个
18 18 18 18 18 18 18 18 18
无菌数 No bacillus number
个
7 8 10 11 12 11 12 13 11
无菌率 No bacillus efficiency
%
38． 9 44． 4 55． 6 61． 1 66． 7 61． 1 66． 7 72． 2 61． 1
安徽农业科学，Journal of Anhui Agri． Sci． 2011，39（28） ：17156 － 17157
责任编辑 宋平 责任校对 况玲玲
核桃外植体的组织培养
杨海波1 ，王 娟1 ，周鹏程1 ，孟利峰1 ，高 涛2
（ 1． 山西省农业科学院果树研究所，山西太谷 030815； 2． 山西农业大学园艺学院，山西太谷 030801）
时间 Time min
3 4 6 3 4 6 3 4 6
表 2 不同浓度 HgCl2 处理对外植体 b 灭菌效果的影响 Table 2 Effect of different concentration HgCl2 on explant b sterilization
接种数 Inoculation number
摘要 ［目的］研究核桃组织培养与快速繁殖的方法。［方法］以“金薄香”1 号带腋芽的茎段为外植体进行试管繁殖。［结果］腋芽萌生 最佳培养基： DKW + BA 1． 5 mg / L； 分化及继代最佳培养基： DKW + BA 0． 4 mg / L + IBA 0． 01 mg / L； 生根最佳培养基： 1 /2DKW + IBA 1． 0 mg /L，不过生根率只有 23． 3% ，效果不太理想； 二步生根法效果不错，生根率可达到 36． 7%。［结论］该研究筛选获得适宜“金薄香”1 号 核桃快繁的最佳培养条件，为建立核桃快繁体系、扩大核桃苗繁育规模奠定基础。 关键词 核桃； 外植体； 组织培养 中图分类号 S 664． 1 文献标识码 A 文章编号 0517 － 6611（ 2011） 28 － 17156 － 02
褐化数 Browning number
个
2 3 3 5 4 4 5 5 6
褐变率 Browning efficiency
%
28． 6 37． 5 30． 0 45． 5 33． 3 36． 4 41． 7 33． 3 54． 5
2． 2 继代、增殖培养 将诱导产生的芽苗转接到 9 种增殖 培养基上培养 25 d，结果表明，试管苗在增殖培养基①上的 增殖效果最好，芽苗生长健壮，增殖系数高。在随后的几代 培养过程中，有些试管苗出现了玻璃化现象。针对此现象， 将 BA 浓度由 0． 5 mg / L 调整成 0． 4 mg / L。结果，该增殖培养 基对克服玻璃苗有明显的效果，玻璃苗逐渐减少至完全消 失，且增殖效果更好。因此，对“金薄香”1 号核桃进行增殖 培养的最佳方案为 DKW + BA 0． 4 mg / L + IBA 0． 01 mg / L。 2． 3 生根培养 2． 3． 1 一步生根法。由表 3 可知，试管苗在生根培养基② 上的生根效果最佳，10 d 开始生根，25 d 后根系发育良好，地 上部分生长正常，生根率为 23． 3% 。
Tissue Culture of Walnut Explant YANG Hai-bo et al （ Pomology Institute，Shanxi Academy of Agricultural Sciences，Taigu，Shanxi 030815） Abstract ［Objective］The aim was to study the method of tissue culture and rapid propagation of walnut． ［Method］The explants were collected from stem with axillary buds，the tube propagation of Jinboxiang1 was studied． ［Result］ The optimum culture medium for germination of the axillary buds： DKW + BA 1． 5 mg / L； for differentiation and subculture： DKW + BA 0． 4 mg / L + IBA 0． 01 mg / L； for rooting： 1 /2 DKW + IBA 1． 0 mg / L，however，rooting efficiency was only 23． 3% ，this result was not satisfied． The method of taking root with two steps was ideal，and taking root efficiency reached to 36． 7% ． ［Conclusion］ The optimal culture conditions of rapid propagation of Jinboxiang 1 walnut were selected，which laid the foundation for constructing rapid propagation and amplifying walnut planting scale． Key words Walnut； Explant； Tissue culture
表 1 不同浓度 HgCl2 处理对外植体 a 灭菌效果的影响 Table 1 Effect of different concentration HgCl2 on explant a sterilization
HgCl2 浓度 HgCl2 concentration % 0． 050
0． 075
0． 100
核桃（ Juglans regia L． ） 古称胡桃，属胡桃科胡桃属，原产 于欧洲东南部及亚洲西部，我国是核桃原产地之一［1 －2］。由 于核桃是重要的坚果和木本油料树种，具有很高的经济价 值，且位居世界四大干果（ 核桃、扁桃、腰果、榛子） 之首，以其 很高的经济、生态及社会效益在世界各地广泛栽培。我国核 桃栽培历史悠久，分布广泛，种质资源极为丰富［3］。但由于 核桃扦插不易生根，嫁接又因接口处易发生氧化褐变而难以 成活，从而限制了核桃苗木的生产和推广。植物组织培养技 术在众多植物良种繁育上的成功应用为核桃良种的快速繁 殖提供了一条有效途径。近几年，中外研究人员在核桃离体 培养及试管苗生根等方面虽取得了一定的进展，但初接种污 染高，外植体分化较难，离体培养物褐化、退化严重，增殖系 数低等问题一直未能得到很好解决［4］。试验以“金薄香”1 号核桃当年生带腋芽的茎段为材料，研究了从初培、继代增 殖到生根各阶段的培养基成分及培养条件，试图建立一套较 完整的核桃无菌培养体系。这套体系的建立对“金薄香”1 号核桃苗的繁殖具有重大的现实意义。 1 材料与方法 1． 1 材料 1． 1． 1 外植体采集与处理。外植体采集从腋芽萌动到枝条停 止生长均可，一般以本地 5 月初 ～ 7 月初为宜。外植体材料取 自山西省农科院果树研究所核桃园，供试品种为“金薄香”1 号。取材的时间多在晴天中午进行。因枝条暴露在强烈阳光 下，有利于杀菌［5］。选取当年生半木质化新梢，特别注意枝上 有饱满的芽子，去掉顶部的嫩枝及枝上的叶子，将枝条剪成 3 ～ 4 cm 带芽的茎段。先用洗洁精水漂洗 10 min 左右，再用自 来水冲洗至将洗洁精基本清除，然后泡在无菌水中备用。 1． 1． 2 培养基。基本培养基为 DKW［6］。初培、继代培养
褐化数 Browning number
个
4 3 4 6 5 5 7 5
褐变率 Browning efficiency
%
36． 4 33． 3 40． 0 50． 0 38． 5 35． 7 77． 8 62． 5
HgCl2 浓度 HgCl2 concentratio100
作者简介 杨海波（ 1978 － ） ，男，山西太谷人，助理研究员，硕士，从事 果树育种及栽培生理研究，E-mail： gssjstgb@ 163． com。
收稿日期 2011-07-04
基： DKW 基本培养基中加入 3． 0% 白糖、0． 5% 琼脂，再附加 不同浓度的 6-BA（ 6-苄基氨基嘌呤） 和 IBA（ 吲哚丁酸） 。其 中，初培培养基： DKW + BA 1． 5 mg / L。增殖培养基中，6-BA 分 3 个浓度梯度： 0． 5、1． 0、1． 5 mg / L； IBA 分 3 个浓度梯度： 0． 01、0． 03、0． 05 mg / L，组合成 9 种培养基： ①DKW + BA 0． 5 mg / L + IBA 0． 01 mg / L； ②1 /2DKW + BA 0． 5 mg / L + IBA 0． 03 mg / L； ③1 /2DKW + BA 0． 5 mg / L + IBA 0． 05 mg / L； ④DKW + BA 1． 0 mg / L + IBA 0． 01 mg / L； ⑤DKW + BA 1． 0 mg / L + IBA 0． 03 mg / L； ⑥DKW + BA 1． 0 mg / L + IBA 0． 05 mg / L； ⑦DKW + BA 1． 5 mg / L + IBA 0． 01 mg / L； ⑧DKW + BA 1． 5 mg / L + IBA 0． 03 mg / L； ⑨DKW + BA 1． 5 mg / L + IBA 0． 05 mg / L。生根培 养基： 1 /2DKW（ 只有大量元素减半） 培养基中加入 2． 0% 白糖、 0． 5% 琼脂，再加入不同浓度的 IBA。一步生根法有 3 种生根 培养基类型： ①1 /2DKW + IBA 0． 5 mg / L； ②1 /2DKW + IBA 1． 0 mg / L； ③1 /2DKW + IBA 1． 5 mg / L。二步生根法 IBA 溶 液有 2 个浓度： 50、100 mg / L，浸泡时间分别为 15、30 min，然 后接种在 1 /2DKW 无激素培养基上。 1． 2 方法 在超净工作台上，先用无菌水冲洗 2 次，70% 酒精处 理 1 次，时间为 30 s。然后分别用 0． 050% 、0． 075% 、0． 100% HgCl2 浸泡 3、4、6 min。外植体的粗度用 a、b 表示（ a 表示直径≤0． 5 cm 的茎段； b 表示直径 ＞0． 5 cm 的茎段） 。最后用无菌水清洗 4 ～ 5 次，剪掉茎段下方一小截，避免 HgCl2 渗入而影响营养吸收，然后 接种在初培培养基上，生长 20 d 后观察其灭菌效果。将在初培 培养基上萌发的芽苗转接到 9 种增殖培养基上培养 25 d，观察芽 的增殖情况。选取生长健壮、苗高 2 ～ 4 cm 的增殖苗，转接到 3 种生根培养基上诱导生根（ 一步生根法） ，或分别用 50 和 100 mg / L的 IBA 溶液浸泡15 和30 min，然后接种到1/2DKW 无激素 培养基上（ 二步生根法） 。培养温度 22 ～ 26 ℃ ，每天光照时 间为 10 ～ 14 h。培养 25 d 后观察其生根情况。 2 结果与分析 2． 1 初代培养 无菌体系的建立对于整个试验是非常重要