H/C 2． 08 2． 49 1． 84 1． 45 1． 78 1． 68 1． 71 1． 56
2． 2 菌株的复筛 H /C 值在一定程度上反映了产淀粉酶酶活的 高低，检测迅速，可用作初筛的判断标准。但 H / C 值受多种因素影响与淀粉酶酶活有一定的不一致 性［5］，如菌种特性、培养时间、培养基成分、酶的稳 定性、酶 的 扩 散 速 度、底 物 浓 度、平 板 厚 度 等。 因
（ 责任编辑：许海丽）
收稿日期：2011 － 03 － 22 作者简介：徐 琛（ 1984—） ，男，江苏启东人，助教。
总第 147 期
齐鲁师范学院学报
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释至 10 － 4 。 取 200μL10 － 4 菌 悬 液 涂 布 于 筛 选 培 养 基 上，
37℃ 培养 24h。在菌落周围滴加卢戈氏碘液，观察 菌落周围 是 否 出 现 透 明 水 解 圈，并 测 定 菌 落 及 水 解圈直径，计算其比值（ HC 比值） 。挑取 HC 比值 较大的菌种分离纯化，保存。
终点，记录时间即为液化时间。
淀粉酶活力 D（ U）
=6
× 10 × 1% t ×2
=3/t
t———液化时间（ min） ；
1． 2． 4 菌种的初步鉴定
对所筛选的菌种进行革兰氏染色、芽孢染色，
通过显微观察及菌落形态进行初步鉴定。
2 结果与分析
2． 1 菌株的初筛
利用筛选培养基从土样中筛选产淀粉酶的菌
1 材料与方法 1． 1 实验材料 筛选培养基［5］： 淀粉 20． 0g，酵母膏 5． 0g，蛋白 胨 10g，Na2 HPO4 5． 0g，MgSO4 ·7H2O 0． 1g，NaCl 0． 1g，琼脂 20． 0g，水 1000mL，pH7． 0 － 7． 4。0． 1 MPa 灭菌 20 min。 发酵 培 养 基［5］： 淀 粉 20． 0g，蛋 白 胨 20g， Na2 HPO4 5． 0g，MgSO4 ·7H2 O 0． 1g，NaCl 0． 1g，水 1000mL，pH7． 0 － 7． 4。0． 1 MPa 灭菌 20 min。 卢戈氏 碘 液： 碘 1g，碘 化 钾 2g，加 水 定 容 至 300mL。 碘原 液： 碘 11g，碘 化 钾 22g，加 水 定 容 至 500mL。 比色稀碘液： 取碘原液 2mL，加碘化钾 20g，用 水定容到 500mL。 土样来源： 林地土壤、草地土壤、湖底淤泥。 1． 2 实验方法 1． 2． 1 产淀粉酶菌株的初筛 称取土样 1 g，放于 300mL 无菌水中打散，制 成菌悬液，将菌悬液置于 80℃ 水浴 20 min，梯度稀
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
株。经过多次筛选并分离纯化后，获得 8 个菌株，
其菌落在滴加碘液后出现水解圈。即淀粉被水解
成了不被碘液着色的物质，如糊精、麦芽糖和葡萄
糖。水解圈与菌落直径的比值（ H /C） 在一定程度
上反映了菌株产生淀粉酶的能力，H / C 值越大产
淀粉酶越多。8 个菌株的水解圈与菌落直径、H / C
值见表 1。
杆菌的分离筛选及其紫外诱变育种［J］． 华北农学 报，2009，（ 3） ． ［5］ 王丽丽，仪宏，田庄，等． α － 淀粉酶产生菌的平板筛 选法 的 研 究 与 改 进［J］． 河 北 轻 化 工 学 院 学 报， 1998，（ 2） ． ［6］ 刘雅琴，陈海魁，孔令全． α － 淀粉酶产生菌的分离 筛选与诱变选育［J］． 畜牧与饲料科学，2010，（ 9） ．
1． 2． 2 产淀粉酶菌株的复筛 在 500 mL 三角瓶装入 100 mL 发酵培养基，将 初筛菌株接入其中，37℃ ，200 r / min 摇瓶培养 70 h，取发酵液测定酶活。 1． 2． 3 淀粉酶酶活测定方法 淀粉酶活测定采用碘消色法［6］： 在 pH 值 6． 0， 温度 60℃ 的条件下，每小时催化水解 1 g 可溶性淀 粉成为糊精的酶量作为一个酶活力单位。 在 25mL 的比色试管中加入 1% 可溶性淀粉溶 液 10mL，60℃ 水浴 5min。加入 2mL 发酵液，混匀。 开始计时，定时取出一滴反应液于比色板，滴加比
目前生产应用的淀粉酶主要来源于微生物， 并集中在 几 种 细 菌 和 真 菌 中，尤 其 以 芽 孢 杆 菌 所 产的 淀 粉 酶 较 多［2 － 4］。其 原 因 首 先 芽 孢 杆 菌 属 （ Bacillus） 中能产生淀粉酶的菌种较多； 其次，芽孢 杆菌属产 的 淀 粉 酶 有 较 好 的 应 用 价 值，如 凝 结 芽 孢杆菌、枯草 芽 孢 杆 菌、嗜 热 芽 孢 杆 菌、地 衣 芽 孢 杆菌产的淀粉酶具有耐热性； 再次，芽孢杆菌应用 历史悠久，广 泛 用 于 饲 料 添 加 剂，其 安 全 性 有 保 证。本文 主 要 从 土 壤 中 筛 选 产 淀 粉 酶 的 芽 孢 杆 菌，并分离纯化，为工业上生产淀粉酶制剂及饲料 添加剂提供菌株。
第 26 卷 第 5 期 2011 年 10 月
齐鲁师范学院学报 Journal of Qilu Normal University
Vol． 26 No． 5 Oct． 2011
产淀粉酶芽孢杆菌的筛选和分离
徐琛
（ 齐鲁师范学院 生物系，山东 济南 250013）
摘要：利用筛选培养基从土壤中分离出 8 株产淀粉酶的菌株，测得其水解圈直径与菌落直径的比值，在 1． 4
徐 琛： 产淀粉酶芽孢杆菌的筛选和分离
表 2 菌株淀粉酶酶活力测定结果
A42
C31
C32
C41
C42
2'50"
7'35"
2'20"
3'9"
4'8"
1． 06
0． 40
1． 29
0． 95
0． 73
D21 4'31" 0． 66
2011 年第 5 期
D31 4'40" 0． 64
2． 3 菌株的初步鉴定 A42、C32 两 菌 株 在 筛 选 培 养 基 上 培 养 24 h 后，菌 落 呈 乳 白 色，边 缘 不 光 滑，直，形 态 不 规 则， 质地干燥，表 面 粗 糙 呈 脉 状。 两 菌 株 在 显 微 镜 下 观察时，菌体形态呈短杆状，经革兰氏染色后结果 呈阳性。菌体经芽孢染色后观察，中央着生芽孢， 芽孢呈卵圆型。可判断 A42、C32 两菌株为芽孢杆 菌属（ Bacillus） 。 3 结论及展望 利用筛选培养基从土壤中筛选出两株具有较 高淀粉酶酶活的菌株，经初步鉴定为芽孢杆菌属。 为 进 一 步 提 高 菌 株 的 生 产 应 用 价 值，下 一 步 工作主要为： 通过发酵条件优化提高菌株产淀粉 酶酶活； 利用诱变的方法改良菌株特性，主要包括 产淀粉酶酶活、对高温的耐受性、最适 pH 值范围。
淀粉 酶 是 催 化 淀 粉 水 解 的 一 类 酶 的 总 称，广 泛存在于 动 物、植 物 和 微 生 物 中。 目 前 淀 粉 酶 广 泛应用多 种 领 域［1］，在 发 酵 工 业 中 淀 粉 酶 可 用 于 淀粉原料的液化及糖化工艺； 在食品工业中淀粉 酶可用于面 包 焙 烤，使 其 体 积 更 大，颜 色 更 好，颗 粒更柔软； 在农业中淀粉酶可作为饲料添加剂，降 解饲料中淀粉营养成分以利于动物吸收利用； 此 外，淀粉酶在 医 疗 卫 生、废 料 处 理、纺 织 印 染 等 领 域都有广泛应用。
色稀碘液，当 紫 色 逐 渐 转 变 为 棕 橙 色 时 即 为 反 应
表 1 产淀粉酶菌株 H /C 值
菌株编号 A41 A42 C31 C32 C41 C42 D21 D31
菌落直径（ C） / mm 3． 9 4． 5 3． 7 5． 5 6． 0 4． 7 4． 5 5． 0
水解圈直径（ H） / mm 8． 1 11． 2 6． 8 8． 0 10． 7 7． 9 7． 7 7． 8
The Screening and Isolation of Bacillus Strains Producing Amylase
Xu Chen
（ Department of Biology，Qilu Normal University，Jinan 250013，China）
Abstract： 8 bacteria strains with activity of amylase were isolated from soil． The ratio of hydrolysis zone diameter to colony diameter was 1． 4 － 2． 4． By fermentating the liquid culture medium，2 of the strains had high activity of amylase，which were 1． 06，1． 29． By Gram＇s staining and spore staining，the 2 strains were identified as Bacillus strains． Key words： Bacillus； Amylase； Isolation
参考文献： ［1］ 冯健飞． α － 淀粉酶的应用及研究进展［J］． 现代农
业科技，2010，（ 17） ． ［2］ 唐丽江，王振华，王迪． 高产淀粉酶芽孢杆菌菌株的
筛选［J］． 安徽农业科学，2009，（ 12） ． ［3］ 张双民，． 土壤中淀粉酶高产菌株的分离及产酶条
件的优化［J］． 土壤肥料，2006，（ 2） ． ［4］ 谢凤行，赵玉洁，周可，等． 产胞外淀粉酶枯草芽孢
此若准确 判 断 菌 株 产 淀 粉 酶 酶 活，需 液 体 发 酵 培 养，测其淀粉酶酶活。
将所筛选的 8 株菌接入发酵培养基进行培养， 取发酵液测定淀粉酶酶活力，结果如表 2。其中菌 株 A42、C32 酶活较高，有一定的应用价值。