★铜绿假单胞菌检查流程图
黄绿色 菌膜 灰白色 湿润
十六烷三甲基溴化铵平板
SCDLP培养基
粉红/ 紫红色
氧化酶试验
盐酸层呈粉紫色 氯仿层呈蓝绿色
N2
绿脓菌素试验
硝酸盐还原产气试验
明胶液化 试验
明胶液化
明胶培养基（高层）
金黄色葡萄球菌
• 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus） 为革兰氏阳性球菌，呈葡萄状排列，无 芽胞，无荚膜，能分解甘露醇，血浆凝 固酶阳性。 该菌是葡萄球菌中对人类致病力最强的一种， 能引起人体局部化脓性病灶，严重时可导致 败血症。
化妆品卫生标准
微生物检验方法
• GB/T 7918.1-1987 化妆品微生物标准检验方法 总则
• 菌落总数 （化妆品卫生规范-2007年） GB/T 7918.2-1987 化妆品微生物标准检验方法 细菌总数测定
• 粪大肠菌群：GB/T 7918.3-1987 化妆品微生物标准检验方法 粪大肠菌群 • 铜绿假单胞菌 （化妆品卫生规范-2007年） GB/T 7918.4-1987 化妆品微生物标准检验方法 绿脓杆菌 • 金黄色葡萄球菌 GB/T 7918.5-1987 化妆品微生物标准检验方 法 金黄色葡萄球菌 • 霉菌和酵母菌：（化妆品卫生规范-2007年）
检验结果正确的保证
• 设备方面： • 恒温培养设备 • 高压灭菌器 • 超净工作台 • 均质器 • 天平 • 显微镜
• 材料要求： • 无菌容器及溶液； • 材料充足； • 培养基的制备与质量控制；
• 人员操作方面： • 无菌操作，避免污染； • 一定专业技术
• 日常维护： • 设备的计量与保证； • 超净台及时清洁与杀菌； • 检验后材料的及时处理； • 环境卫生。
SCDLP培养基或 7.5%NaCl肉汤
Baird Parker’s 或血琼脂
配培 养基 和稀 释液
供试 的 处理
增 菌 培 养
24±2h 36±1℃
分 离 纯 化
24~48h 36±1℃ 特征菌落
无菌落或无特征菌落
书写检验 记录单
最终结 果判断
革兰染色、镜检→ 生化试验:血浆凝固酶试验 甘露醇发酵试验
供试液 的制备
混合平板 的制备
细菌的培 养
书写检验 记录单
数据 处理
检查结果、 观察与计数
• 化妆品中防腐剂抑制细菌的生长. • 含卵磷脂、吐温80 营养琼脂培养基进行 中和。对尼泊金类、苯甲酸类、六氯酚 类等有效，但对卡松类的防腐剂的中和 效果有限。
• 卡松的中和剂半胱氨酸,可较好的中和卡 松的抑菌效果。因此,检测时不同的防腐 剂加入不同的中和剂
• 为便于区别化妆品中的颗粒与菌落，可在每 100mL 卵磷脂吐温 80 营养琼脂中加入 1mL 0.5％的 TTC 溶液，如有细菌存在，培养后 菌落呈红色，而化妆品的颗粒颜色无变化。
• 在膏霜类化妆品中,微生物都是吸附或附 着于颗粒状的原料中,检测时不易洗脱下 来,因此,需要验证检测方法的有效性。
★金黄色葡萄球菌检查流程图
灰/黑色
Baird Parker’s平板 甘露醇发酵试验
血浆凝块
液态血浆 血浆凝固酶试验
霉菌和酵母菌
• 霉菌和酵母菌数测定（Determination of molds and yeast count）是指化妆品检样 在一定条件下培养后，1g 或 1mL 化妆品 中所污染的活的霉菌和酵母菌数量，藉 以判明化妆品被霉菌和酵母菌污染程度 及其一般卫生状况。
3、检验量 检验时，应分别从两个包装单位以上的 样品中共取10g 或10mL。包装量小于20g 的样品，采样量可适当增加样品包装数 量。
样品的制备 液体样品 膏、霜、乳剂半固体状样品 固体样品
样品的制备注意事项 无菌容器、材料及操作 样品的均一性
样品的检验及保管 及时检验 样品应放在室温阴凉干燥处 样品先进行微生物检验，再做其他指标 须防止微生物的再污染和扩散 如检出粪大肠菌群或其它致病菌，自报告发 出之日起该菌种及被检样品应保存一个月
SCDLP培养基
十六烷三甲基 溴化铵琼脂
配培 养基 和稀 释液
供试 液的 制备
增 菌 培 养
18~24h
36±1℃
分 离 纯 化
18~24h
灰白色、扁 平、周围有 水溶性蓝绿 色素
特征菌落
36±1℃
无菌落或无特征菌落
书写检验 记录单
最终结 果判断
革兰染色、镜检→ 氧化酶试验 绿脓菌素试验 生化试验 硝酸盐还原试验 42℃生长试验 明胶液化试验
粪大肠菌群
• 粪大肠菌群（Fecal coliforms）• 系一群需 氧及兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌， 在 44.5℃±0.5℃培养 24h～48h 能发酵乳 糖产酸并产气。
该菌直接来自粪便，是重要的卫生指示菌。
双倍胆盐乳糖M
产酸：黄色 产气：气泡
EMB琼脂
配培 养基 和稀 释液
供试 液的 制备
增 菌 培 养
44 ±0.5℃ 24~28h
检查 结果 判断
分离培养
产酸产气
蛋白胨水 培养
44 ±0.5℃ 24±2h 靛基质
36±1 ℃ 18~24h
特 征 菌 落
不产酸不产气
书写检验 记录单
最终结 果判断
液面玫瑰红色
紫黑色
★粪大肠菌群检查流程图
铜绿假单胞菌
• 铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa） 属于假单胞菌属，为革兰氏阴性杆菌， 氧化酶阳性，能产生绿脓菌素。此外还 能液化明胶，还原硝酸盐为亚硝酸盐， 在 42℃±1℃条件下能生长。 该菌对人有致病力，可使伤处化脓，引起败血 症等。
化妆品微生物检验
• 化妆品因含有水分，油脂， 蛋白质，多元醇等，为微 生物的生长创造了良好的 条件，造成产品变质。 • 为了抑制微生物的繁殖和 消费者使用过程中的产品 污染，往往在化妆品中加 入防腐剂，但不能过量。
• 因此，化妆品一方面为微 生物的生长繁殖提供了良 好的环境；另一方面由于 防腐剂的应用又可抑制微 生物的生长。
总则
适用范围
• 微生物检验的基本要求 • 微生物检验样品的采集、保存及制备
样品的采集
总则
1、具有代表性 随机抽取相应数量的包装单位。 应从批的整体中各部位抽取，如从四角+中 间；分上、中、下层；或上、中上、中、中 下、下层；梅花点式等。
所有接触样品的工具、容器都必须保持清洁。
JJF1070－2005 定量包装 商品净含量计量检验规则 • 2、抽/采样数量 • 按照抽样批及抽样方案
• 人、机、样、法、环、溯
菌落总数检验
• 菌落总数（Aerobic bacterial count）是指化妆品 检样经过处理，在一定条件下培养后（如培养 基成分、培养温度、培养时间、pH 值、需氧性 质等），1g（1mL）检样中所含菌落的总数。 所得结果只包括一群本方法规定的条件下生长 的嗜中温的需氧性菌落总数。 测定菌落总数便于判明样品被细菌污染的程 度，是对样品进行卫生学总评价的综合依据。