实验常用试剂、缓冲液的配制方法Na2HPO4,2 mM KH2PO4 1 M Tris-HCl 、11M Tris-HCl □组份浓度□配制量□配制量1L 1L (pH7.4,7.6,8.0)□配置方法1. 称量下列试剂,置于1L烧杯中。
烧杯中。
□配置方法1. 称量121.1gTris置于1LNaCl 加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。
8 g 2.KCl 0.2g3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。
Na2HPO4 1.42 g 浓值HCl pHKH2PO4 0.27g 7.4约70mL2. 向烧杯中加入约800 mL的去离子水,充分搅拌溶解。
7.6 约60mL3. 滴加HCl将pH42mL 8.0约值调节至7.4,然后加入去离子水将溶液定容至1L。
4. 将溶解定容至1L。
4. 高温高压灭菌后,室温保存。
5. 高温高压灭菌后,室温保存。
注意:上述PBS Buffer中无二价阳离子,如需要,可在配方中pH注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的补充1mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。
pH值随温度的变化差很大,温度每升高1℃,溶液的值大约降低6、10 M醋酸铵0.03个单位。
□组份浓度10 M醋酸铵□配制量100mL 1.5 M Tris-HCl 2、1.5 M Tris-HCl □组份浓度□配置方法1. 称量77.1g醋酸铵置于100~配制量pH8.8 ()□1L 200 mL烧杯中,加入约30 mL的去离子水搅拌溶解。
1L1. □配置方法称取181.7gTris置于烧杯中。
2. 加入约800mL2.加去离子水将溶液定容至100mL。
的去离子水,充分搅拌溶解。
3.使用8.8pH3. 用浓盐酸调值至。
0.22μm滤膜过滤除菌。
4.密封瓶口于室温保存。
1L 4. 将溶液定容至5. 高温高压灭菌后,室温保存。
注意:醋酸铵受热易分解,所以不能高温高压灭菌。
7、Tris- HCl平衡苯酚□溶液的注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris配置方法1. 使用原料:大多数市售液化苯酚是清亮无色的,pH值大约无需重蒸馏℃,溶液的值随温度的变化差异很大,温度每升高pH1便可用于分子生物学实验。
0.03降低个单位。
但有些液化苯酚呈粉红色或黄色,应避免使用。
同时也应避免使用结晶苯酚,结晶苯酚必须在160℃对其,□TE Buffer、310×组份浓度100 mM Tris-HCl10 mM EDTA这些氧化产物可引起磷酸二酯进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物,1L 配制量),,(pH 7.47.68.0 □、苯酚的质量对DNADNA的交联等。
因此,键的断裂或导致1L1. 配置方法□量取下列溶液,置于烧杯中。
RNA 和的提取极为重要,我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物8.07.6pH7.4 1 MTris-HCl Buffer(,,)100mL RNA )20mL 学实验。
pH8.0500 mM EDTA (操作注意:苯酚腐蚀性极强,并可引起严重灼伤,操作时向烧杯中加入约 2. 800mL2. 的去离子水,均匀混合。
与苯酚接触1L将溶液定至3. 后,高温高压灭菌。
所有操作均应在通风橱中进行,应戴手套及防护镜等。
4. 室温保存。
过的皮肤部位应用大量水清洗,并用肥皂和水洗涤,忌用乙醇。
分配于有机相,因4条件下醋酸钠组份浓度□醋酸钠、3 M 3 M pHDNA 3. 苯酚平衡:因为在酸性以上,苯酚)pH5.2(值达到100mL 7.8此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH □配制量~100置于称取1. □配置方法40.8gNaOAc?3H2O200mL烧杯平衡操作方法如下:℃,此时的苯酚呈现结晶状态。
从40mL中,加入约的去离子水搅拌溶解。
-20①液化苯酚应贮存于℃加入冰乙酸调节 2. 冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温,然后在68 5.2值至pH。
100mL加入去离子水将溶液定容至3. 。
水浴中使苯酚充分溶解。
%。
该化合物0.1 高温高压灭菌后,室温保存。
4. )至终浓度加入羟基喹啉(②8-Quinolinol 酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂,RNA是一种还原剂、10 mM,2.7mM KCl,137 mM NaCl 组份浓度□PBS Buffer、5.同时因其呈黄色。
有助于方便识别有机相。
EDTA,50mM Glucose(质粒提取用)),使用磁力搅拌器搅□配制量1L ③加入等体积的1M Tris-HCl(pH8.0 分钟,静置使其充分分层后,除去上层水相。
□配置方法1. 量取下列溶液,置于1L烧杯中。
拌15 ④重复操作步骤③。
1M Tris-HCl(pH8.0)25mL0.5 M EDTA(pH8.0⑤加入等体积的0.1M Tris-HCl(pH8.0),使用磁力搅拌器)20mL20%Glucose(1.11M)15搅拌分钟,静置使其充分分层后,除去上层水相。
45mLdH2O 910mL ⑥重复操作步骤⑤,稍微残留部分上层水相。
2. 高温高压灭菌后,4℃保存。
⑦使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。
3. 使用前每50 mL的Soliution I中加入2mL的℃避光保存。
⑧将苯酚置于棕色玻璃瓶中4RNase A(20mg/mL)。
15、Solution II/8、苯酚/氯仿异戊醇□配置方法□组份浓度250mM NaOH,1%(W/V)SDS(质粒提取用)□配制量500mL 异 1. 说明:从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯/酚/氯仿/ □配置方法1. 量取下列溶液置于500mL烧杯中。
125 1)。
氯仿可使蛋白(:24 :)质变性并有戊醇(25:24:10而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现%SDS 50mL 助于液相与有机相的分离,的气泡。
2N NaOH 50mL2. 加灭菌水定容至异戊醇500mL,充分混匀。
Tris-HCl 2. 配置方法:将平衡苯酚与等体积的氯仿/3. 室温保存。
此溶液保存时间最好不要超过一个月。
)均匀混合后,移入棕色玻璃瓶中:14℃保存。
(24 注意:SDS易产生气泡,不要剧烈搅拌。
SDS W/V)10 %(9、10W/V)SDS□组份浓度%(16、Solution III□组份浓度3M KOAc,5M CH3COOH 配制量□100mL(质粒提取用)□配制量500mL 200mLSDS1. 称量10g高纯度的置于100~烧杯中,□配置方法□配置方法1. 的去离子水,加入约80mL68℃加热溶解。
量取下列溶液置于500mL烧杯中。
7.22. 滴加数滴浓盐酸调节pH值至。
KOAc147gCH3COOH 57.5mL3. 将溶液定容至100mL后,室温保存。
2. 10、加入300mL去离子水后搅拌溶解。
2 N NaOH □组份浓度2N NaOH3. 加去离子水将溶液定容至100mL 500mL。
□配制量4. □高温高压灭菌后,4 ℃保存。
配置方法17、0.5M EDTA□组份浓度塑料烧杯中(~去离子水置于1.量取80mL100200mLNaOH 0.5 M EDTA(pH8.0) □配制量溶解过程中大量放热,有可能使玻璃烧杯炸裂)。
1L□配置方法小心地逐渐加入到烧杯中,边加边搅拌。
称取 2. 8g NaOH 1. 称取186.1g Na2EDTA?2H2O,置于1L烧杯中。
2. 加入约800mL。
用去离子水将溶液体积定容至NaOH3. 待完全溶解后,100mL的去离子水,充分搅拌。
)。
(约pH值值8.020g NaOH 3. 将溶液转移至塑料容器中后,室温保存。
4. 用NaOH调节8.0时,EDTA才能完全溶解。
注意:pH2.5 N HCl 组份浓度、112.5 N HCl□值至 4. 100mL 配制量□加去离子水将溶液定容至1L。
78.4mL1. 配置方法□在21.6mL的去离子水中加入的浓盐酸5. 适量分成小份后,高温高压灭菌。
(11.6N6. ),均匀混合。
室温保存。
室温保存。
2. 组份浓度1 M DTT □18、1 M DTT组份浓度□、125 M NaCl 5 M NaCl 配制量20mL □塑料离心管内。
称取1. 3.09g DTT 1L □配制量,加入到50mL □配置方法,溶解烧杯中,加入约置于292.2g NaCl称取1. 1L)(0.01 M 的NaOAcpH5.2800mL 2. 加20mL的□配置方法的去离子水后搅拌溶解。
后使用0.22μm滤器过滤除菌。
适量分成小份后,-20 后,适量分成小份。
1L2. 加去离子水将溶液定容至℃保存。
3.组份浓度10mM A TP 19 ℃保存。
43. 高温高压灭菌后,、10mM A TP □组份浓度□Glucose )W/V%()W/V%(20 Glucose 20mL □配制量20、13塑料离心50mL称取121mg Na2A TP?3H2O,加入到配置方法□1. 100mL配制量□管内。
加入约烧杯中,~100置于20g Glucose称取1. □配置方法200mL 25mM Tris-HCl的(pH8.0),搅拌溶解。
20mL 的去离子水后,搅拌溶解。
80mL 2. 加℃保存。
适量分成小份,。
100mL加去离子水将溶液定容至 2. 3. -20高温高压灭菌后, 3. ℃保存。
4 分子生物学实验常用培养基的配制方法10mM,)pH8.0(25 mM Tris-HCl 组份浓度□Solution I 、14.1、Ampicillin □组份浓度100mg/ml Ampicillin K2HPO4)100mL。
2.称取下列试剂,置于1L烧杯中。
(100mg/ml)□配制量50mLTryptone 12g 5g Ampicillin置于50mL离心管中。
□配置方法1. 称量Yeast Extract 。
24g 2. 加入40mL灭菌水,充分混合溶解后,定容至50mL Glycerol 4mL 3. 用0.22μm滤膜过滤除菌。
3. 加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。
℃保存。
4. 小份分装(1mL/份)后,-20 4. □组份浓度24mg/mL IPTG 加去离子水将培养基定容至1L后,高温高压灭菌。
2、IPTG5. 待溶液冷却至60℃以下时,加入100mL(24mg/mL)□配制量50mL 的上述灭菌磷酸盐缓冲液。
50mL离心管中。
置于配置方法1. 称量1.2g IPTG6. 4℃保存。
加入40mL灭菌水,充分混合溶解后,定容至50mL。
2.7、TB/Apm培养基□组份浓度3. 用0.22μm滤膜过滤除菌。
1.2%(W/V)Tryptone2.4℃保存。
%(W/V)Yeast Extract 份)后,4. 小份分装(1mL/-20 0.4 3、X- Gal □组份浓度20mg/mL X- Gal %(V/V)Glycerol□配制量50mL 17mM KH2PO420mg/mL()72mM K2HPO4 置于□配置方法1. 称取1g X-Gal50mL离心管中。