DNA琼脂糖凝胶电泳
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实验原理
琼脂糖为链状多糖 →绳状琼脂糖束→大网孔型
凝胶 ——分离、鉴定、纯化DNA 影响DNA迁移率的因素：DNA分子的大小、构
象，凝胶浓度，电压，电泳缓冲液的组成 缓冲液pH>DNA Pi，DNA带负电荷，迁移率与
分子量对数成反比 DNA分子构象影响迁移率：共价闭环DNA>线
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铺胶
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凝胶凝固后取出梳子
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加缓冲液
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准备样品
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点样
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电泳
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注意观察溴酚蓝染液的迁移
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紫外灯下观察电泳结果
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照相
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状DNA>开环DNA
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不同浓度琼脂糖分离DNA分子的范围
琼脂糖浓度（%） 0.3 0.6 0.7 0.9 1.2 1.5 2.0
分离范围（kb） 5-60 1-20 0.8-10 0.5-7 0.4-6 0.2-4 0.1-3
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琼脂糖凝胶中DNA的观察
溴化乙锭（EB）—DNA：紫外光下 红色荧光
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主要实验器材
电泳仪
缓冲液 琼脂糖
凝胶槽
梳子
电泳槽
溴酚蓝
取液器
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电泳槽结构
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操作步骤
琼脂糖凝胶的制备：溶化，冷却，EB 凝胶板的制备：加梳子，倒胶 样品的制备：样品+1/5体积溴酚蓝 加样：加样端为负极（黑） 电泳：5V/cm 观察：紫外灯下观察，照相8
准备胶槽
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凝胶冷却至50°C，加EB至终浓度0.5μg/ml