45 50 60
白酒用量 （ B） /倍
4 6 8
提取时间 （ C） /h 3 4 5
2． 4 人参皂苷 Ｒg1 的含量测定 2． 4． 1 色 谱 条 件 色 谱 柱： WondaSil C18 Superb （ 4． 6 mm × 250 mm，5 μm） ； 流动相： 乙腈-0． 05% 磷酸 溶 液 （ 22 ∶ 78 ） ； 检 测 波 长 205 nm； 流 速 1． 0 mL·min － 1 ，进样量： 20 μL； 柱温： 30 ℃ 。在此条 件下人参皂苷 Ｒg1 可与其他峰完全分离，保留时间约 为 20． 8 min，理论板数不低于 5 000。 2． 4． 2 溶液制备 ①对照品溶液制备： 精密称取人参 皂苷 Ｒg1 对照品 2． 1 mg 置 10 mL 量瓶中，加甲醇制成 每毫升含 0． 21 mg 人参皂苷 Ｒg1 的对照品溶液； ②供试 品溶液的制备： 精密吸取十一方药酒 3． 0 mL，水浴蒸干 至无醇味，加水 15 mL 溶解，过滤，滤液用乙醚萃取 2 次，每次 10 mL，弃去乙醚液，水溶液用水饱和的正丁醇 萃取 3 次，每次 8 mL，合并正丁醇液，超声处理 30 min， 用 5% 氢氧化钠溶液洗涤两次，每次 10 mL，合并正丁醇 液，水浴蒸干，残渣用甲醇溶解于 25 mL 量瓶中，摇匀， 经孔径 0． 45 μm 微孔滤膜滤过，取续滤液。即得。 2． 4． 3 标准曲线绘制 精密吸取人参皂苷 Ｒg1 对照 品溶液各 0． 1，0． 4，0． 8，1． 2，1． 6，2． 0 mL，置 10 mL 量 瓶中，用 甲 醇 稀 释 至 刻 度，吸 取 上 述 溶 液，各 进 样 20 μL，连续进样 3 次。以浓度为横坐标，峰面积积分 值为纵坐标绘制工作曲线。回归方程为 Y = 3 237X + 323． 41，r = 0． 999 8，线 性 范 围 在 2． 1 ～ 42． 0 μg · mL － 1 ，呈良好的线性关系。 2． 4． 4 精密度实验 精密吸取人参皂苷 Ｒg1 对照品 溶液，连续进样 6 次，测定人参皂苷 Ｒg1 峰面积积分 值，其 ＲSD 为 1． 15% ，表明仪器精密度良好。 2． 4． 5 稳定性实验 取供试品溶液，分别于配制后 0，1，2，4，8，12，24 h 进样，供试品溶液 24 h 中峰面积 值无明显变化，ＲSD 为 0． 72% ，表明供试品溶液中人 参皂苷 Ｒg1 在 24 h 内稳定。 2． 4． 6 重复性实验 取同一批十一方药酒（ 批号 20120305） 样品 6 份，分别按供试品溶液制备方法操
ABSTＲACT Objective To optimize the reflux extraction process of shiyifang vinum． Methods The preparation technology of shiyifang vinum was optimized by adopting orthogonal test on concentration，wine quantity，reflux time as investigation factors and taking ginsenoside Ｒg1，content of chrysophanol，kaempferol and total extraction as references． Ｒesults
收稿日期 2013 － 01 － 30 修回日期 2013 － 04 － 08 基金 项 目 * 广 西 中 医 药 大 学 自 然 科 学 研 究 项 目 （ P2010028） 作者简介 莫小林（ 1974 － ） ，女，壮族，广西南宁人，副主 任药师，学 士，研 究 方 向： 制 剂 开 发 和 质 量 标 准 研 究。电 话： 0771 － 5645433，E-mail： moxiaolin@ 163． com。 通讯作者 伍小燕（ 1962 － ） ，女，广西全州人，主任药师， 学士，研究方向： 从事中药鉴定和质量标准研究。电话： 0771 － 5642936，E-mail： yxbwxy@ 163． com。
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Herald of Medicine Vol. 33 No. 1 January 2014
十一方药酒回流提取制备工艺优选*
莫小林1 ，伍小燕1 ，龚敏阳1 ，陈晓明1 ，谭冬冬2
（ 1． 广西中医药大学第一附属医院药剂科，南宁 530023； 2． 广西医科大学 2010 级药学 4 班，南宁 530023）
医药导报 2014 年 1 月第 33 卷第 1 期
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燥 3 h，移至干燥器中，冷却 30 min，迅速精密称定质 量，计算总固体量［2］。
表 1 正交实验因素水平表
Tab． 1 Levels and factors of orthogonal design
水平
1 2 3
白酒浓度 （ A） /%
作，进样 20 μL，测定峰面积积分值，计算人参皂苷 Ｒg1 的平均含量为 0． 258 mg·mL － 1 ，ＲSD 为 0． 90% 。 2． 4． 7 加样回收实验 采用加样回收法，精密吸取已 知含 量 的 同 一 批 号 （ 20120416 ） 样 品 6 份，每 份 1． 0 mL，分别加入浓度为 0． 583 mg·mL － 1 的人参皂苷 Ｒg1 对照品溶液 0． 4 mL，按供试品溶液的制备项下的 方法提取 并 测 定，计 算 回 收 率。结 果 平 均 回 收 率 为 96． 7% ，ＲSD 为 1． 68% 。 2． 5 大黄酚的含量测定 2． 5． 1 色 谱 条 件 色 谱 柱： WondaSil C18 Superb （ 4． 6 mm × 250 mm，5 μm） ； 流动相： 甲醇-0． 1% 磷酸 水 溶 液 （ 84 ∶ 16 ） ； 检 测 波 长 254 nm； 流 速 1． 0 mL·min － 1 ，进样量： 20 μL； 柱温： 30 ℃ 。保留时 间约为 13． 7 min，理论板数不低于 6 000。 2． 5． 2 溶液制备 ①对照品溶液制备： 精密称取大黄 酚对照品 0． 205 mg 置 10 mL 量瓶中，加甲醇制成每毫 升含 20． 5 μg 大黄酚的对照品溶液； ②供试品溶液的 制备： 精密吸取十一方药酒 3． 0 mL，水浴蒸干至无醇 味，加入 10% 盐酸溶液 20 mL，超声处理 30 min，用三 氯甲烷溶液萃取 3 次，每次 10 mL，合并三氯甲烷溶 液，加 2% 碳酸钠溶液洗涤，弃去碳酸钠液层，三氯甲 烷层用 20 mL 水洗涤，弃去水层，三氯甲烷层水浴挥 干，甲醇定容于 10 mL 量瓶中，摇匀，经孔径 0． 45 μm 微孔滤膜滤过，取续滤液。即得。 2． 5． 3 标准曲线绘制 精密吸取大黄酚对照品溶液 各 0． 1，0． 3，0． 8，1． 4，2． 0 mL，置 5 mL 量瓶，用甲醇稀 释至刻度，吸取上述溶液，各进样 20 μL，连续进样 3 次。以浓度为横坐标，峰面积积分值为纵坐标绘制工 作曲 线。 回 归 方 程 为 Y = 77 726X + 7 175． 1，r = 0． 999 9，线性范围在 0． 41 ～ 8． 20 μg·mL － 1 呈良好的 线性关系。 2． 5． 4 精密度实验 精密吸取大黄酚对照品溶液，重 复进样 6 次，测 定 大 黄 酚 峰 面 积 积 分 值，其 ＲSD 为 0． 79% 。 2． 5． 5 稳定性实验 取供试品溶液，分别在 0，1，4， 8，12，24 h 进样，每次 20 μL，供试品溶液 24 h 中峰面 积值无大变化，ＲSD 为 1． 06% ，表明供试品溶液中的 大黄酚在 24 h 内稳定。 2． 5． 6 重 复 性 实 验 取 同 一 批 样 品 （ 批 号： 20120305） ，平行制备大黄酚供试品溶液 6 份，分别进 样，每次 20 μL，测定峰面积积分值，计算大黄酚的平 均含量为 15． 1 μg·mL － 1 ，ＲSD 为 1． 53% 。 2． 5． 7 加样回收实验 精密吸取已知含量的同一批号 （ 20120416 ） 样 品 6 份，每 份 10． 0 mL，分 别 加 入
清洗器（ 昆山市超声仪器有限公司） 。 1． 2 试 药 人 参 皂 苷 Ｒg1 对 照 品 （ 批 号： 110703201027，含量 96． 3% ） ，大黄酚对照品 （ 批号： 110796201118，含量 99． 5% ） ，山 柰 素 对 照 品 （ 批 号 110861201209，含量 95． 9% ） 均购自中国食品药品检定研究 院。十一方药酒（ 每瓶 100 mL，批准文号： 桂药制字 Z01060025，批号： 20120305，20120416，20120518） 由广 西中医药大学第一附属医院制剂室制备。乙腈（ J． T． Baker，批 号： 12090072 ） 、甲 醇 （ J． T． Baker，批 号： 12125062） 、磷酸（ 天津市光复精细化工研究所，批号： 20110103） 均为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分 析纯。 2 方法与结果 2． 1 回流提取十一方药酒的正交实验设计 采用 L9 （ 33 ） 正交表进行正交设计，对白酒浓度、白酒用量、 提取时间进行考察，以人参皂苷 Ｒg1 含量、大黄酚含 量、山柰素 含 量 和 总 固 体 量 为 考 察 指 标，进 行 回 流 提 取，实验方案见表 1。 2． 2 样品溶液的制备 按处方量称取十一方药酒各 药材，按 L9 （ 33 ） 实验列号各条件分别回流提取，滤过， 定容至 1 000 mL，放置备用。 2． 3 总固体量的测定 精密量取各样品溶液 50 mL， 置已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴上蒸干，在 105 ℃ 干
的制备工艺选择提供参考。
关键词 十一方药酒； 人参皂苷 Ｒg1； 大黄酚； 山柰素； 正交实验
中图分类号 Ｒ286； Ｒ283
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
文献标识码 A
文章编号 1004 － 0781（ 2014） 01 － 0090 － 04