电泳前勿加热，用20mM NaCl缓冲液稀
释DNA。
DNA链巨大，常规 在脉冲凝胶电泳上个分析。 凝胶电泳不合适。
电泳时
ladder 扭曲
配胶的缓冲液与电泳 同时配制，电泳缓冲液高
的缓冲液不是同
出胶的1-2mm即可。
时配制。
电泳时电压过高
电泳时电压不应超过 20V/cm。
琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用
琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用
口腔1402
琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用
琼脂糖凝胶电泳是常用的用于分离、鉴定DNA、 RNA分子混合物的方法，主要是应用琼脂糖凝胶 作为支持物的电泳法，借助琼脂糖凝胶的分子筛 作用，核酸片段因其分子量或者分子形状的不同， 电泳速度有差异而分离，利用DNA、RNA分子在 泳动时的电荷效应和分子筛效应，达到分离混合 物的目的。 与其他支持物电泳最主要区别是：它兼有“分子 筛”和“电泳”的双重作用。
1、DNA的制备. ⑴ 适合分离大片段DNA. 琼脂糖凝胶约可区分相差100bp的DNA片段,其分辨率虽比聚 丙烯酰胺凝胶低,但它制备容易,分离范围广,尤其适于分离大 片段DNA.普通琼脂糖凝胶分离DNA的范围为0.2-20kb,利用 脉冲电泳,可分离高达10^7bp的DNA片段.
⑵可提取大分子DNA 利用琼脂糖凝胶制成凝胶块提取基因组DNA能够获得足够大 其应用
凝胶准备
胶床准备
铺胶
静置
胶床置于电泳槽中 加电泳缓冲液 拔梳子 上样
电泳 取出凝胶 拍照
琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用
琼脂糖凝胶电泳结果分析
结果初步分析 数量分析：条带的宽度，
荧光的亮度。 质量分析：纯度
分子量
影响因素： DNA分子的大小：实验证明，DNA片段迁移距离与其 分子量的对数成反比； 琼脂糖的浓度：一定大小的DNA片段在不同浓度的琼 脂凝胶中，电泳迁移率不相同； DNA分子的构型：不同构型的DNA在琼脂糖凝胶中的 电泳速度差别较大
凝胶电泳结果分析
常见问题 原因
DNA条 带模 糊
DNA降解 电泳缓冲液陈旧
对策
实验过程中应避免核酸酶 污染。
电泳缓冲液多次使用后， 离子强度降低，PH值上 升，缓冲能力减弱，从 而影响电泳效果。TBE 建议使用10就更换。
所用电泳条件不合适 电泳时电压不应超过 20V/cm，温度<30℃， 巨大DNA链电泳， 温度<15℃，检查所 用电泳缓冲液的缓冲能 力，注意经常更换。
2、PCR产物在琼脂糖凝胶上进行的电泳检测。
3、琼脂糖在其他方面的应用 ⑴ 、琼脂糖在免疫扩散法中的应用。 ⑵ 琼脂糖在双链DNA探针的合成方法中的作用。
DNA上样量过多 减少凝胶中DNA上样量
DNA含盐过高 有蛋白污染
电泳前通过乙醇沉淀去除 多余盐分。
电泳前酚抽提去除蛋白。
有蛋白污染
电泳前酚抽提去除蛋白。
DNA变性
电泳前勿加热，用20mM NaCl缓冲液稀 释DNA。
出现片状 拖带பைடு நூலகம்涂 抹带
PCR扩增时出现涂抹 减少酶量或更换酶，减少 带、片状带或地毯样 dNTP浓度，适当降低 带，往往由于酶量多 Mg2+浓度，增加模板量， 或者酶的质量差， 减少循环次数。 dNTP浓度高，Mg2+ 浓度高，退火温度过 低，循环次数多。
不规则 电泳条件不合适 DNA带 迁移
DNA变性
带弱或无 DNA上样量不够 DNA带
电泳时电压不应超过 20V/cm，温度<30℃， 巨大DNA链电泳， 温度<15℃，检查所 用电泳缓冲液的缓冲能 力，注意经常更换。
电泳前勿加热，用20mM NaCl缓冲液稀
释DNA。
增加DNA上样量，聚丙烯 酰胺凝胶电泳比琼脂糖 电泳灵敏度高，上样量 可适当降低。
DNA降解
实验过程中应避免核酸酶 污染。
DNA跑出凝胶
缩短电泳时间，降低电压， 增加凝胶浓度。
EB染色的DNA所用 应用短波长（254nm）的紫
光源不合适
外光源。
DNA带缺 DNA跑出凝胶 尖
分子大小相近的 DNA带不易分辨
缩短电泳时间，降低电压， 增加凝胶浓度。
增加电泳时间，核准正确 凝胶浓度
DNA变性