3. 0.85%生理盐水。 4. 被检血清，采自被检鸡的健康血清。
四、实验步骤
（一）血凝试验（HA）
1. 1~12孔加入50μl生理盐水; 2. 第1孔加50μl病毒悬液，倍比稀释到第10孔； 3. 1~12孔中加入1%的红细胞50μl； 4. 震荡后置37℃25~30min观察结果。 5. 病毒液的血凝价是1:2？。
如果血凝价为1:28，那么4个血凝单位就是将病 毒液进行1:26倍稀释
10/640= 1/26, 所以病毒原液取10μl，生理盐水取 630μl；
4个血凝单位病毒悬液体积：25μl /孔×12孔 =400μl。
孔号 稀释倍数 生理盐水
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1:21 1:22 1:23 1:24 1:25 1:26 1:27 1:28 1:29 1:210 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25
实验八 血凝和血凝抑制试验
（Hemagglutination and Hemagglutination Inhibition, HA and HI）
2013.12.11
能凝集红细胞的病原
禽流感病毒 新城疫病毒 传传染性支气管炎病毒（胰酶，磷脂酶C） EDS76 副鸡嗜血杆菌 鸡毒支原体
＝1:23为可疑
六、思考题
血凝和血凝抑制试验在兽医学中的应用。
细胞对照
HA HI
孔号 1 2 3 4 5 6 7 8 9
稀释倍数 1:21 1:22 1:23 1:24 1:25 1:26 1:27 1:28 1:29
生理盐水 50 50 50 50 50 50 50 50 50 病毒悬液 50 50 50 50 50 50 50 50 50 1%红细胞 50 50 50 50 50 50 50 50 50
Virus Cell
血清
25 50
被检血清 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 弃 25μl /
/
病毒悬液 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 /
1%RBC 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50
血凝抑制试验结果判定
（二）血凝抑制试验（HI）
➢当病毒悬液中加入特异性抗体时，这种 红细胞凝集的现象就被抑制，称红细胞 凝集抑制试验，即血凝抑制试验。
HI试验的原理图
三、实验材料
1. 鸡新城疫病毒：鸡新城疫弱毒株（Lasota） 接种鸡胚、收获尿囊液制备。
2. 鸡红细胞：采集健康鸡血液，以阿氏液抗凝， 以生理盐水洗涤3~5次，将血浆、白细胞等充 分洗去，用生理盐水配置成1%红细胞悬液使 用。
测定孔 RBC沉于孔底中心，呈纽扣状。(+)
凝集
（-）
血清对照孔：RBC沉于孔底，无自凝
病毒对照孔：凝集
RBC对照孔：无自凝
血凝抑制试验效价：呈完全血凝抑制时的最高 血清稀释度。
五、结果判定
血凝价是1:2？； 血凝抑制价是1:2？； 被检血清为阴还是阳性?
≥1:24为阳性 血凝抑制价 ＜1:22为阴性
10 RBC RBC
1:210
50 50 50 50 弃 5/0μl / 50 50 50
（二）血凝抑制试验（HI）
1. 1~11孔加入25μl生理盐水; 2. 第1孔加待检血清25μl，倍比稀释至第10孔; 3. 1~11孔加25μl 4个血凝单位的病毒悬液; 4. 1~12孔中每孔加入1%的红细胞50μl; 5. 震荡后置37℃25~30min观察结果; 6. 红细胞凝集100血凝和血凝抑制试验的原理。 实验操作步骤和结果判定。
血凝试验结果判定
++++
+++
++
+
-
血凝价：能使红细胞产生50%凝集的病毒最高 稀释度。
1:21 1:22 1:23 1:24 1:25 1:26 1: 27 1:28 1:29 1:210 1:211 1:212 Va Vb Vc Vd