举例说明黄酮的提取分离方法组长：崔宁组员：翟雪王璐璐冯子涵赵子惠罗春雨刘红成1.提取方法1.1热水提取法热水提取法一般仅限于提取苷类. 在提取过程中要考虑加水量、浸泡时间、煎煮时间及煎煮次数等因素. 此工艺成本低、安全,适合于工业化大生产。
以水做溶剂,同时提高浸提温度、延长浸提时间和增加液料比(60倍) ,可以明显提高芦丁的产率。
实例桑叶：采用热水提取法测定桑叶中各有效成分含量，发现黄酮类化合物含量为1%以上,其中霜后桑叶黄酮类化合物含量最高为1.54% ,其次是晚秋桑叶,春季桑芽和后期桑叶含量最低。
甘草：过去甘草黄酮的提取主要为水提法,其主要原理通过甘草粉与水按一定配比,加热混合至80～95 ℃浸提甘草粉,利用甘草黄酮的水溶性进而提取甘草黄酮。
此法虽然要求设备简单,但因提取杂质多、提取时间长、提取液存放易腐败变质、后续过滤操作困难、收率较低等缺点,现已不常使用。
1.2有机溶剂萃取法其原理是利用黄酮类化合物与混入的杂质极性不同,选用不同的溶剂萃取。
常用的有机溶剂有甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯等,一般采取乙醇为提取溶剂。
高浓度的乙醇(如90 %～95 %) 适于提取苷元,浓度60 %左右的乙醇适于提取苷类。
提取次数一般为2～4 次,提取方法有热回流提取和冷浸提取两种方式。
实例桑叶：使用乙醇提取桑叶中总黄酮的最佳工艺条件为：乙醇的浓度为70%，料液比为1:15，在80℃的条件下浸泡3h。
使用多种有机溶剂提取发现桑叶中黄酮类化合物的最佳提取溶剂是60%丙酮。
西芹：使用无水乙醇为提取剂，按西芹鲜重与提取剂的比例(W/ V) 1∶2 ,在80 ℃下回流提取2～4h ,制备西芹总黄酮。
银杏叶：从银杏叶中提取总黄酮时, 随乙醇浓度的增加总黄酮提取率逐渐上升, 当乙醇浓度增至70% 时提取率最高, 之后反而下降, 故选用70% 的乙醇作浸提剂最佳。
生姜：生姜黄酮提取用40倍原料的90%甲醇溶液, 在60 ~ 65℃条件下提取4 h 为其优化组合, 而其试验组合中以用40倍原料的75%甲醇溶液,在60~ 65 ℃条件下提取2 h的提取效果最好。
1.3碱性水或碱性稀醇提取法黄酮类化合物大多具有酚羟基, 易溶于碱水, 酸化后又可沉淀析出。
其原因一是由于黄酮酚羟基的酸性, 二是由于黄酮母核在碱性条件下开环, 形成2′-羟基查耳酮, 极性增大而溶解。
因此可用碱性水( 碳酸钠、氢氧化钠、氢氧化钙水溶液) 或碱性稀醇( 50 %乙醇) 浸出, 浸出液经酸化后析出黄酮类化合物。
实例菊花：各取5g干菊花4份, ，在80℃恒温水浴分别以pH为8,9,10,11的NaOH溶液分两次温浸1h和0.5h。
pH降低时.由于提取不完全.含量较低；pH为11时,虽然黄酮含量较高，但含有的NaOH溶质较多，而造成分析结果出现干扰，因此pH-=10时的提取效果最好。
槐米：槐米粉碎, 加入5倍量的水, 用石灰水调pH 值8~ 9, 加入3% 的硼砂, 抽滤, 反复提取3次。
滤液用稀盐酸调pH 值2~ 3, 静置6 h, 析出沉淀, 过滤, 滤渣干燥, 即得粗芦丁, 精制可得精制芦丁, 纯度可达99% 以上。
1.4 微波萃取法微波萃取技术是物料吸收微波能后通过偶极子旋转和离子传导两种方式同时加热,加剧了体系中分子的碰撞频率,使黄酮分子容易从药材内部扩散到萃取溶剂中,大大缩短了加热时间,提高了萃取效率,尤其适合极性分子的萃取。
原理是利用不同组分吸收微波能力的差异, 使基体物质的某些区域或萃取体系中的某些组分被选择性加热, 从而使得被萃取物质从基体或体系中分离, 进入到介电常数较小、微波吸收能力相对较差的萃取剂中, 并达到较高的产率。
实例桑叶：微波萃取黄酮类成分的最佳工艺条件为: 70%乙醇12倍量,于60℃萃取20 min,其中提取溶剂对结果有显著影响。
应用微波萃取法比传统醇提法分别高55%和32%。
微波萃取法在提取时间、溶剂用量及得率等方面明显优于传统的醇提法,适于工业生产。
芦篙叶：用芦篙叶为原料提取黄酮类化合物。
通过正交试验, 得出最优化提取条件为: 功率200W,时间10min, 料液比1g:25ml,pH 值10。
提取次数为2次。
在此条件下, 黄酮类化合物得率为2. 53%。
并且, 随着料液比的增大, 提取率增大。
但到一定程度时, 得率有所降低。
可能是大量溶剂水吸收了微波导致提取温度降低的缘故。
藜蒿：利用微波辅助从藜蒿中提取黄酮类化合物的方法以75% 乙醇作为提取溶剂, 密封条件下, 功率200W, 料液比1g:25ml辐射时间20 s/次x3次, 提取率最高。
1.5 超声波提取法超声波提取是利用超声波空化作用加速植物有效成分浸出的提取。
其基本原理是利用超声波的空化作用,破坏植物的细胞,使溶剂易于渗入细胞内,同时超声波的强烈振动能给植物和溶剂传递巨大的能量,使它们做高速的运动,加速细胞内物质的释放和溶解以及有效成分的浸出,大大提高了提取效率.实例桑叶：从桑叶中提取总黄酮，实验显示超声波提取法能够提高醇浸提黄酮含量,其值约等于常规醇提含量的2倍左右,达到省时、高效的目的。
进行三水平三因素的正交试验结果表明,温度40 ℃,时间35min ,料液比1/ 30 ,乙醇浓度60 %及回流lh为最佳提取工艺。
菊花：菊花用水浸泡，超声波提取，抽滤，将滤液定容，测定光密度值，然后查标准曲线计算总黄酮类物质的含量.超声波法正交实验结果表明,菊花中提取黄酮类化合物的最佳条件为60%乙醇浸泡24h，物料比为1:20，超声波时间为45min，总黄酮类物质的提取量为7.86%.甘草：利用超声波法从甘草中提取黄酮,通过对超声功率、超声时间、提取温度及固液比等因素的研究发现最佳提取条件为超声功率1 000 W,超声时间75(25 ,25 ,25)min ,提取温度40 ℃,固液比1∶8 ;最佳提取条件下黄酮含量为3. 612 %。
1.6 超临界流体提取法超临界流体提取技术系指以超临界流体为萃取剂,从液体或固体中萃取有效成分并进行分离的方法。
可作为SF的物质很多,其中,二氧化碳是首选的超临界流体。
随着国际上超临界流体提取技术迅速发展,用该技术提取植物中的活性成分愈加广泛。
实例金银花：采用超临界CO2 萃取技术萃取金银花中总黄酮，考察压力、温度、时间和夹带剂对总黄酮提取率的影响, 并同热醇浸泡提取法、微波提取法和超声提取法的得率进行比较; 得到超临界CO2 萃取最佳条件为: 压力30Mpa、温度40℃、时间120min 和夹带剂用量4.5ml/ g 时, 提取得率最高。
同热醇浸泡提取法、微波提取法和超声提取法相比,其总黄酮得率分别为8.92%、9.56%、9.32%、和10.24%; 超临界CO2 提取方法同其他方法相比, 得率高、时间短, 是一种合适的提取金银花中总黄酮的方法。
甘草：超临界CO2 萃取法对甘草粗黄酮提取率比常规溶制法高2. 2倍。
采用超临界萃取法从银杏叶中提取黄酮类化合物, 实验表明, 超临界CO2 法可有效提取银杏叶中的黄酮类化合物, 其中黄酮含量达28%以上, 高于欧洲EGb761质量标准( 24% ); 且黄酮得率、回收率都较高(分别> 4%和> 64% ), 产品中无有害物质残留, 银杏叶中的有毒物质银杏酚酸的含量得到较好控制(<35x10^-6).茵陈蒿:与溶剂提取法相比超临界二氧化碳萃取法具有操作简单、提取率高、后续分离易于进行、品质较高等特点。
100 g原料, 当pH值为9~ 10的70%乙醇做夹带剂, 用量600m l、萃取压力30MPa、萃取温度55℃, CO2 流量20 L /h、萃取时间150 m in时, 茵陈蒿总黄酮的提取率最高, 为3. 875%。
1.7 双水相萃取分离法双水相萃取技术( ATPE) 分离原理是物质在双水相体系中的选择性分配，它是利用待分离物质在两相间具有分配系数，通过温度诱导相分离实现分离目的。
由于天然植物中所含的化合物众多, 而双水相萃取技术具有较高的选择性和专一性,因此利用这些技术有希望为从天然植物中提取有效药用成分开辟一条新的思路. 实例黄芩（qin）:利用双水相体系分离纯化黄芩苷，通过实验选择非离子表面活性剂聚乙二醇(PEG)-K2HPO3-H2O双水相体系的成相条件及温度，pH值，聚合物的分子量等因素对黄芩苷得率的影响。
结果发现黄芩苷在最佳分离条件下的萃取率为98.6％。
证明按本文方法所形成双水相体系，操作简便，萃取率高，方法重现性好，可适用工业化生产。
葛根素: 采用聚乙二醇(PEG)/(NH4)2SO4双水相体系时,最大的分配系数可达148.2,最大收率99.09%。
采用丙酮/K2HPO4双水相体系时,最大的分配系数可达36.7143,最大收率99.55%,葛根素大部分被分配在丙酮相(上相)中。
研究葛根素在乙醇/硫酸铵两水相体系中的分配特性及其影响因素,在其最佳萃取条件时,最大的分配系数可达16.30,回收率94.33%,葛根素分配在上相。
1.8 大孔吸附树脂提取法吸附树脂是近10 年来发展起来的一类有机分子聚合物吸附剂,其具有物理化学稳定性高、吸附选择性独特、不受无机物存在的影响、再生简便、解吸条件温和,使用周期长、宜于构成闭路循环,节省费用等优点,现已广泛用于黄酮类物质的提取。
实例银杏叶：应用D101 吸附树脂精制制得含黄酮约38%的GBE 产品。
也有用ZTC 澄清剂沉降, 在酸性条件下吸附, 制得GBE 成品的黄酮含量稳定在26% 以上, 内酯稳定在6% 以上。
比较研究表明, AB - 8树脂对银杏叶黄酮是一种优良的吸附剂, 国内首次报道了D101和聚酰胺树脂( 1B 1)混合使用纯化银杏叶黄酮醇苷,制得黄酮醇苷纯度大于24%的银杏叶提取物。
金菊双花：筛选金菊双花总黄酮的最佳提取与纯化工艺。
结果最佳提取工艺为8倍量55% 乙醇、100%水浴、每次1 h回流提取2 次, 再结合D101大孔吸附树脂纯化, 水、30% 乙醇、70% 乙醇梯度洗脱, 收集70%乙醇洗脱部分浓缩干燥, 测定黄酮含量为62. 7% 。
枇杷叶：枇杷叶煎煮液经大孔树脂吸附, 用70% 乙醇洗脱, 洗脱液浓缩后用乙醇溶解, 沉淀去杂后减压浓缩, 经真空干燥, 得到黄色粉末, 其黄酮含量43% 以上。
1.9 超滤法提取本法是以超滤膜两侧的压力差为驱动力, 凡含有两种或两种以上溶质的溶液, 通过滤膜分离流动时,其中分子体积小的溶质,经滤膜流出,而分子体积较大的溶质,不能通过滤膜而被截留.它可以有效的阤去提取液中蛋白质、多糖、高分子单宁以及部分原花色素等杂质。
它的特点是在嘸温下进行、除杂效率高、分析过程中无相变、有效成分理化性能稳定,结果重复性好,准确性高, 超滤装置可反复使用，但同时对超膜的要求也相当高。