（*在相应峰值的10nm范围内每隔5nm记录一次吸光
度读数，其余均每隔10nm记录一次吸光度读数）。
四、结果记录及曲线绘制
1、记录各波长下的A（制成表格） 2、绘制吸收曲线（*并确定最大吸收波长）
以波长为横坐标，吸光度为纵坐标描点，并将 各点连接成光滑曲线，即为血红蛋白及其衍生物 的吸收光谱。
四、注意事项
为纵坐标，可得到一条曲线，即吸收光谱曲线或称
为吸收曲线。
2、吸收曲线的特点
①同一种物质对不同波长光的吸光度不同。
吸光度最大处对应的波长称为最大吸收波长λmax 。
②不同浓度的同一种物质，其吸收曲线形状相似λmax
不变。而对于不同物质，它们的吸收曲线形状和λmax
则不同。
③在λmax处吸光度随浓度变化的幅度最大，所以测定
最灵敏。吸收曲线是定量分析中选择入射光波长的重
要依据。
3、血红蛋白（Hemoglobin，简称Hb）
血红蛋白四聚体结构模式
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
4、Hb及其衍生物
吸收峰数量 Hb + O2 Hb + CO HbO2 HbO2 HbCO Hb + O2 2个 2个 1个
500~650nm 峰 值 541nm，576nm 540nm，569nm 555nm
1、NaCN溶液是剧毒物，要注意安全，切忌口服， 实验完毕注意洗手。 2、取全血前要混匀。 3、比色时每次换波长都要重新调零和100%。 4、绘图时，纵横坐标比例要适当，要用圆滑线把 点连起来。
五、思考题：
1、什么叫吸收光谱？测定血红蛋白及其衍生物的吸 收光谱有何意义？
（2）MetHbCN液：
取上述氧合血红蛋白约5ml于小试管中，加新鲜配制
的10%K3Fe(CN)6 2滴，然后加1滴1%NaCN液，混匀
，此即为MetHbCN液。
(3)混匀，静置5min。
2、比色
将以上制备的两种血红蛋白液分别盛于比色杯内，
在722型分光光度计上以蒸馏水为空白调节0和100%。
在500~650nm分别测定HbO2和MetHbCN液的吸光度
实验三 血红蛋白及其衍生物 的吸收光谱测定
生物技术专业实验室 王小英
一、实验目的
1、熟悉Hb及其衍生物吸收光谱测定的原 理及操作方法。 2、掌握吸收光谱曲线绘制的方法。
二、实验原理
1、吸收光谱曲线：将各种波长（）的单色光
依次通过一定浓度的某一溶液，测量该溶液对各种
单色光的吸收程度（吸光度A），以为横坐标，以A
HbO2 + K3Fe(CO)6 + NaCN
MetHbCN 1个 540nm
图1 HbO2吸收光谱
图2 HbCO吸收光谱
图-3 MetHbCN吸收光谱
图-4 脱氧Hb吸收光谱
三、操作步骤
1、样品制备
（1）HbO2液：
取全血0.1ml（1滴）盛于小烧杯中，加蒸馏水10ml，
混匀，此即HbO2液。