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辛伐他汀降解实验研究

摘要目的探寻辛伐他汀在苛刻条件下的稳定性，并验证辛伐他汀的检验方法的可行性。

方法采用HPLC法对苛刻条件处理后辛伐他汀的含量与有关物质进行测定，并与原样进行对比分析。

结果含量项下连续进样5针标准峰面积的RSD为0.40%<1.0%，USP分离度洛伐他汀与辛伐他汀的分离度为5.7>3.0，EP分离度有关物质A与辛伐他汀分离度为5.9>4.0 结论上述HPLC法系统适应性良好。

辛伐他汀微粉前样品在氧化、酸解、碱解、高温、光照条件下不稳定。

在避光、高湿条件下，相对稳定。

关键字辛伐他汀，高效液相色谱，有关物质，降解目录一、仪器与试剂 (5)二、方法 (5)2.1溶液配制 (5)2.2高效液相色谱方法的建立 (5)2.3湿计含量和干计含量 (6)2.4杂质限度 (6)2.5系统适应性 (7)2.6 含量和有关物质 (7)三.结果 (9)3.1 系统适应性 (9)3.2 辛伐他汀降解实验结果 (9)四、结论 (11)五、附图 HPLC色谱图 (13)参考文献 (20)前言辛伐他汀(simvastatin)其药理作用是作为竞争性抑制剂抑制肝脏细胞内羟甲戊二酰辅酶A 还原酶(HMG-CoA reductase)活力, 限制HMG-CoA 向甲基二羟戊酸的转化, 从而减少内源总胆固醇的生物合成总量。

与相同剂量的洛伐他汀(lovastatin)、普伐他汀(pravastatin) 和氟伐他汀(fluvastatin) 等其他HMG-CoA 还原酶抑制剂相比, 辛伐他汀可以更有效地降低血清中的总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-cholesterol)。

辛伐他汀经口服后对肝脏有高度的选择性，其在肝脏中的浓度明显高于其他非靶性组织，辛伐他汀的大部分经肝组织吸收，主要作用在肝脏发挥，随后从胆汁中排泄。

只有低于5%口服剂量的辛伐他汀活性结构在外围中发现，而其中95%可与血浆蛋白结合。

本课题按辛伐他汀HPLC含量及有关物质降解实验方案，用辛伐他汀含量和有关物质检测方法来检测降解后的辛伐他汀（微粉前和微粉后），判断此HPLC方法是否适用于降解杂质的检测，是否具有稳定指示性，同时研究辛伐他汀（微粉前和微粉后）在酸，碱，光照，氧化，高湿，高温等条件下的稳定性，探索辛伐他汀（微粉前和微粉后）在这些条件下可能的降解趋势。

正文一.仪器与试剂名称级别批号/含量（若适用）来源磷酸分析级20121212 国药集团化学试剂有限公司磷酸二氢钾分析级20121024 国药集团化学试剂有限公司乙腈色谱级I669430303 MERCK双氧水分析级20121120 国药集团化学试剂有限公司0.1mol/LHCL 分级级20130524 本实验室配制0.1mol/LNaOH 分级级20130607 本实验室配制水纯化水每日新鲜本厂制备洛伐他汀标准品1101-1/98.9% 本厂标定辛伐他汀标准品1301/99.0%(USP)1301/99.2%(EP)本厂标定样品B2121148（微粉前）B2121148-M1（微粉后）本厂生产电子分析天平METTLER XP205 已校正METTLER XP6 已校正光照仪ATLAS SUNTEST XLS+ 已校正高效液相色谱仪Agilent 1260 已校正pH计METTLER S20 已校正色谱柱信息Supelco C18 ,4.6×33mm ,3µm PN：58977 实验室ID：D0148二.方法2.1溶液配制稀释剂： 0.01mol/L磷酸二氢钾（用磷酸调pH至4.0）-乙腈 = 40：60。

系统适应性溶液：取一定量的辛伐他汀和洛伐他汀对照品，加稀释剂配制成辛伐他汀浓度为1.5mg/ml、洛伐他汀浓度为0.015mg/ml的溶液。

标准溶液：精密称取辛伐他汀对照品75mg 至50ml容量瓶，用稀释剂溶解并稀释至刻度。

样品溶液：精密称取辛伐他汀样品75mg 至50ml容量瓶，用稀释剂溶解并稀释至刻度。

2.2高效液相色谱方法的建立2.2.1 检测波长的确定准确吸取25ug/ml样品溶液1ml，置于高效液相色谱进样瓶中．通过二极管阵列检测器(DAD)检测，在190nm～360nm区间进行DAD全波段扫描。

通过DAD扫描结果显示样品在238nm附近具有最大吸收，综合考虑确定238nm为高效液相色谱仪检测波长。

2.2.2 流动相的选择通过对流动相的筛选和优化，选择乙腈和稀磷酸作为流动相（1）乙腈和稀磷酸稀磷酸：精密量取1.0ml磷酸，加水稀释至1000ml。

2.2.3 色谱柱的选择C18柱是比较常用的色谱柱，它的优点是固定相稳定，可使用多种溶剂。

一般的C18柱PH值范围都在2-8，流动相的PH值范围广，另外从经济实用性及样品的分离效果方面C18柱较为可取，因此我们选用了C18柱。

2.2.4色谱系统色谱柱：Supelco 33 mm 4.6mm 3µm C18稀磷酸：精密量取1.0ml磷酸，加水稀释至1000ml。

流动相A：乙腈：稀磷酸= 50：50流动相B：精密量取1.0ml磷酸，加乙腈稀释至1000ml（0.1%磷酸V/V）。

时间(min) 流动相A（%V/V）流动相B（%V/V）0 100 04.5 100 04.6 95 58.0 25 7511.5 25 7511.6 100 013 100 0检测波长：238nm流速：3.0ml/min进样量：5µl2.3 湿计含量和干计含量进样系统适应性溶液，记录谱图：洛伐他汀相对保留时间约0.6，辛伐他汀相对保留时间为1.0，两者之间分离度应不得少于3.0，标准溶液重复进样5次的相对标准偏差应不得大于1.0%。

按下式计算辛伐他汀中C25H38O5的湿计含量：湿计含量%= ru×Cs×PrsCu式中：Cu ，Cs分别是样品溶液与标准溶液中的配制浓度（mg/ml）rs是标准溶液所对应的主峰响应值ru为样品溶液所对应的主峰响应值 P为对照品的含量，%干计含量计算公式：干计含量%=湿计含量% 1-干燥失重2.4杂质限度进样5µl样品溶液，记录色谱图，测量所有峰响应，按以下公式计算杂质含量：100(ri /rs)ri /rs分别为样品溶液所获色谱图中单个杂质和所有峰面积之和。

归一化计算：洛伐他汀和表洛伐他汀（杂质E+F）（注意—如果洛伐他汀和表洛伐他汀都存在，该方法不能完全分离，这两个杂质峰的RRT约为0.6，可以合并积分计算）；辛伐（羟基）酸（杂质A）、亚甲基辛伐（杂质G）、辛伐乙基酯（杂质B）、脱水辛伐（杂质C）、辛伐二聚物（杂质D）、其它单个未知杂质、总杂质(除杂质E+F)。

杂质限度为0.03%，如果单个杂质的平均计算值少于该限度，则在报告中标明（<0.03%）。

相对保留时间：杂质A约0.45 ~ 0.5；洛伐他汀（杂质E）和表洛伐他汀（杂质F）约0.60，杂质G约0.80，杂质B 2.2 ~ 2.3，杂质C约2.3 ~ 2.4，杂质D约3.4 ~ 3.8。

2.5系统适应性USP分离度溶液：称取1.53mg洛伐他汀，150.12mg辛伐他汀至100ml容量瓶中，用稀释剂溶解稀释至刻度。

EP分离度溶液：称取1.07mg洛伐他汀，1.16mg辛伐他汀至50ml容量瓶中，用稀释剂溶解稀释至刻度。

鉴别溶液：称取EP鉴别0.98mg加入1.0ml稀释剂溶解。

标准溶液：精密称取辛伐他汀对照品75.75mg 至50ml容量瓶，用稀释剂溶解并稀释至刻度。

按照SOP描述中的方法，当色谱系统平衡后，进样空白、EP分离度溶液、USP 分离度溶液、5针标准溶液，记录峰响应值，结果见表12.6 含量和有关物质2.6.1 原样测定准确称取辛伐他汀样品微粉前B2121148：75.00mg、74.39mg，微粉后B2121148-M1：75.12mg、75.01mg分别置于50ml容量瓶中，用稀释剂溶解定容至刻度。

同时评价干燥失重。