色5min 3.PBS漂洗lmin 4.用0.1mol／L氯化钙溶液分பைடு நூலகம்lmin 5.PBS冲洗、封片,荧光显微镜下观察
吖啶橙染色注意事项
1.吖啶橙浓度过高(>1:500)或过低 (<1:105),影响准确性和可信性
2.甲醛固定的石蜡切片效果不理想 3.PH6.0,DNA结合染料的聚合加速,
PH低于3.8,DNA结合染料的聚合抑 制
Hoechst33258染色步骤
1.培养细胞或细胞悬液, PBS漂洗5min 2.Hoechst33258工作液室温染色
15min 3.PBS漂洗 4.水溶性封片剂封片,荧光显微镜下观察
碘化丙啶（PI）染色
不能透过完整的细胞膜 正常细胞和凋亡细胞PI拒染 坏死细胞核染红色
PI染色
应用：区分凋亡和坏死细胞
吖啶橙染色
应用：
区分活细胞和死细胞,活细胞核呈黄 绿色荧光,死细胞呈红色荧光(溶酶体 酶释放所致) 原位区分组织细胞DNA和RNA
吖啶橙染色 应用：
恶性肿瘤普查: 非典型增生:荧光增强 增生细胞:强荧光 恶性肿瘤细胞:橘红色或火焰
吖啶橙染色步骤
1.95%酒精固定 2.滴加0.01%浓度的吖啶橙荧光染液染
改变GRP78水平对突变Htt细胞毒性的影响
DAPI染色
150Q
GRP78
DAPI
* 较多单转150Q细胞胞核凋亡， 多数共转150Q和GRP78细胞胞 核正常
DAPI染色优点
1.荧光稳定性优于Hoechst 2.特异性较EB,PI高
Hoechst33258染色
非嵌入性的荧光染料 与DNA小沟富集AT的区域结合 活细胞或固定细胞 亮蓝色荧光
DAPI染色
4，6二脒基-2苯吲哚 与DNA特异性结合的荧光染料 可以穿透活细胞胞膜，无明显细胞 毒性 与双链DNA结合,荧光强度增强20 倍,与单链DNA结合,无荧光增强
DAPI染色步骤
1.培养细胞或组织冰冻切片, PBS漂洗 5min
2.DAPI工作液室温染色5-20 min 3.PBS漂洗 4.水溶性封片剂封片,荧光显微镜下观察
AnnexinV-FITC／PI双染流式细胞 术：
细胞膜内侧的磷脂酰丝氨酸(PS)迁 移至细胞外侧，AnnexinV和PS具 极强的结合力，坏死细胞和凋亡细 胞绿色
坏死细胞核被PI染成红色
双变量FCM的散点图
左下象限显示正常活细胞，为FITC-， PI-；
右上象限为坏死细胞，为FITC+，PI+ ；
右下象限为凋亡细胞，呈现FITC+／ PI-
核酸组织化学
核酸： 1.核糖核酸（RNA）：核仁和核糖体
2.脱氧核糖核酸（DNA）：核内的染 色质或染色体
吖啶橙染色
三环芳香类阳离子型碱性荧光染料 嵌入核酸双链的碱基对 与单链核酸的磷酸发生静电相互作 用
吖啶橙染色
与DNA结合,525nm,绿色荧光 与RNA结合,650nm,橙红色荧光与 单链核酸的磷酸发生静电相互作用