士的宁半数致死量（LD50）测定
操作版
【目的】
1．掌握药物半数致死量（LD50）测定的基本步骤；
2．掌握按改良寇氏法计算LD50的方法。

【原理】
LD50表示能使全部实验动物半数死亡的剂量，是以动
物死亡或存活作为质反应指标。

LD50与毒性呈负相
关。

当剂量取对数值时，曲线呈近似两端对称的S型，
对称点位于LD50。

LD50处斜率最大，灵敏度最高；曲
线两端平坦，在1%或100% 附近灵敏度最差，剂量
不易确定。

对称点附近量效关系呈直线关系，即该段
范围内效应百分率／比与对数剂量呈正比关系。

（见右
图）
测定LD50的方法有多种，但以改良的寇氏法计算
简便，结果较准确，比较常用。

对于毒性低的药物测不到LD50，则按最高可用的
浓缩浓度、以最大给药容积给药，即最大给药量，如
能导致实验动物死亡，可检测其最小致死量和最大耐
图质反应量效关系曲线
受量，否则即以最大给药量反映其安全性。

【材料】
动物：小鼠，雌雄兼用，18～22g。

药品：士的宁溶液（0.125mg／mL）。

器材：鼠笼，JY4001电子秤，1.0mL注射器，试管，试管架。

【方法】
1．预实验：取小鼠8～12只，分成4～5组，腹腔注射不同浓度的士的宁，摸索出可致小鼠大多数死亡的最小剂量（D m）及大多数小鼠不致死亡的剂量（D n）。

即找出引起0％到100％死亡率剂量的所在范围。

（参考剂量：D m为0.125mg／mL，0.1mL／10g）
2．正式实验：以预实验所获得的D m和D n确定正式实验组数及组间剂量比（分5个剂量组，按1：0.8组间等比）。

每组取10只小鼠，雌雄各半，随机分为5组。

药液按等比稀释，腹腔注射，给药容量都为0.1mL ／10g。

给药后观察30分钟。

（正式实验观察7～14天，并设阴性对照组）
3．汇总实验结果，计算士的宁LD50及其95％可信限。

【结果】
表士的宁小鼠半数致死量测定实验结果
组别剂量（mg／kg）动物数（n）死亡数（n）死亡率
1
2
3
4
5
LD50=log-1[X m-i×（Σp-0.5）]
LD50的95％可信限=log-1（X50±1.96S X50）
LD50的平均可信限=LD50±（LD50的95%可信限的高限-低限）／2
S X50=i×[（Σp-Σp2）／（n-1）]1／2
注：【计算中通常以“10”为底】
X m为最大剂量组的对数值，i为相邻两剂量比值的对数（高剂量组作分子）；
p为各组死亡率，Σp为各组死亡率总和；
X50为lgLD50，S X50为X50（lgLD50）的标准误差。

【讨论】——相关要点
1）概括实验结果；
2）判断结果是否符合改良寇氏法计算LD50的要求；若不符合，则选用例题操练计算过程。

3）列出LD50计算公式及演算过程；（具体计算过程可利用EXCEL完成，应学会相关的函数运算）4）列出计算公式演算LD50 95%可信限和LD50平均可信限；
5）说明测定LD50的意义；
6）毒性程度不同的药物，各有哪些指标反映其安全性；
7）检测中药安全性，首先以最大给药量作测试是否合理，为什么？
8）预试中如何用尽少的实验动物尽快获得D m和D n；如何依据D m和D n确定正式实验（组数、组间剂量比、各组剂量）；
9）LD50的正式实验需不需要设立阴性对照？为什么？
10）……。

例题计算
某中药复方的急性毒性反应如下，请计算其LD50及其95％可信限。

组别给药量（mg／kg）动物数（n）死亡数（n）
1 3750 10 9
2 2810 10 7
3 2110 10 3
4 1590 10 2
5 1190 10 0
【结论】
（士的宁LD50是mg／kg。

）。