细胞活力检测
细胞活性检测 – MTT、XTT法
• MTT-黄色染料 ↓被活体细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶还原 • 形成蓝紫色结晶-甲瓒 ↓DMSO溶解 检测OD570(OD630作为背景参照） 细胞质 线粒体 细胞核 cell
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最常见应用类型ELISA（酶联免疫吸附试验）实验
反应原理 阳性样品
阴性样品
加入底物
显色反应
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DNA、RNA或蛋白浓度检测
DNA双螺旋中碱基 蛋白质酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸成分含量
A = a*c*l a = 物质消光系数 c = 浓度 l= 光径（0.5mm或者1mm）
决定上 样体积
SMP软件自动给出 DNA浓度：OD260=1表示
50 µg/ml双链DNA(dsDNA)
DNA纯度：纯度计算(OD260/OD280)
21/02/2014
目前中国市场主要几个酶标仪厂家
产品线丰富（高中低，Multi-mode 11、Single-mode 9） 新产品推出速度快（Paradigm、I3+ MinMax 、I3+ Scanlater） 品牌知名度高、市场占有率大 MD主要竞争对手（Multi-mode 8、Single-mode 10） 新产品推出紧随MD（如Cytation3对应I3、Neo对应 Paradigm ） 产地瑞士、在欧洲及北美有较高知名度 （Multi-mode 3、Single-mode 3） 最近无新产品推出，进入中国较早，在东北地区用户较多 主要产品非酶标仪（Multi-mode 3、Single-mode 10） 最近无心产品推出 具有专利Alpha技术，但没有型号支持HTRF技术（认证） 主要产品非酶标仪（Multi-mode 4、Single-mode 2） 多功能酶标仪（覆盖全波长）仅一款VF，只有四功能 无最新产品问世
物质最佳吸收波长
不同物质有不同吸收峰，有些实验检测物质需要更宽的波长 范围
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全波长带来优势——ELISA不同颜色需不同波长 酶决定底物类型
碱性磷酸酶（AP） 常用底物：PNPP 405nm 特点：本底低，灵敏度高，较昂贵 辣根过氧化物酶(HRP) 底物：ABTS 410/650nm OPD 492nm TMB 450nm 特点：常用，灵敏度不如AP系统
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酶标仪能做什么？
凡是与光信号相关的实验、需要高通量、需要节省试 剂的实验 且可以转移到微孔板中液体物质 都可以考虑使用微孔板检测仪（酶标仪）进行信号检 测！
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Agenda
• 酶标仪工作原理及应用范围 • 光吸收检测技术原理及常见应用 • 荧光检测技术原理、分类及常见应用 • 化学分光技术检测原理及常见应用 • Alpha技术特点
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DNA纯品: OD260/OD280 = 1.8
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酶活力分析
酶活性分析：就是指在一定条件下，通过连续 测定酶的吸光值，从而达到动态监测酶活性的 一个过程。
• 乳酸脱氢酶（ LDH ）活 性检测 • β-半乳糖苷酶检测 • 血清心肌酶活性检测 • 脱氢酶活性检测
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酶标仪常见技术和应用
尹迪
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酶标仪与分光光度计的不同？
1:通量上 支持6、12、24、48、96、384孔板，高端酶标仪 可达到3456孔板
2:功能上 单功能酶标仪（吸收光、荧光、化学发光） 多功能酶标仪
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酶标仪工作原理
• 工作原理为一台升级版的分光光度计
1.紫外可见分光光度计 2.可见分光光度计 3.紫外分光光度计 4.荧光分光光度计 5.近红外分光光度计 6.红外分光光度计 7.双光束紫外可见分光光度计 不同物质对 特点波长光 吸收值
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光吸收的基本检测类型
•应的产物产生的颜色变化（450nm） 酶联免疫吸附试验（ELISA）
• 浊度检测: 检测样品中微颗粒产生的光的散射 细菌的生长（600nm）
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光波长范围
多数低端单功能酶标仪光谱范围（400-750nm） 中、高端单功能或多功能光谱范围（200-1000nm）
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酶标仪——多功能微孔板读板机（仪）
学名：微孔读板机（仪） Microplate Reader 俗称：国内俗称酶标仪，因早期主要用于酶联免疫检 测（ELISA），故久之习称为酶标仪
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光吸收检测常见应用
利用光吸收原理最常见的几种生物学实验 DNA/RNA含量检测 常用于快速检测质粒DNA浓度 ELISA（酶联免疫吸附试验）检测 方法多（间接法、竞争法、双抗夹心法等）、应用广 细胞活力检测 MTT、XTT等 酶活动力学检测