体外诊断试剂临床评价报告产品名称：25-羟基维生素D测定试剂盒（免疫荧光法）标本类型：全血标本-EDTA K抗凝(参比与考核一致)方案版本：V1.1方案日期：2019年08月01日试验时间：2019年09月至2019年10月试验地点：*********产品注册申请人（盖章）：*********有限公司注册申请联系人：注册申请联系人电话：QQ22602207报告版本：V1.1报告日期：2019年10月18日保密声明本报告中所包含的所有信息的所有权归*********有限公司。

因此，仅提供给研究者和监督管理部门等相关的医疗机构审阅。

在未得到申办者书面批准的情况下，严禁将任何信息告知与本研究无关的第三方。

研究摘要目的：评价*********有限公司生产的25-羟基维生素D测定试剂盒（免疫荧光法）用于25-羟基维生素D检测时，其诊断检测能力与已上市的同类试剂盒无差异。

方法：本次临床试验采用同步盲法对比试验。

结果：*********医院共检测112例受试者样本，按方案剔除标准共剔除样本0例，其中0例为线性范围外标本，0例为离群值标本，剔除率为0.00%，最终纳入分析112例，其中男性54例，女性58例，平均年龄43.46±27.77岁。

本次临床试验结果的Pearson相关系数接近1，说明两种试剂的相关关系越密切。

回归方程的截距（a）的95%CI包括0，斜率（b）接近1，说明两种试剂的一致性比较好。

根据说明书中对准确度允许偏差的标准，医学决定水平处偏倚均在允许偏差范围内。

考核试剂与参比试剂检测浓度的差值Bland-Altman散点图显示：两种试剂检测浓度差值为0.0377±1.1505ng/mL（均值±标准差），两种试剂检测浓度差值的均值±1.96SD范围在-2.2173ng/mL到2.2927ng/mL之间。

超出置信区间的百分比为：3.57%。

考核试剂与参比试剂检测浓度比值的Bland-Altman散点图显示：两种试剂检测浓度比值为1.0001±0.0264（均值±标准差），两种试剂检测浓度比值的均值±1.96SD范围在0.9483到1.0519之间。

超出置信区间的百分比为：0.00%。

经计算，考核试剂定性检测结果参考范围外标本符合率为93.94%（90.18%,96.32%)，参考范围内标本符合率为100.00%（98.43%,100.00%)，总符合率为98.21%（95.63%,99.28%)。

进行Kappa一致性分析，Kappa值k=0.9563。

对含干扰物质样本的检测，考核试剂和参比试剂检测结果无差异，表明考核试剂和参比试剂的抗干扰性能有较好的一致性。

结论：本中心在本次临床试验共检测112例有效样本，通过对考核试剂和参比试剂检测浓度的Pearson相关系数、回归方程、Bland-Altman图进行分析，显示两种试剂检测全血25-羟基维生素D浓度有良好的一致性。

符合率及Kappa 一致性分析显示考核试剂与参比试剂对结果的判断有良好的一致性。

一、基本内容1.1引言1.1.1临床试验背景25-羟基维生素D是维生素D在体内的主要存在形式。

维生素D为类固醇衍生物，属于脂溶性维生素。

维生素D主要由人体皮肤经紫外线照射后合成。

少部分从食物或补品中摄入。

维生素D不仅仅影响钙磷代谢，而且具有广泛的生理作用，是维持人体健康、细胞生长和发育的必不可少的物质，与多种疾病密切相关。

血液中25-羟基维生素D的高低可以反映人体维生素D的储存水平，并且与维生素D缺乏的临床症状是相关的。

由于25-羟基维生素D是人体内维生素D的主要储存形式，因此，通过检测25-羟基维生素D可以确定总体维生素D的情况。

25-羟基维生素D检测的临床应用主要与佝偻病（儿童），骨软化症、绝经后骨质疏松和肾性骨病的诊断、治疗和监测有关。

维生素D缺乏还和许多其他的疾病、自身免疫性疾病、糖尿病和抑郁症。

测定25-羟基维生素D可应用于：（1）监测骨相关疾病例如佝偻病（儿童）、骨软化症、绝经后骨质疏松症和肾性骨病或非骨相关疾病补充维生素D的效果。

（2）诊断维生素D毒性，例如有可逆毒性的患者（高钙血症）。

（3）诊断维生素D不充足或者缺乏，有助于确认那些可能通过补充维生素D达到最佳水平从而收益的个体。

目前，临床或实验室对于25-羟基维生素D检测的方法有荧光免疫层析法、胶体金免疫层析法、化学发光法和酶联免疫法等。

胶体金免疫层析法检测技术具有技术操作简便、检测快速、便携性强、样品用量少等优点，但其精密度受到一定限制，仅能做定性或半定量的检测。

荧光免疫层析法是免疫荧光技术和传统免疫层析技术相结合发展创新的一种定量新型检测技术。

该技术在保留胶体金免疫层析技术操作简便、检测快速、便携性强等优点外，还通过荧光示踪增强技术实现了检测结果的定量。

为验证*********有限公司生产的25-羟基维生素D测定试剂盒（免疫荧光法）是否具有临床应用价值，根据《免于进行临床试验的体外诊断试剂临床评价资料基本要求》开展临床评价，以验证产品的临床效果。

1.1.2产品的检验原理、方法*********有限公司生产的25-羟基维生素D测定试剂盒（免疫荧光法）采用竞争法免疫层析原理研制，检测人全血/血清或血浆中25-羟基维生素D含量。

样本中的25-羟基维生素D抗原与荧光乳胶标记的25-羟基维生素D单克隆抗体结合形成抗原-抗体复合物。

未与样本中抗原结合的荧光乳胶标记抗体层析至检测区（T），与预包被的的25-羟基维生素D抗原结合，呈现荧光条带。

抗原-抗体复合物，及未与检测区（T）包被的抗原反应完全荧光乳胶标记抗体，层析至质控区（C）与预包被的羊抗兔IgG多克隆抗体结合，呈现荧光条带。

检测时，丽拓生物科技有限公司干式荧光免疫分析仪检测模块通过发光二极管发射特殊紫外光，当紫外光照射到检测卡T线和C线时，T线和C线位置的荧光乳胶抗原-抗体复合物在紫外光的照射下呈现荧光条带，干式荧光免疫分析仪检测模块的光电二极管将检测到的荧光转化成电信号，测得T/C比值，通过干式荧光免疫分析仪的软件程序和二维码内参数将T/C比值换算为抗原浓度。

1.1.3预期用途适用于体外定量检测人血清、血浆或全血中25-羟基维生素D的含量，临床上主要用于维生素D缺乏相关疾病的辅助诊断。

1.1.4临床评价单位情况说明根据《免于进行临床试验的体外诊断试剂临床评资料基本要求》，并考核医院该项目的临床开展情况，申办方（*********有限公司）选择*********开展临床评价试验。

1.2研究目的评价*********有限公司生产的25-羟基维生素D测定试剂盒（免疫荧光法）用于检测25-羟基维生素D时，其诊断检测能力与已上市的同类检测试剂盒无差异。

1.3试验管理1.3.1研究监查申办方适时对试验进行监查，以保证研究方案的所有内容和要求都得到严格遵守及执行。

⑴在研究前确认临床研究机构已具有适当的条件，包括人员配备与培训，实验室设备齐全，工作情况良好，估计有足够数量的样本数；⑵确认参加研究人员均已经过统一培训，熟悉临床试验的要求；⑶确认所有临床评价报告表填写正确，并与原始资料一致。

所有错误或遗漏均已改正或注明，经研究者签名并注明日期。

1.3.2实验室质量控制选用配套的质控品进行质量控制。

各实验室建立各自的质控频率和可接受范围值。

当测定结果超出可接受范围时，有必要采取相应措施。

1.3.3研究人员质量控制参加临床试验的研究者都具有临床试验的专业特长、资格和能力，并通过资格审查，人员要求应相对固定。

*********有限公司负责试验开始前的研究人员培训工作，以帮助临床研究人员对于试验总体情况、方案、临床评价报告表等得到充分的理解和认识。

1.3.4研究试剂管理1.3.4.1研究用试剂的贮藏临床试验单位均严格遵守中国相关法规要求。

同时，按照申办者提供的考核试剂使用说明书中的贮藏条件要求对试剂盒进行保存和管理。

1.3.4.2试剂的递送、分发方式本次考核试剂保管在申办者仓库中，使用前，将试剂做好保护措施后，带至实验室。

1.3.4.3剩余试剂的回收和销毁试验结束后，考核试剂剩余试剂包装和未使用的试剂盒全部回收至申办方。

申办方或其指定的机构及人员按照相应流程对考核试剂进行回收。

1.3.5文件管理1.3.5.1原始文件原始文件定义为临床研究观察或得到的初始结果。

原始文件包括但不限于，医学记录、电子数据、筛查日志以及自动仪器得出的结果。

涉及本临床试验的原始数据资料，主要包括样本编号、年龄、性别、试验用试剂检测结果、对比试剂检测结果、复核试验结果（如有）、临床诊断信息等。

1.3.5.2研究结果记录通过临床评价报告表对本试验的数据进行收集研究者或授权人员按照方案中的要求将数据信息记载在临床评价报告表中。

研究者在提交临床评价报告表给申办者之前，应该核对其内容的真实性和准确性。

临床评价报告表的填写需使用黑色圆珠笔或中性笔，字迹应清晰，易于辨认。

数据缺失的情况下，要附加合理解释。

临床评价报告表上的内容不应涂改，需要对临床评价报告表数据进行修改或变更时，则在需修正的地方划线，在其附近记录新的数据，所有变更或修改的地方需更正者签字并注明日期（只有研究者及其授权的人员可以修改临床评价报告表）。

1.3.5.3研究单位的文件管理和保留研究者不得处理任何试验相关的记录。

对于试验中所有数据和观察结果的电子或纸质的原始文件，研究者和研究单位有责任对其进行保存，并保证其完整和正确。

研究者必须保留临床评价报告表副本、原始数据，研究者应保存临床试验资料至试验终止后5年。

5年到期之前，研究者要通知申办者，就其后原始资料的保存方式和保存方法做进一步协商。

当不再需要试验记录时，申办方将通知研究者。

如果研究者退出研究，应将记录转交给共同商定的指定人员并将书面转交通知提供给申办方。

1.3.6数据管理研究者根据受试者的原始观察记录，将数据及时、完整、正确、清晰地载入临床评价数据表；申办者监查研究是否遵循研究方案进行。

确认所有临床评价数据表填写正确完整，并与原始资料一致。

如有错误和遗漏，及时要求研究者改正。

修改时需保持原有记录清晰可见，改正处需经研究者签名并注明日期。

1.4试验设计1.4.1试验总体设计及方案的描述前瞻性、盲法检测、方法学对比。

⑴盲法检测：由样本筛选人员对入选样本编号，再由试验操作人员使用考核试剂和参比试剂对同一样本进行同步检测，入选样本的临床诊断等信息在检测前对操作人员保密，以保证盲法；检测完成后，对检测结果进行一致性分析。

⑵与已上市产品进行比较研究：通过选择目前临床普遍认为质量较好的产品作为比对试剂对*********有限公司生产的25-羟基维生素D测定试剂盒（免疫荧光法）进行评价，以判断其诊断检测能力与已上市的检测试剂盒无差异。