知识点一：微生物简介
1.概念：是一切肉眼看不见或看不清楚的微小生物 的
总称。
2.分类
细胞结构 无细胞 结构
有细胞 结构
核结构 微生物类群
无核 病毒、亚病毒（拟病毒、类 病毒、朊病毒）
原核
古细菌、真细菌、 放线菌、蓝细菌
真核
酵母菌、霉菌、 藻类、原生动物
细菌
真菌
蘑菇
灵芝
木耳
酵母菌
青霉
毛霉
芽孢：
有些细菌在一定的条件下，细胞里形成一个椭圆形的 休眠体，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高 温等恶劣的环境有很强的抵抗力。例如，有的细菌的芽 孢，煮沸3小时以后才死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘 散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又 可以萌发，形成一个细菌.
答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固 后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置， 既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以 防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。
4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅 在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来 培养微生物吗？为什么？
答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之 间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板 培养微生物。
菌落：
• 单个或少数细菌在固 体培养基上大量繁殖 时，就会形成一个肉 眼可见的，具有一定 形态结构的子细胞群 体，叫做菌落。
菌落是鉴定菌种的重要依据。
知识点二：培养基
1．培养基的类型及作用
划分标 准
物理性 质
化学成 分
用 途
培养基种类
特点
液体培养基 半固体培养基
固体培养基
不加凝固剂 加凝固剂，如琼脂
1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时， 才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的 温度？
答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶， 感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时， 就可以进行倒平板了。
2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？
答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物 污染培养基。
3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？
天然培养基 合成培养基
含化学成分不明确的天然 物质
培养基成分明确(用化学成 分已知的化学物质配成)
选择培养基
允许特定种类的微生物生 长，同时抑制或阻止其他 微生物生长
根据微生物的代谢特点， 鉴别培养基 在培养基中加入某种指示
剂或化学药品
用途
工业生产 观察微生物的运动、分类鉴定 微生物的分离、鉴定、活菌计数 、保藏菌种
pH要适宜：
细菌pH为6.5–7.5; 放线菌pH为7.5–8.5; 真菌;pH5.0–6.0
培养基的营养物质及作用
营养物质
作用
举例
碳源
提供碳元素（有机碳源还能提供 无机碳源：CO2、NaHCO3
能量）
有机碳源：糖类、脂肪酸、
花生粉饼、石油
氮源
提供氮元素，主要用于合成蛋白 分子态氮、氨、铵盐、硝酸 质、核酸以及含氮的代谢产物 盐、尿素、牛肉膏、蛋白胨
（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。
3 .利用酒精消毒时，酒精浓度是不是越高 越好？
高浓度酒精能将细菌表面的蛋白质凝 固，并形成一层保护膜，阻止酒精进入细 菌体内，因而不能将细菌彻底杀死。
酒精浓度低于70%，虽可进入细菌体 内，但不能将细菌彻底杀死。只有70%75%的酒精即能顺利地进入到细菌体内， 又能有效地将细菌体内的蛋白质凝固，因 而可彻底杀死细菌。
无菌操作泛指在培养微生物的操作 中，所有防止杂菌污染的方法。
2.消毒与灭菌
思考：
1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物 被其他外来微生物污染外，还有什么目的？ 无菌技术还能有效避免操作者自身被微生 物感染。
2.请你判断以下材料或用具是否需要消 毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。
（1） 培养细菌用的培养基与培养皿 （2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管 （3） 实验操作者的双手
知识点四： 制备牛肉膏蛋白胨 固体培养基
配制牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤及注意事项: (1)步骤：计算―→称量―→溶化―→灭菌―→
倒平板 (2)注意事项: ①倒平板的温度一般在50℃左右适宜，温度过高
会烫手，过低培养基又会凝固。 ②平板需倒置，这样既可使培养基表面的水分更
好地挥发，又可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成 污染。
等
生长因子 微生物生长不可缺少的微量有机 主要包括维生素、氨基酸和
物，一般是酶和核酸的组成成分。碱基等
无机盐 水
细胞内的组成成分，生理调节物 质，某些化能自养菌的能源，酶 的激活剂,包括大量元素和微量 元素
在生物体内含量很高，在低等生 物内含量更高
知识点三：无菌技术
1.无菌技术的概念（成功的关键）
工业生产
分类、鉴别
培养、分离出特定微生物，如培 养酵母菌和霉菌，可在培养基中 加入青霉素；培养金黄色葡萄球 菌，可在培养基中加入高浓度食 盐
鉴别不同种类的微生物，如用伊 红—美蓝培养基鉴别饮用水或乳制 品中是否有大肠杆菌(若有，菌落 呈深紫色，并带有金属光泽)
培养基的营养物质
不管哪种培养基，一般都含有水、碳源、和氮 源、 无机盐等营养物质，另外还需要满足微生物 生长对pH、特殊营养物质,例如:生长因子(即细菌 生长必需，而自身不能合成的化合物,如维生素、 某些氨基酸、பைடு நூலகம்呤、嘧啶)以及氧气、二氧化碳、 渗透压等的要求。
知识点五： 大肠杆菌的纯化
微生物的接种技术：
接种：将有菌的材料或纯粹的菌种转移到另一 无菌的培养基上的过程。 平板划线接种：主要用于分离、纯化培养
稀释涂布接种：主要用于分离菌种并计数
纯化大肠杆菌的操作过程及注意事项： (1)原理：在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长 成单个的菌落，这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。 (2)方法：平板划线法、稀释涂布平板法。 ①平板划线法：平板划线法中细菌的分离和稀释过程发生在 接种环在固体平板表面上的移动划线过程中。在线的开始部分， 微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最 后可能形成纯种的单个菌落。(如下图)
1.为什么在操作的第一步以及每次划线之 前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然 需要灼烧接种环吗？为什么？
答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接 种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划 线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后， 接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种 环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而 通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数 目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧 接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避 免细菌污染环境和感染操作者。