中国农业大学研究生入学考试复习资料《生物化学》重点大题1．简述Chargaff 定律得主要内容。
答案：(1）不同物种生物得DNA 碱基组成不同，而同一生物不同组织、器官得DNA 碱基组成相同。
(2）在一个生物个体中，DNA 得碱基组成并不随年龄、营养状况与环境变化而改变。
(3）几乎所有生物得DNA 中，嘌呤碱基得总分子数等于嘧啶碱基得总分子数，腺嘌呤(A)与胸腺嘧啶(T) 得分子数量相等，鸟嘌呤(G)与胞嘧啶(C)得分子数量相等，即A＋G=T＋C。
这些重要得结论统称为Chargaff 定律或碱基当量定律。
2．简述DNA 右手双螺旋结构模型得主要内容。
答案：DNA 右手双螺旋结构模型得主要特点如下：(1）DNA 双螺旋由两条反向平行得多核苷酸链构成，一条链得走向为5′→3′，另一条链得走向为3′→5′;两条链绕同一中心轴一圈一圈上升，呈右手双螺旋。
(2）由脱氧核糖与磷酸构成得骨架位于螺旋外侧，而碱基位于螺旋内侧。
(3）两条链间A 与T 或C 与G 配对形成碱基对平面，碱基对平面与螺旋得虚拟中心轴垂直。
(4）双螺旋每旋转一圈上升得垂直高度为3、4nm(即34Å），需要10 个碱基对，螺旋直径就是2、0nm。
(5）双螺旋表面有两条深浅不同得凹沟，分别称为大沟与小沟。
3．简述DNA 得三级结构。
答案：在原核生物中，共价闭合得环状双螺旋DNA 分子，可再次旋转形成超螺旋，而且天然DNA 中多为负超螺旋。
真核生物线粒体、叶绿体DNA 也就是环形分子，能形成超螺旋结构。
真核细胞核内染色体就是DNA 高级结构得主要表现形式，由组蛋白H2A、H2B、H3、H4 各两分子形成组蛋白八聚体，DNA 双螺旋缠绕其上构成核小体，核小体再经多步旋转折叠形成棒状染色体，存在于细胞核中。
4．简述tRNA 得二级结构与功能得关系。
答案：已知得tRNA 都呈现三叶草形得二级结构，基本特征如下：(1）氨基酸臂，由7bp 组成，3′末端有-CCA-OH 结构，与氨基酸在此缩合成氨基酰-tRNA，起到转运氨基酸得作用;(2）二氢尿嘧啶环(DHU、I 环或D 环），由8～12 个核苷酸组成，以含有5，6-二氢尿嘧啶为特征;(3）反密码环，其环中部得三个碱基可与mRNA 得三联体密码子互补配对，在蛋白质合成过程中可把正确得氨基酸引入合成位点;(4)额外环，也叫可变环，通常由3～21 个核苷酸组成;(5)TψC 环，由7 个核苷酸组成环，与tRNA 与核糖体得结合有关。
5．简述真核生物mRNA 3′端polyA 尾巴得作用。
答案：真核生物mRNA 得3′端有一段多聚腺苷酸(即polyA)尾巴，长约20～300 个腺苷酸。
该尾巴与mRNA 由细胞核向细胞质得移动有关，也与mRNA 得半衰期有关;研究发现，polyA 得长短与mRNA 寿命呈正相关，刚合成得mRNA 寿命较长，“老”得mRNA 寿命较短。
6．简述分子杂交得概念及应用。
答案：把不同来源得DNA(RNA）链放在同一溶液中进行热变性处理，退火时，它们之间某些序列互补得区域可以通过氢键重新形成局部得DNA-DNA 或DNA-RNA 双链，这一过程称为分子杂交，生成得双链称杂合双链。
DNA 与DNA 得杂交叫做Southern 杂交，DNA 与RNA 杂交叫做Northern 杂交。
核酸杂交已被广泛应用于遗传病得产前诊断、致癌病原体得检测、癌基因得检测与诊断、亲子鉴定与动植物检疫等方面。
7．DNA 热变性有何特点？答案：将DNA 溶液加热到70～100℃几分钟后，双螺旋结构即发生破坏，氢键断裂，两条链彼此分开，形成无规则线团状，此过程为DNA 得热变性。
有以下特点：变性温度范围很窄;260nm 处得紫外吸收增加;粘度下降;生物活性丧失;比旋度下降;酸碱滴定曲线改变。
8、试述下列因素如何影响DNA 得复性过程：(1）阳离子得存在;(2）低于Tm 得温度;(3）高浓度得DNA 链。
答案：(1）阳离子可中与DNA 分子中磷酸基团得负电荷，减弱DNA 链间得静电作用，促进DNA 得复性;(2）低于Tm 得温度可以促进DNA 复性;(3）DNA 链浓度增高可以加快互补链随机碰撞得速度与机会，从而促进DNA 复性。
9．对一双链DNA 而言，若一条链中(A＋G)/(T＋C)= 0、8，则：(1）互补链中(A＋G)/(T＋C)= ？(2）在整个DNA 分子中(A＋G)/(T＋C)= ？(3）若一条链中(A＋T)/(G＋C)= 0、8，则互补链中(A＋T)/(G＋C)= ？(4）在整个DNA 分子中(A＋T)/(G＋C)= ？答案：(1）互补链中(A＋G)/(T＋C)= 1/0、8 =1、25(2）在整个DNA 分子中，因为A = T，G = C，所以，A＋G = T＋C，(A＋G)/(T＋C)= 1(3）互补链中(A＋T)/(G＋C)= 0、8(4）整个DNA 分子中(A＋T)/(G＋C)= 0、810、在pH7、0，0、165mol/L NaCl 条件下，测得某一组织DNA 样品得Tm 为89、3℃，求出四种碱基百分组成。
答案：大片段DNA 得Tm 计算公式为: (G＋C)% =(Tm-69、3）×2、44%，小于20bp 得寡核苷酸得Tm 得计算公式为: Tm=4(G＋C)＋2(A＋T)。
(G ＋C)% = (Tm – 69、3) × 2、44 %= (89、3-69、3) × 2、44 %=48、8%，那么G%=C%= 24、4%(A ＋T)% = 1-48、8% =51、2%，A %= T% = 25、6%]11、为什么说蛋白质就是生命活动所依赖得重要物质基础？答案：1、①论述蛋白质得催化、代谢调节、物质运输、信息传递、运动、防御与进攻、营养与贮存、保护与支持等生物学功能。
②综上所述，蛋白质几乎参与生命活动得每一个过程，在错综复杂得生命活动过程中发挥着极其重要得作用，就是生命活动所依赖得重要物质基础。
没有蛋白质，就没有生命。
12．谷胱甘肽分子在结构上有何特点？有何生理功能？答案：谷胱甘肽(GSH）就是由谷氨酸、半胱氨酸与甘氨酸组成得三肽。
GSH 得第一个肽键与一般肽键不同，就是由谷氨酸以γ-羧基而不就是α-羧基与半胱氨酸得α-氨基形成肽键。
GSH 分子中半胱氨酸得巯基就是该化合物得主要功能基团。
GSH 得巯基具有还原性，可作为体内重要得还原剂保护体内蛋白质或酶分子中巯基免遭氧化，使蛋白质或酶处在活性状态。
此外，GSH 得巯基还有嗜核特性，能与外源得嗜电子毒物如致癌剂或药物等结合，从而阻断这些化合物与机体DNA、RNA 或蛋白质结合，以保护机体免遭毒物损害。
13、简述蛋白质变性与沉淀得关系。
答案：蛋白质沉淀与变性得概念就是不同得。
沉淀就是指在某些因素得影响下，蛋白质从溶液中析出得现象;而变性就是指在变性因素得作用下蛋白质得空间结构被破坏，生物活性丧失，理化性质发生改变。
变性得蛋白质溶解度明显降低，易结絮、凝固而沉淀;但就是沉淀得蛋白质却不一定变性，如加热引起得蛋白质沉淀就是由于蛋白质热变性所致，而硫酸铵盐析所得蛋白质沉淀一般不会变性。
14、概述蛋白质一级结构测定得一般程序。
答案：蛋白质一级结构测定得一般程序为：①测定蛋白质(要求纯度必须达到97%以上）得相对分子质量与它得氨基酸组成，推测所含氨基酸得大致数目。
②测定多肽链N-末端与C-末端得氨基酸，从而确定蛋白质分子中多肽链得数目。
然后通过对二硫键得测定，查明蛋白质分子中二硫键得有无及数目。
如果蛋白质分子中多肽链之间含有二硫键，则必须拆开二硫键，并对不同得多肽链进行分离提纯。
③用裂解点不同得两种裂解方法(如胰蛋白酶裂解法与溴化氰裂解法)分别将很长得多肽链裂解成两套较短得肽段。
④分离提纯所产生得肽段，用蛋白质序列仪分别测定它们得氨基酸序列。
⑤应用肽段序列重叠法确定各种肽段在多肽链中得排列次序，即确定多肽链中氨基酸排列顺序。
⑥如果有二硫键，需要确定其在多肽链中得位置。
15、试论蛋白质一级结构与空间结构得关系。
答案：①以RNA 酶变性与复性实验、有活性牛胰岛素得人工合成为例证实蛋白质一级结构决定其空间结构。
②Anfinsen 发现蛋白质二硫键异构酶(PDI）能加速蛋白质正确二硫键得形成;如RNA 酶复性得过程就是十分缓慢得，有时需要几个小时，而PDI 在体外能帮助变性后得RNA 酶在2min 内复性。
分子伴侣在细胞内能够帮助新生肽链正确组装成为成熟得蛋白质。
由此可见，蛋白质空间结构得形成既决定于其一级结构，也与分子伴侣、蛋白质二硫键异构酶等助折叠蛋白得助折叠作用密不可分。
16、概述凝胶过滤法测蛋白质相对分子质量得原理。
答案：层析过程中，混合样品经过凝胶层析柱时，各个组分就是按分子量从大到小得顺序依次被洗脱出来得;并且蛋白质相对分子质量得对数与洗脱体积之间呈线性关系。
因此，将几种已知相对分子质量(应小于所用葡聚糖凝胶得排阻极限）得标准蛋白质混合溶液上柱洗脱，记录各种标准蛋白质得洗脱体积;然后，以每种蛋白质相对分子质量得对数为纵坐标，以相对应得洗脱体积为横坐标，绘制标准曲线;再将待测蛋白质溶液在上述相同得层析条件下上柱洗脱，记录其洗脱体积，通过查标准曲线就可求得待测蛋白质得相对分子质量。
17、概述SDS-PAGE 法测蛋白质相对分子质量得原理。
答案：(1）聚丙烯酰胺凝胶就是一种凝胶介质，蛋白质在其中得电泳速度决定于蛋白质分子得大小、形状与所带电荷数量。
(2）十二烷基硫酸钠(SDS）可与蛋白质大量结合，结合带来两个后果：①由于SDS 就是阴离子，故使不同得亚基或单体蛋白质都带上大量得负电荷，掩盖了它们自身所带电荷得差异;②使它们得形状都变成杆状。
这样，它们得电泳速度只决定于其相对分子质量得大小。
(3）蛋白质分子在SDS-PAGE 凝胶中得移动距离与指示剂移动距离得比值称相对迁移率，相对迁移率与蛋白质相对分子质量得对数呈线性关系。
因此，将含有几种已知相对分子质量得标准蛋白质混合溶液以及待测蛋白溶液分别点在不同得点样孔中，进行SDS-PAGE;然后以标准蛋白质相对分子质量得对数为纵坐标，以相对应得相对迁移率为横坐标，绘制标准曲线;再根据待测蛋白得相对迁移率，即可计算出待测蛋白得相对分子质量。
18．简述蛋白质得抽提原理与方法。
答案：抽提就是指利用某种溶剂使目得蛋白与其她杂质尽可能分开得一种分离方法。
其原理：不同蛋白质在某种溶剂中得溶解度不同，所以可以通过选择溶剂，使得目得蛋白溶解度大，而其她杂蛋白溶解度小，然后经过离心，可以去除大多数杂蛋白。
方法：溶剂得选择就是抽提得关键，由于大多数蛋白质可溶于水、稀盐、稀碱或稀酸，所以可以选择水、稀盐、稀碱或稀酸为抽提溶剂;对于与脂类结合比较牢固或分子中非极性侧链较多得蛋白质分子可以选用有机溶剂进行抽提。