二乙酰
培养基变红
葡萄糖发酵形成丙酮酸后的不同代谢途径
常用细菌生化反应试验
9
蛋白质类代谢试验
靛基质试验 硫化氢试验 苯丙氨酸脱氨试验 尿素酶试验
常用细菌生化反应试验
10
靛基质试验
原理：细菌产生色氨酸酶，可分解蛋白胨中的 色氨酸，生成靛基质（吲哚），靛基质与试剂 对二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰靛基质。
伏－普试验（V-P试验）
原理：细菌发酵葡萄糖，产生丙酮酸，丙酮 酸脱羧生成乙酰甲基甲醇，在碱性环境中乙 酰甲基甲醇被氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白 胨中的精氨酸所含的胍基结合，生成红色化 合物。
培养基：葡萄糖蛋白胨水
结果：加入试剂后，培养基呈现红色：+
培养基不变色： －
应用：是肠道杆菌常用的生化反应试验，主 要用于区别大肠肝菌和产气肠杆菌
常用细菌生化反应试验
常用细菌生化反应试验
1
糖醇类代谢试验
糖发酵试验 甲基红试验 V-P试验 葡萄糖氧化／发酵试验（O/F试验） 七叶苷水解试验 Β－半乳糖苷渗透酶试验
常用细菌生化反应试验2来自糖发酵试验原理
多糖－→单糖－→丙酮酸－→酸性产物
(或产酸产气)－→pH↓ －→指示剂呈酸性 变色(若产气者有气泡出现)
结果：加入试剂后培养基呈现绿色为阳
性
应用：多用于肠常用道细菌杆生化反菌应试的验 鉴定
14
苯丙氨酸脱氨试验原理
苯丙氨酸 苯丙氨酸脱氨酶
苯丙酮酸 10％三氯化铁
绿色化合物
常用细菌生化反应试验
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尿素酶试验
原理：产生脲酶的细菌，能水解尿素生 成氨和CO2，氨使培养基呈碱性变色。 培养基：尿素培养基 试剂：酚红指示剂 结果：培养基变红：+
培养基：蛋白胨水
试剂：靛基质试剂（含对二甲基氨基苯甲醛）
结果：加入试剂后，培养基出现红色液面：+ 培养基液面为黄色： －
应用：用于肠道杆菌的鉴定
常用细菌生化反应试验
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靛基质试验原理
色氨酸
色氨酸酶
靛基质 （吲哚）
对二甲基氨基苯甲 醛 玫瑰靛基质 （玫瑰吲哚）
常用细菌生化反应试验
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硫化氢试验
原理：细菌分解蛋白质中的含硫氨基酸， 生成硫化氢，硫化氢与培养基中的铁盐 或铅盐结合生成黑色络合物。
常用细菌生化反应试验
6
葡萄糖
甲基红试验
丙酮酸 大量混合酸
pH降至4.4以下
甲基红试剂
培养基变红
常用细菌生化反应试验
7
葡萄糖
V－P试验
丙酮酸
脱酸
乙酰甲基甲醇
V-P试剂
二乙酰
培养基变红
常用细菌生化反应试验
8
大量混合酸
pH降至4.4以下 甲基红试剂
培养基变红
葡萄糖 丙酮酸
脱酸
乙酰甲基甲醇 V-P试剂
培养基：含硫酸亚铁或醋酸铅的培养基
结果：培养基 变黑 为阳性，不变黑为阴 性
应用：常用于肠道杆菌的鉴定
常用细菌生化反应试验
13
苯丙氨酸脱氨实验
原理：细菌的具有的苯丙氨酸脱氨酶， 可使培养基中的苯丙氨酸脱氨，形成苯 丙酮酸，后者与三氯化铁作用，形成绿 色化合物。
培养基：苯丙氨酸琼脂
试剂：10％三氯化铁
20
甲基红试验
常用细菌生化反应试验
21
常用靛细菌基生化质反应试试验验
22
血清学试验
血清学鉴定： 用已知抗体鉴定未知的细菌或标本中的 抗原 血清学诊断： 用已知抗原检测血清中的特异性抗体
常用细菌生化反应试验
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血清学鉴定
试剂（诊断血清） ：含抗体
检测对象：特异性抗原
方法：直接凝集试验（玻片法）、荚膜肿
胀伤寒试杆验菌诊断血清 + 待检测细菌
（含抗伤寒杆菌抗体）
细菌凝集
玻片凝集试验：阳性
报告：检出伤寒杆菌
常用细菌生化反应试验
24
培养基：糖发酵管、半固体发酵管、微 量发酵管
试剂：酚红、溴甲酚紫等
结果:培养基呈酸性变色
应用：观察细菌对糖度的 分解情况，常 用于肠道杆菌的鉴定
常用细菌生化反应试验
3
糖发酵试验结果判断
反应现象
结果描述
酸性变色、有气泡 分解××糖产酸、产气
酸性变色、无气泡
分解××糖产酸、不产 气
培养基不变色
不分解××糖
常用细菌生化反应试验
4
甲基红试验
原理：细菌分解糖，产生丙酮酸，进一 步生成大量混合酸，使培养基pH维持在 4.4以下，加入甲基红后，使甲基红呈现 红色反应。此为甲基红试验阳性。 培养基：葡萄糖蛋白胨水 试剂：甲基红试剂 结果：加入试剂后，培养基呈现红色：+
培养基不变色： － 应用：是肠道杆菌常用的生化反应试验， 主要用于区别大常用肠细菌肝生化反菌应试和验 产气肠杆菌 5
培养基不变色－ 应用：肠杆菌科属间鉴定
常用细菌生化反应试验
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尿素酶试验原理
尿素 尿素酶
氨+CO2
培养基pH升高
酚红呈碱性变色
常用细菌生化反应试验
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枸橼酸盐利用试验
原理：某些细菌能力利用培养基中的枸橼酸盐 作为唯一的碳源，也能利用其中的铵盐 作为唯
一碳源，细菌生长过程中分解枸橼酸盐产生碳 酸盐和分解铵盐生成的氨，使培养基变碱，是 指示剂呈碱性反应。
培养基：枸盐酸盐培养基
试剂：溴麝香草酚蓝（pH6.0以下呈黄色， pH7.6以上呈蓝色）
结果：培养基变蓝：+
培养基不变常用色细菌：生化－反应试验
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枸橼酸盐利用试验原理
培养基
枸橼酸盐
铵盐
碳酸盐
氨
培养基pH下降
溴麝香草酚蓝 呈碱性变色
培养基变蓝
常用细菌生化反应试验
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糖发酵试验
常用细菌生化反应试验