2M Na2SO4 or (NH4)2SO4 in 50mM phosphate buffer
0.5M NaCl in 0.1M NaHCO3 or phosphate buffer 1M NaCl in 100mM phosphate or NaHCO3 buffer 2M NaCl in 20 nM phosphate buffer 0.5M NaCl or 0.2M glycine in 20mM phosphate or Tris buffer 2M KCI or NaCl in 20mM phosphate
TOYOPEARL的静臵时间
TOYOPEARL 粒径
Coarse Medium Fine Superfine C级规格: 100 µm M级规格: 65 µm F级规格: 45 µm S级规格: 35 µm 水中静臵时间 15-30 Min. 30-45 Min. 45-60 Min. 60-90 Min.
内容提要 装填前的准备工作
– 小颗粒的去除 – 缓冲液平衡 – 匀浆准备
装填步骤 / 层析柱类型 层析柱的操作
– 柱子的平衡与柱效评价 – 保存
Peak Biotech
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TOYOPEARL树脂填料的装填
装填的一般原则
☆TOYOPEARL的装填压力最好在0.5 - 5 bar的范围内 ☆装填流速至少比实际操作流速高50% ☆不要使用会产生剪切力的装臵（如：磁力搅拌器、 齿轮泵）
装填
管路清洗
运行
卸料
优点：易于装填 弱点：填料用量较大, 卸料可能较难, 有剪切力发生, 卸料会导致大量的浆液体积
Resolute
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恒压装填方法
Radial Flow - “Self Packer” - preset column volume (Proxcys-CRIO)
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恒压装填方法
Horizontal Flow - “Self Packer” - preset column volume
(Pall/Euroflow-ResoluteTM, Millipore-IsoPakTM, GE Healthcare-Chromaflow, Eastern River)
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TOYOPEARL树脂填料 大小型工业制备色谱柱的装填实践
Götec
GE Healthcare
Pall
Pall-Euroflow / Resolute A. Sprauer – 5/06
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TOYOPEARL树脂填料的装填
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恒流速装填方法
恒流速装填法中流速的增加量举例：
柱尺寸 (I.D. x L) 2.2 cm x 60 cm 9 cm x 30 cm 25 cm x 30 cm 填料类型
目标流速 (ml/min)
2
增加量 (ml/min) 0.5 50 500
保持时间 (min) 0.5 2 2
40 – 150
40 – 150 400 – 600 800 – 1000 800 – 1200 700 – 1000 800 – 1200 400 – 600 800 – 1000 800 – 1200 800 – 1000 800 – 1200 800 – 1000
15 – 30
15 – 30 45 – 65 80 – 130 80 – 600 80 – 240 80 – 500 45 – 65 80 – 130 80 – 500 80 – 130 80 – 500 30 – 130
1 M NaCl in 50 mM phosphate, Tris, or acetate buffer
HIC Ether-650, Phenyl-650, PPG-600m, Butyl-650, SuperButyl550C and Hexyl-650c AFC AF-Tresyl and AF-Epoxy-650M AF-Formyl-650M, AF-Amino-650M and AF-Carboxy-650M AF-Heparin HC-560M AF-Chelate-650M AF-Blue HC-650M, AF-Red-650M
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匀浆准备
利用量筒测量静臵胶体体积或使用水泵抽滤浆液至湿滤饼后 计算装填所需要的填料体积 通过添加装填缓冲液调节浆液浓度:
流动式装填柱 ~ 40 - 70% (v/v) 自动装填柱 20 - 60% (v/v)
最终装填好的柱床体积是要小于装填前胶体静臵体积或抽干 的湿滤饼的体积
CRIO - Colonne Radiale InOxidable
o Low space requirements – only 0,5~1 m2; even 600 liter BV is mounted on wheels o Large inlet surface area – cotrolled & gentle product application (“Natural Distribution”). o Thin frit keeps the resin together – it is not used as flow distributor –> a barrier of only ~60um – negligible influence on pressure generation
HW-55S QAE-550C DEAE-650M
300
2000
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恒流速装填方法- 扰动（由入口处筛板下气泡而引起的）
气泡会由于切换阀、管路连接处、 Götec/Superformance 20cm ID Column 活塞运动、未脱气缓冲液而引起........
F (45 um)
HW-75 IEC DEAE-650, SuperQ-650 CM-650, SP-650 2,2 x 60 2,2 x 20 F (45 um) S (35 um) M (65 um) C (100 um) SP-550, QAE-550 MegaCap II SP-550 HIC Ether-650, Phenyl-650, Butyl-650 2,2 x 20 2,2 x 20 2,2 x 20 C (100 um) EC (100-300 um) S (35 um) M (65 um) C (100 um) PPG-600, Butyl-600 SuperButy-550, Hexyl-550 AFC AF-Amino-650, AF-Carboxy-650 AF-Formyl-650, AF-Epoxy-650 AF-Tresyl-650, AF-Chelate-650, AF-Blue HC-650, AF-Heparin-HC-650 AF-Red-650 2,2 x 20 2,2 x 20 2,2 x 10 M (65 um) C (100 um) M (65 um)
Millipore Quik Scale
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实验室规模最优化的装填及柱操作流速
模式 填料类型 柱尺寸 [cm ID x L] SEC HW-40 2,2 x 60 S (30 um) F (45 um) C (75 um) HW-50 2,2 x 60 S (30 um) F (45 um) HW-55 2,2 x 60 S (30 um) F (45 um) HW-65 2,2 x 60 S (30 um) 填料等级 装填流速 [cm/h] 30 – 40 60 – 80 120 – 160 25 – 35 50 – 70 25 – 35 50 – 70 20 – 75 操作流速 [cm/h] 10 – 25 25 – 50 50 – 100 10 – 20 25 – 35 10 – 20 25 – 35 10 – 15
Slurry preparation in the column Settling resin Slurry preparation in a separate tank
Amicon Moduline-120cm ID
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对于给定的柱子，装柱所需的静臵胶体积
Toyopearl HW-40, HW-50, HW-55 HW-65 and HW-75F Ether-650, Phenyl-650 Butyl-650, DEAE-650 Super-Q-650, CM-650 SP-650 and all Affinity QAE-550C and SP-550C
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恒流速装填方法
Flow Packed Columns (Millipore-QuikScale+Moduline, GE Healthcare-BPG, Götec-Superformance, BioRadGeltec, etc.)
方法简介:
将柱底筛板用装填缓冲液润湿（赶走气泡） 任何时候，均需确保浆液在注入层析柱前进行过匀浆操作 匀浆液倒入后，立刻将分配器臵于储槽内浆液表面 分配器与溶液浆液间不应有气泡存在 阶段性调整装填流速至目标流速，以产生一个实时的、没有太大振动 的栓塞流 – 在最初的压实操作基础上，为进一步压实柱床，至少泵入5-10倍柱体 积的装填缓冲液 – 调整分配器至胶体表面 – 重复后两个步骤，直至柱床被彻底压实。最后将分配器移至距离柱床 2-5 mm 处（最后一次）。不要担心使用分配器的同时进行柱床的压 实操作！ – – – – –