验， 以衍生物峰高（ｍ 对化合物含量 （Ｍ ｌ求得回 ｃ） Ｐｏ
归方程， 倍信噪比计算检出限， 以２ 见表１ 。
表１ 展青霉素和青霉酸的标准曲线回归方程和检出限
３２ 最适流动相组成的确定 ．
本实验选取 乙腈－ 水作流动相 ， 了流动相的 研究 组成及 ｐ Ｈ值对 毒素衍 生物 和 Ｄ Ｐ保 留行 为的 ＭＡ
作者［４ ｌ］ － 利用软基质的离子交换色谱和亲和色谱分
离纯化 了 － 淀粉酶的粗酶提取液 。 但是 ， 软基质色 谱介质的机械强度 小， 受压易变形 ， 析速 度慢 ， 分 分
Ｓ Ｅ） Ａ 很好地分离了 － 淀粉酶粗品， 其活性回收率 高达９％， ６ 比活性达３８／ ｇ ８ｕｍ 蛋白质， 纯度提高３ ０
１８ ；６ １ ： ５ ９ ３６ （）８
１ ８ ３ ２： ８ ９ ７； ９ ３ ９
５ ｏｂ ｏ Ｒ Ｂ ｂｋ ， Ｅ Ｊ ｓｃ Ａ ａＣ ｅ Ｆｒｉ Ｐ ａｓｙ Ｎ Ａ ｏ Ｏｆ ｌ ｍ， ｔ ， ． ｓ ｆ ｎ ｈ
１８ ；８ ５ ：５ ９ ５ ６ （ ）９ ０ ６ ｒｎｎ Ｋｕｏ ｅ Ｐ ．Ａｒｈ ｖ ｏ Ｃ ｎａ Ｔ ｘｃ ｌ ９ ９ １ ： ｃ Ｅ ｉ ｎ ｔｍ ｏ ｉ ，１ ８ ； ８ ｎ ｒ ｏ ｏ
液和 催化剂 溶液定量 ， 改变 ＰＢＣ 的用量 ， Ｉ－ｌ 衍生物 峰高随 ＰＢＣ 与毒素的摩尔比增加而增加 ， ＰＢ Ｉ－ｌ 当 Ｉ－ Ｃ 与毒素的摩 尔比达到８１ ｌ ：时衍生物峰 高恒定（ 图 １。 ， ）同理 取毒素标准试液和 ＰＢＣ 溶液定量 ， Ｉ－ｌ 催化 剂 Ｄ Ｐ用量的改变对衍生物峰高的影响见 图２ ＭＡ 。 当 Ｄ Ｐ与毒素的摩尔 比达到８ ：时衍生物峰高 ＭＡ ０１
３ ０ １ －ｍｏ／ 。 ． ０ ３ ｌＬ）
２２ 色谱条件 ． 流动相为乙腈－ ４ ：３ Ｖ Ｖ）用磷酸调 ｐ 水（７５ ， ／ ， Ｈ 值为３２流量１０ Ｌ ｍｎ 记录纸速 ５ ｍ／ ｉ； ．； ．ｍ ／ ｉ； ｍ ｍ ｎ进样
体积３Ｌ检测波长３０ｍ。 μ； ０ｎ
２３ 衍生反应 ． 定量移取３μ ０Ｌ毒素的标准混合液 于１Ｌ具塞 由于它们的广泛存在及其致癌性 ， 严重危 害人 类的健康 ， 引起了分析工作者的高度重视 ， 各种检测 手段相继出现 ， 主要有薄层色谱法 （ Ｌ ），和高效 Ｔ Ｃ ［］ １ ２
３３ 精密度、 ． 工作曲线和检出限 取含展青霉素１５ ０４ｏ／ 青霉酸３０ ． ×１－ｍ ｌ Ｌ， ．
１－ｍ ｌ ０４ ｏ／ Ｌ标准混 合液 ， 按选 定 的条 件 平行操 作 ７ 次， 测得相对标准 偏差 （ 分别为展 青霉素 １３青 ％） ．，
霉酸３８配制系列毒素标准混合液按选定的条件实 ．。
展青霉素和青霉酸标样（ｉ ａ Ｓ ｍ 公司）４二甲 ｇ ；－
胺基吡啶 （ Ｍ Ｐ （ｌ ａ 司）ＰＢＣ 为作者按 Ｄ Ａ ）Ｆｕ 公 ｋ ；Ｉ－ｌ
文献［方法合成， 产品经质谱验证； ｆ 乙腈为 二噁烷、
分析纯试剂 ， 使用前需经蒸馏提纯 。
本文收稿 日 ： ９年５ 日， 期 １ ３ 月３ 修回 日 ：９３ 月４ ９ 期 １９年９ 日
１ ７ ；９ ２ ９ ９ ８２ ：３
７傅 承光， 达． 徐宏 分析测试 通报， ９；（ ： １１ ６５ ９ ８）
８ Ｔ ｕｕａ ，Ｋｃａｈ Ｋ．Ａ ａ Ｃ ｅ Ａｃａ ９ ７ １ ２ ｓ ｒｔ Ｔ ｈ ｓｉ ｎ ｌ ｍ ｔ ，１ ８ ； ９ ｈ （ ）３ ７ ２ ：０
４ ｕｓ Ｗ ， ｎｄｒ ， ｒｎ Ａ Ｊ ｒｍ ｔ ｒ Ｈｒ ｔ Ｊ Ｓｙｅ Ｋ Ｍａ ｉ Ｒ ． Ｃ ｏ ａ ｇ， Ｐ ｔ ｈ ｏ
毒代谢物， 有很强的致癌性 。 结构如下 ：
ＰＢＣ 溶于 乙腈 中制 成浓度 为５０ ０ ３ｏ／ Ｉ－Ｉ ． ×１－ｍ ｌ Ｌ的溶液 ，ＭＡ 溶 于乙腈中制成浓度为４０ １－ Ｄ Ｐ ． ０２ ｍｌ ｏ Ｌ的溶液 ， ／ 展青霉素和青霉酸溶于 乙腈 中制成 贮 备液 （ａ ｌ ：． １－ｍ ｌ ， ｅｉｌｃ ｄ Ｐｔ ｉ １ ５ ０３ ｏ Ｌ Ｐｎ ｉ ａｉ； ｕｎ ／ ｃｌ ｃ ｉ
同， 经衍生后由于试剂主体的吸收， 使衍生物的吸收
波 长趋于一致 ， 移到３０ｍ， ０ｎ 这样可排除其它吸收波 长较低物质的干扰 ， 了 测灵敏度 。 提高 检 毒素衍生物 在室温下存放４ ， 天 峰高不变 。
参考文献
１ ｉｅｏ ， ｒｎ Ｍ ．Ｊ ｓｃ ｆ ａ Ｃ ｅ Ｇｍ ｎ Ａ Ｍａｔ ｓ Ｌ Ａ ｏ Ｏ Ａ ｌ ｍ， ｉ ｓ ｆ ｎ ｈ催化作 ａＨ
用
ｐ Ｈ值增 加而 显著增 加， ｐ 值在５ ６ 当 Ｈ ～ 时影响衍生
物的测定， 因此流动相的ｐ Ｈ值宜控制在２５ ． ．～４５
之 间。 综合上述条 件并兼顾 分析时 间， 选取 乙腈－ 水 的配 比为４ ： （ ／ 。 ７５ Ｖ Ｖ）色谱图见图５ ３ 。
－ 粉酶粗 品， 淀 回收率为９ 。 ０ 但是 ， 高效液相 利用 离子交换色谱纯化 － 淀粉酶国内外尚未见报道。 本 研 究 利 用我 们 自 己合成 的强 阴离 子 交 换 柱 （ － Ｌ
常用作食品添加剂。 高纯度的 － 淀粉酶可作为酶试
剂 ， 究生物作 用的特性、 研 酶反应 机理 ， 测定生化反 应 的平衡 常数。 为了获得高纯度 的 － 淀粉酶 ， 一些
对 － 淀粉酶具有特异亲和能力的色谱介质 ， 并成功
用微量天平准确称取５ ｇ ｍ 高纯度的 － 淀粉酶
（ 下页 ） 接
本文收稿 日期：９３ 月８ 修 回日 ：９３ 月１ 日 １９年１ 日， 期 １９年４ ３ （ 接上页）
＊ 通讯联系人
Ｈ ｇ Ｐ ｒ ｒ ａｃ Ｌｑ ｉ Ｃ ｒｍ ｔｇａｈｃ Ｐ Ｃ Ｄ ｔ ｍ ｎｔ ｎ ｉ ｅｆ ｍ ｎｅ ｕ ｈｏ ａ ｒｐ ｉ （ Ｌ ） ｅ ｉａ ｏ ｈ ｏ ｉ ｄ ｏ Ｈ ｅｒ ｉ
ｏ Ｔ ａｅ ｔｌ ａ ｄ ｎｅ ｌ Ａ ｉ ｂ Ｐ ｅｏｕ Ｄ ｒ ａｉ ｔ ｎ ｆ ｃ Ｐ ｕｉ ｎ Ｐ ｉ ｌｃ ｄ ｒｃｌｍｎ ｉ ｔ ａｉ ｒ ａ ｎ ｅ ｉｉ ｃ ｙ ｅｖ ｚ ｏ ｗｔ ４ （－ ｈｈ ｌ ｄｌ Ｂ ｎｏ ｌ ｌ ｉｅ ｉ －２Ｐ ｔａｉ ｙ） ｚｙ Ｃ ｏ ｄ ｈ ｍｉ ｅ ｈｒ
磨口试管内， 加入４ ＰＢＣ 溶液，０Ｌ Ｐ溶 ０Ｌ Ｉ－ｌ ５ Ｄ ＭＡ 液混匀， 室温下反应３ｍｎ取３Ｌ ０ ｉ， 进样分析。
３ 结果和讨论
３１ 衍生反应条件 ． 展青霉素和青霉酸在催化剂 Ｄ Ｐ存在下与 ＭＡ ＰＢＣ 反应生成酯 ， Ｉ－ｌ 若有水存在 ， 还产 生 ＰＢＣ 的 Ｉ－ｌ 水解反应 。 溶剂 的选择 本文探讨了 乙腈 、 噁烷 等非质 二 ｆ 子 溶剂对衍生反 应的影响， 发现选 用乙腈 、 作溶剂能使反应顺利进行。 衍生反应 的温度和反应 时间 两种毒素在室温 下 与 ＰＢＣ 反应２ｍｎ即可完成， Ｉ－ｌ ５ｉ 若在６ ℃水浴 中 ０ 加热则１ｍｎ ０ ｉ完成。 烷
苯甲酰化展青霉素和青霉酸的高效液相色谱紫外吸收测定法
郭玉凤 傅承光
（ 河北大学理化分析 中心 保定 ０１０） ７０２ 提要 建立了一种快速、 灵敏检测痕量展青霉素 （ａ ｌ ） ｐｔ ｉ 和青霉 酸（ｅｉｌ ａｉ 的新方法。 ｕｎ ｐｎ ｉｃ ｄ ｃｌ ｃ ） ｉ 对酞 内酰胺苯 甲
酸 ４ ２ ｈ ａｍ ｙ ｂ ｚ ｌ ｒｅ 氯［ （ｐｔ ｌ ｉｌ ｅ ｏ ｃｌｉ ， － － ｈ ｉｄ ｎ ｙ ｈ ｄ 简称ＰＢ ｌ 柱前 ｏ Ｉ－］ Ｃ 为 衍生试剂同展青 素和青霉酸衍生反 衍生物 应，
液相色谱仪由岛津（ｈ ａｚ）Ｃ６ Ｓｉ ｄｕＬ － ｍ Ａ高压输
液泵， 岛津 Ｓ Ｄ６ Ｖ紫外可见分 光检测器，１５ Ｐ －Ａ ７２注 射进样阀 ， Ｈ － Ｃ８ μ ）．ｍ Ｐ Ｓ５ （ ｍ ４６ ｍ×１５ ｍ 色谱 Ｅ １５ ２ｍ 柱和 Ｐ Ｒ１０ Ｅ ０Ａ型单笔记录仪组成 。 －
ＰＢＣ 和催化剂用量的选取 取毒素标准试 Ｉ－ｌ
Ｇ ｏ ｆ ｇ Ｆ Ｃ ｅｇｕｎ ｕ Ｙ ｅ ａｄ ｈｎｇａｇ ｕ ｎ ｎ ｕ
（ｅｔ ｏ Ｐ ｙｉ ｌ Ｃ ｅ ｉ ｌ ｌ ｉ ＨｅｅＵ ｉ ｒｔ， ａｄｎ ，７０２ Ｃｎ ｅ ｈｓ ａ ａｄ ｍｃ Ａ ａ ｓ ｂ ｎ ｅ ｉ Ｂ ｏｉ ０１０） ｒ ｆ ｃ ｎ ｈ ａ ｎ ， ｉ ｖ ｓｙ ｇ Ａ ｗ ｄ ｓｉ ｍ ｔ ｄ ｓ ｅ ｐｄ ｔｅ ｅ ｎｔ ｎ ｔ ｃ ｐｔｌ ａｄ ｉｌ ａｉ ｂ ｎ ａ ｓｎｉｖ ｅｈ ｗ ｄｖｌ ｅ ｆ ｈ ｄｔ ｍｉ ｉ ｏ ｒ ｅ ｕｎ ｐｎ ｉｉ ｃ ｙ ｅ ｎ ｅ ｔ ｅ ｏ ａ ｅ ｏ ｏ ｒ ｅ ｒ ａｏ ｆ ａ ａ ｉ ｎ ｅ ｃｌ ｄ ｅ Ｈ Ｌ ｕｉ ｕ ｒ ｉｅ ｄｔ ｔ ｎ Ｔ ｅ ｔｏ ｉ ｏｖｓ ｅ ｅｉ ａｏ ｏ ｐｔ ｉａｄ ｉｌｃ ｂ ｕｅ Ｐ Ｃ ｎ ｌａ ｏ ｔ ｅ ｉ ． ｈ ｍ ｈｄ ｌ ｔｅ ｒｉ ｔ ｎ ａ ｌ ｎ ｐｎ ｉｉａｉ ｙ ｓ ｇ ｖ ｌ ｅ ｃｏ ｔ ｅ ｎ ｅ ｈ ｓ ｆ ｉ ｆ ｕｎ ｅ ｃｌ ｃ ｖ ｔ ｃ ｄ ｓ
用Ｏ Ｓ Ｄ 柱分离， 乙腈－ （７５， ／ ） 水 ４ ：３ Ｖ Ｖ 作流动相， 紫外检测器检测 （ ＝３０ｍ 。 倍信噪比计算最低检出限 ， λ ０ｎ ）以２
展 素２ ｐ ｏ 青霉 ０ ｏ 青 ． ｍｌ 酸１ ｍ ｌ ０ ， ｐ 。
关键词 高效液相色谱， 展青霉素， 酸 青
１ 前言 展青霉素和青霉酸是由曲霉属（ｓｅｇｌ ） ａ ｒｉ ｓ和 ｐ ｉｌ ｕ 青霉属（ｅｉｌｕ 的真菌在生长过程中产生的有 ｐｎｉ ｍ） ｃｌ ｉ
仅能纯化工业粗酶 ， 也可纯化其它来源的 － 淀粉酶 。 关键词 离子交换 色谱 ， － 淀粉酶 ， 纯化
１ 前言
－ 淀粉酶是一种催化淀粉水解酶 ， 主要来源于 动物胰、 唾液、 、 细菌、 血液 尿、 霉菌和 各种高等植物， 地分离纯化了工业粗酶， 了高纯度产品， 活性 获得 其
回收率＞８％，ａ 等［也用高效疏水色谱纯化了 ８ Ｋｔ ］ ｏ
液相色谱法（ ＰＣ ［７ Ｈ Ｌ ）－］ ３ 。