1、营养琼脂(普通琼脂)成份:牛肉浸液(或其它浸液,消化液或肉膏汤) 100毫升琼脂(视天气,琼脂质量而定)制法:将上物加热溶解,补足水,调ph至7.6,过滤分装121℃,高压灭菌15分钟。
用途:作普通琼脂平皿。
2、血琼脂平板(BA)制法:取营养琼脂(PH7.6),加热使其溶解待冷至45-50℃,以灭菌操作于每100毫升营养琼脂加灭菌脱纤维羊血或兔血5-10毫升,轻轻摇匀,立即倾注于平板或分装试管,制成斜面备用。
用途:1. 一般棉拭子均接种此培养基。
2.尿液,脓液3.分离细菌标本用。
3、基础培养基 (肉膏汤BB)成份:蛋白胨 10克 牛肉膏 5克氯化钠 5克 水 1000毫升制法:将以上各物称好,加水煮沸溶解,用1NNOH校正PH至7.6,过滤分瓶,1121℃高压灭菌,20分钟备用。
用途:1 作耐药试验,增菌用分装小管。
2 作普通琼脂斜面。
4、血液培养基(大管肉汤培养基)成份:1 新鲜牛肉浸液 1000毫升2 PABA(对氨基苯甲酸〔相当于10mg/毫升〕) 1g% 1毫升3 MgSO4 [相当于0.493/100毫升] 49.3% 1毫升4 枸椽酸钠 0.3g制法:1 将1号,4号混合液,2号,3号液分装高压灭菌。
2 取灭菌1,4号混合液用无菌法加入PABA,MgSO4,再分管,行无菌试验三天方可使用。
用途:作血,骨髓培养用。
5、肠道杆菌培养基(伊红美兰琼脂)成份: 蛋白胨 10克 乳糖 10克氯化钠 5克 琼脂 25(22)克水 1000毫升 2%伊红溶液20毫升0.5%美兰溶液 20毫升2制法:将蛋白胨,氯化钠琼脂称好,加水1000毫升使溶解,校正PH7.4过滤,补足失水,加入2%伊红溶液20毫升,0.5%美兰溶液20毫升,(115℃高压20分钟),冷却至50℃左右倾注平板,凝固后存冰箱备用。
(高压以后方可再加乳糖)用途:用作分离沙门氏,志贺氏菌属,也作菌群调查。
6、罗文斯坦培养基成份:磷酸二氢钾 2.4克 硫酸镁 0.24克枸椽酸钠 0.6克 天门冬素 3.6克纯甘油(丙三醇) 12毫升 水 600毫升马铃薯粉 30克 鸡蛋 1000毫升(约3公斤)2%孔雀绿水溶液 20毫升制法:1 除鸡蛋外(还有孔雀绿)。
可将其它物品称好,放入大三角瓶包扎好,高压灭菌。
2 鸡蛋用75%酒精泡30分钟,灭菌法打蛋,倒入盛有玻璃珠的灭菌三角烧瓶内充分将鸡蛋摇散。
3 将各成份按比例配好,分装每管约5毫升。
4 间歇灭菌第一次90℃1小时,第二次80℃半小时,第三次80℃半小时(或放85℃烤箱内连续二次)。
3质控标准: 1 灭菌试验合格。
2 接种结核杆菌要求两星期生长良好。
用途:作结核分枝杆菌培养用。
7、结核半固体培养基成份:磷酸氢二钠 19克 硫酸镁 0.6克磷酸二氢钾 2.5克 天门冬素 5克1%孔雀绿 1.5克 甘油 20毫升吐温80(10%) 5毫升 水 1000毫升枸椽酸钠 2.5克 动物血清 100毫升琼脂 1.5克(80小时用甲醇去脂)1%孔雀绿 0.78毫升 吐温80(10%) 5毫升加动物血清 100毫升制法: 1 除血清外将上述药品均称好,放入煮沸溶解,调PH7。
22 分管(每管约10毫升)包扎好,高压,121℃半小时灭菌。
3 待冷后无菌法加无菌血清(绵羊血或兔血)每管约1毫升备用。
4 去除琼脂方法:取琼脂若干或于三角烧瓶中加甲醇于琼脂1毫升用塞密封,放37℃温浴80小时,每天摇动一次,冷却后到时取出用滤纸过滤,待琼脂自然冷却后备用。
4质控标准:1无菌实验合格。
2琼脂硬度合适而清亮。
3接种标准结核杆菌用,强度合适即可用。
用途:培养结核杆菌用。
8、亚碲酸钾血琼脂平板成份:琼脂基础 100毫升 1 0%葡萄糖 2毫升1%亚碲酸钾 4.5毫升 绵羊血 10毫升制法:1将琼脂基础溶解好,加入羊血。
2马上加热使成咖啡色后,稍冷再加入10%葡萄糖2毫升与1%亚碲酸4.5毫升混合后倒入无菌平板,凝固后存冰箱备用。
质控标准:接种白喉杆菌生长良好,其它革兰氏阴性菌均抑制生长。
用途:供培养及鉴别白喉杆菌用。
9、米培养基成份:白米 20克 水 1000毫升琼脂 20克 吐温80 10毫升制法:1将20克米加水200毫升煮沸45分钟,煮时将容器盖好。
2用纱布过滤,只要米汤,不要饭,加水至1000毫升。
53加琼脂20克,吐温-80 10毫升煮溶,分装中型管(每管约3毫升),包扎好,高压,121℃半小时,消毒备用。
质控标准:1灭菌。
2要求清亮。
3接种白色念珠菌17-24小时生长良好,并产生厚膜孢子。
用途:培养白色念珠菌用。
10、蛋白胨水培养基成份:蛋白胨 1克 氯化钠 0.5克水加至 100毫升 PH调至 7.8制法:把以上各物称好溶于水,调节PH7.6分装消毒备用。
质控标准:1 放置37℃无菌生长。
2 接种大肠杆菌24小时生长良好。
3 可作中国兰平板基础液。
可作靛基质基础液(作此试验需要色氨酸蛋白胨)。
11、血培养基成份:蛋白胨 10克 牛肉膏 5克氯化钠 5克 葡萄糖 3克6枸椽酸钠 3克 MgSO4。
7H2O 20毫升0.5%PABA 10毫升 酵母浸液 10毫升 0.2克(2%过滤)*酚红0.4% 6毫升 水 1000毫升琼脂 0.5克*:作大BB,小BB时,不要加酚红和琼脂。
制法:1、除PABA、硫酸镁、酚红外均称好煮化调PH7.42、调好PH后再加酚红。
3、硫酸镁、PABA另外无菌再加入(亚细,小BB)12、沙氏培养基成份:蛋白胨 1克 水 100毫升琼脂 1.5克(琼脂粉1克%) 葡萄糖或麦芽糖 4克制法:1将上述物质称好,放入水中煮沸溶解(不必调PH即有5左右)分中号试管(约4毫升)包扎,高压115℃20分钟。
2 趁热斜好,凝固备用。
质控标准:1无菌试验合格。
2接种霉菌比在其它培养基上生长良好,其它菌生长不好。
用途:作分离培养霉菌用。
7注意:1 接种临床新鲜标本可先加1-2滴70%酒精让干后再接种于含12.5%氯霉素沙氏斜面培养基上。
2 也可用蜂蜜8克代替葡萄糖或麦芽糖。
13、肉渣培养基成份: 牛肉渣 牛肉浸液(牛肉膏)制法:将做牛肉浸液的牛肉渣,装入试管,高约3毫米,加入牛肉浸液或牛肉膏汤(PH7.6)约5毫升,比肉渣高一倍,液面上加入已溶解的凡士林,高约0.5厘米(不加也可),121℃高压灭菌20-30分钟后保存于冰箱内备用 。
用途:用于厌氧菌培养。
注意:如无肉渣也可用牛、羊血等代替,将血块先放入水内煮沸,取出成小块,血块在加热后摇匀成碎颗粒状。
14、单糖发酵管培养基(半固体)成份: PH7.6-7.8蛋白胨水 1000毫升(0.3克/100毫升)1.2%酚红液 0.4毫升琼脂 0.4 - 0.5克10%糖或醇 10毫升制备:把蛋白胨水,琼脂加热溶解,然后加1.2%酚红液0.4毫升,10%糖108毫升,混匀,分装试管,每管约2-3毫升,经115℃高压灭菌20分钟后,分置于试管架上,贴上各类糖或醇类标签备用。
质控标准:细菌发酵糖类或醇而产生酸,能使培养基PH改变,指示剂由红变黄色,如因发酵产生气体则半固体内产生气泡,如有动力则半固体由清亮变混浊。
15、明胶培养基成份:肉浸液 1000毫升(牛肉浸膏5克)明胶 12克制法:100毫升肉浸液中,加入明胶12克,隔水加热煮化,校正PH7.2,分装小号试管,用阿诺氏间歇灭菌80℃30分钟,连续3日,或者108℃高压20分钟,冷却,贮存备用。
15-1、碱性蛋白胨水成份:蛋白胨 20克 氯化钠 5克硝酸钾 0.1克 结晶碳酸钠(NaclCO3.12H2O) 0.2克水 1000毫升制法:将蛋白胨,Nacl,硝酸钾,结晶碳酸钠称好,溶于1000DW中,校正PH8.49分装试管,121℃高压灭菌15分钟后备用 。
用途:用于霍乱弧菌培养。
16、葡萄糖蛋白胨水(M。
V用)成份:蛋白胨 5克 葡萄糖 5克K2HPO4 5克 水 1000毫升制法:将上述称好溶解分装试管,调PH7.4高压灭菌115℃ 灭菌20分钟 ,或者葡萄糖加热煮沸后再倒试管标准:灭菌试验合格。
接种大肠杆菌VP阴性,M阳性;接种产气杆菌VP阳性,M阴性。
用途:作鉴别肠道杆菌用。
17、枸椽酸盐培养基成份:磷酸二氢铵 0.1克 硫酸镁 0.02克磷酸氢二钾 0.1克 枸椽酸钠 0.23--0.5克(0.36)氯化钠 0.5克 琼脂 1.5克0.5%溴麝香草酚兰2毫升 (调PH6.8再加)制法:将上述称好,放入水中煮沸溶解,调PH6.8,然后分装中号试管,高压灭菌,趁热倒呈斜面,凝固10后备用。
标准:1、灭菌试验合格,培养基呈果绿色适宜。
2、接种大肠杆菌,培养基上不生长,也不变色。
3、接种产气杆菌,培养基呈深兰色。
用途:作鉴别大肠杆菌用。
18、双糖铁培养基成份:下层:蛋白胨 1克 氯化钠 0.5克葡萄糖 0.2克 琼脂 0.3-0.5克水 100毫升将上述物质混匀调PH7.6后加1.2%酚红0.4毫升上层:蛋白胨 1克 氯化钠 0.5克乳糖 1克 硫代硫酸钠 0.03克硫酸亚铁 0.02克 琼脂 1克水 100毫升制法: 1将下层配好,分装中号试管(1毫升),塞好包扎,15磅高压灭菌半小时,使凝固后备用。
2制上层时,先将蛋白胨水制好,加入硫酸亚铁,硫代硫酸钠,加热溶11解PH8.1,再加入酚红分瓶,(每瓶300毫升,称取琼脂包扎灭菌,趁热加入乳糖隔水煮沸30分钟或112℃消毒15分钟)。
3取已制的下层管,每管用无菌法倒入上层液约1。
5毫升,边斜放置使成斜面,凝固后备用。
标准:无菌试验合格,接种大肠杆菌下层产酸产气,上层产酸。
19、尿素培养基成份:蛋白胨 0.1克 氯化钠 0.5克磷酸二氢钾 0.2克 尿素 0.2克(或10%2毫升)葡萄糖 0.01克(或10%葡萄糖0.1毫升)H2O 100毫升 酚红(0.2%) 0.4毫升制法:1除葡萄糖,尿素外把其它药品称好放入水中煮沸,使溶解,调PH7.2过滤,15磅高压灭菌15分钟.2配制尿素(灭菌)液:每100毫升基液内加2毫升.3配制10%葡萄糖(灭菌)每100毫升加0.1毫升.4分装小试管待用.标准:1灭菌试验合格.2接种变形杆菌24小时呈红色.12用途:鉴定变形杆菌用.20、胆盐中性红琼脂成份:蛋白胨琼脂PH7.2-7.4 5000毫升胆 盐 2.5克乳糖 5.0克对氨基苯甲酸 25毫克1%中性红溶液 25毫升制法:将胆盐,对氨基苯甲酸,乳糖趁热加入已灭菌之蛋白胨琼脂中,待冷至50-60℃时,加入1%中性红液2.5毫升,混合后即倾注平皿,凝固待用.*:1%中性红:1克中性红加酒精60毫升,加水40毫升21、丙二酸盐培养基(缩苹果酸钠)成份:丙二酸钠 0.3克 酵母浸膏 0.1克Nacl 0.2克 硫酸铵 0.2克K2HPO4 0.06克 KH2PO4 0.04克水 100毫升PH6.8,高压灭菌备用.130.2%溴麝香酚兰乙醇 1.25毫升制法:与枸椽酸盐利用试验相类似,是测定细菌能否利用丙二酸盐与碳源.无机铵盐为氨源而生长,生长者使培养基变成碱呈兰色.鉴定: 克氏杆菌 (+) 赫夫尼亚 (+)沙门氏菌 (—) 痢疾杆菌 (—)14。