或层析法 鉴定
• 由于DNS有强烈荧光，灵敏度比DNFB法高100倍，比 Edman法高几到十几倍
• 可用于微量氨基酸的定量
与2,4-二硝基氟苯（DNFB）反应
* 反应特点 A.为α- NH2的反应 B.氨基酸α- NH2的一个H原子可被烃基取代(卤代烃) C.在弱碱性条件下，与DNFB发生芳环取代，生成二硝基
苯氨基酸
* 应用：鉴定多肽或蛋白质的N-末端氨基酸
首先由Sanger应用，确定了胰岛素的一级结构 A.肽分子与DNFB反应，得DNP-肽 B.水解DNP-肽，得DNP-N端氨基酸及其他游离氨
*别构现象
第六节 蛋白质的性质与分离、分析技术
一、蛋白质的性质
1、蛋白质的相对分子质量 沉降系数S
2 、蛋白质的两性解离和等电点
等电点isoelectric point：蛋白质分子所带的 正电荷和负电荷相等时溶液的pH值。
pI在有中性盐时有明显变化，因分子中某些 解离基团可与盐的离子如Ca2+、Mg2+、Cl-、 HPO42-结合，观察到的pI在一定程度上决定于介 质中离子的组成。 pI是蛋白质的一个特征常数。
三、根据功能分类
催化蛋白 调节蛋白 结构蛋白 运输蛋白 贮藏蛋白 运动蛋白 防御蛋白 电子传递蛋白
第二节 蛋白质的组成单位-氨基酸
一、氨基酸的结构 1、结构通式
COOH
H C NH2 R
2、构型：L型、D型
二、氨基酸的分类 1、按R基的极性不同来分类
含脂肪烃R基：Gly、Val、Ala
非极性R基氨基酸
（4）、结构域
2、蛋白质的三级结构
举例：鲸肌红蛋白的三级结构
3、蛋白质的四级结构 举例：血红蛋白的四级结构（亚基） 三、维持蛋白质构象的化学键
1、共价键：肽键、二硫键 2、非共价键：氢键、范德华力、
盐键（离子键）、疏水键
第五节 蛋白质结构与功能的关系
一、蛋白质一级结构和功能的关系 1、种属差异 2、分子病 二、蛋白质的空间结构与功能的关系
不同的蛋白质有不同的等电点
等电点是蛋白质的一个特征常数，其等电点 是由可解离基团的种类和数目决定的，而这在不 同的蛋白质中是不同的。
不同蛋白质的酸性氨基酸残基和碱性氨基酸 残基的多少，直接影响蛋白质等电点的大小。
蛋白质在等电点时的溶解度最小，因此不同 蛋白质的等电点不同来沉淀不同的蛋白质，分离 蛋白质混合物。
与亚硝酸的反应 与甲醛的反应 与2，4-二硝基氟苯的反应 与异硫氰酸苯酯的反应
成盐和成脂反应 （2）羧基参加的反应
脱羧反应
（3）氨基和羧基共同参加的反应
两性解离（两性离子、两性解离、等电点）
茚三酮反应
成肽反应
（4）由侧链基团参加的反应
双缩尿反应 黄蛋白反应 乙醛酸反应 坂口反应 酚试剂反应 米伦氏反应
第二章 蛋白质
蛋白质主要元素组成：C、H、O、N、S 及 P、
Fe、Cu、Zn、Mo、I、Se 等微量元素。
蛋白质平均含N量为16％,这是凯氏定 氮法测蛋白质含量的理论依据：
蛋白质含量＝蛋白质含N量×6.25
第一节 蛋白质的分类
一、根据分子形状分类
二、根据分子组成分类
单纯蛋白质（如清蛋白等） 结合蛋白质（如核蛋白等）
O
HN CH C NH CH C
R1
R2
HNΒιβλιοθήκη SNH C ONH2CH
R1
N CS
C NH O CH
R1
O CH C R2
• 肽链（N端氨基酸）与PITC偶联，生成PTC-肽
• 环化断裂：最靠近PTC基的肽键断裂，生成PTC-氨基酸和少
•
一残基的肽链，同时PTC-氨基酸环化生成PTH-氨基酸
• 分离PTH-氨基酸
与异硫氰酸苯酯（PITC）的反应
• Edman （苯异硫氰酸酯法）：由Edman于1950年 首先提出，为α- NH2的反应，用于N末端分析，又 称Edman降解法。此法的特点是能够不断重复循环， 将肽链N-端氨基酸残基逐一进行标记和解离。
NC S
H HN
O
O
CH C NH CH C
R1
R2
H
N C S: O
3、蛋白质的变性
（1）、变性的概念
在变性因素作用下，天然蛋白质一级结构保 持不变，高级结构发生了异常的变化，由天然态 的折迭态变成了变性的伸展态，引起生物功能的 丧失，理化性质的改变的现象。
氨基酸的甲醛滴定
* 反应特点 A.为α- NH2的反应 B.在常温，中性条件，甲醛与α- NH2很快反应，生成羟甲基衍生物，释放氢离子。 * 应用：氨基酸定量分析—甲醛滴定法（间接滴定） A.直接滴定，终点pH过高（12），没有适当指示剂。 B.与甲醛反应，滴定终点在9左右，可用酚酞作指示剂。 C.释放一个氢离子，相当于一个氨基（摩尔比1：1） D.简单快速，一般用于测定蛋白质的水解速度。
Leu、Ile、
含芳香环及杂环R基：Phe、 Trp、Pro
不带电荷的极性R基：Ser、Thr、 Asn、Gln、Tyr、Cys
极性R基氨基酸
带正电荷的极性R基：Lys、His、 Arg
带负电荷的极性R基：Asp、Glu
2、按R基的化学结构不同来分类
脂肪族氨基酸
含一氨基一羧基的 中性氨基酸： 含羟基的氨基酸： 含酰基的氨基酸：
Gly、Ala、Val、Leu、Ile、 Cys、Met
Ser、Thr、 Asn、Gln
含一氨基二羧基的 酸性氨基酸： 含二氨基一羧基的 碱性氨基酸：
Phe、Tyr
杂环族氨基酸： Trp、His、Pro
Asp、Glu Lys、Arg
三、氨基酸的理化性质
1、一般物理性质
2、化学性质
（1） 氨基参加的反应