裸鼠前列腺原位肿瘤模型的建立(一)
作者：罗勇，张林琳，贺大林，李翔，宁亮，侯惠莲
【关键词】,前列腺癌EstablishmentofprostatecancermodelbyorthotopicinjectionofhumanprostatecancercelllineDu145【Abstract】AIM:Toestablishaprostatecancerorthotopicinjectionmodelinnudemiceandtodiscussitsvalueofappli cation.METHODS:Lowerabdominalincisionwasmadein10malenudemice.Afterthebladderandprost atewereexposed,Du145（6×106）wasinjectedinventralprostatelobesundertheprostaticcapsulebyaTBsyringewitha29gaugeneedleat5 0μLpermouse.Theabdominalwallandskinwerethenclosedwith70surgicalsutureandthevitalsignsoft henudemicewereobserved.Whenthemiceweredying,theyweresacrificed.Afterthemousewaskilled, thetissuesofprostate,bladder,lymphaticnode,lungandliverweretakenout,fixedin40g/Lformaldehyd e,embeddedinparaffin,stainedbyHEandthenobservedmicroscopically.Thebonemetastasiswasobse rvedbyXray.RESULTS:Theincidenceofprimarytumorafterintraprostaticinjectionwas60%
（6of10）.About14dlater,thereweresmallpalpablenodesinprostateandabout19dlater,cachexiaocc urredinnudemice.Afterdissection,itwasshownthatthediameterofprimarytumorsvariedfrom0.8cmt o1.5cmandtheenvelopeoftheliverbecamecrimpy.Acutehepatitiscouldbeobservedundermicroscop y,whichrepresentedalargescaleofhepatocytedeath,liversinusdilatationandhyperemia,hepaticlobul einfiltratedbylymphocyteandmacrophageandinconspicuoushyperplasia.CONCLUSION:Theorthoto picinjectionmodelisanoptimalanimalmodeltostudytheoccurrenceanddevelopmentofprostatecanc er.Itmimicsthenaturalsituationofhumanprostatecancerandwillhelptounderstandthemechanismsof androgenindependenceandosseousmetastasisandtumorhostdeterminantsofprostatespecificantig en(PSA)expression.
【Keywords】prostateneoplasms;orthotopicinjection;metastasis;nudemice
【摘要】目的：建立一种裸鼠前列腺癌原位模型.方法：在10只裸鼠下腹部切口，显露膀胱和前列腺，用1mLTB针筒、29G针头在其前列腺左右腹侧叶包膜下接种人前列腺癌DU145细胞50μL，共计6×106个，以建立原位肿瘤模型，观察裸小鼠生命体征变化.于濒死状态下处死，并取原位肿瘤、膀胱、盆腔淋巴结、肺脏和肝脏标本，用40g/L甲醛固定、石蜡包埋和HE染色后显微镜下观察，Ｘ线照射显示骨骼转移情况.结果：10只裸鼠中有6只模型建立成功.接种后14ｄ左右，可触及前列腺部位有黄豆大小的包块，质硬.19d后出现恶液质，解剖后发现前列腺部位有包块生长，直径约在0.8～1.5ｃｍ，其中2例侵及膀胱.肝脏泛黄、被膜皱缩，镜下呈急性重型肝炎的病理改变.结论：小鼠前列腺原位移植瘤模型建立成功.【关键词】前列腺癌；原位注射；转移；裸鼠
0引言
前列腺癌初诊时大约30%～50%的患者已发生转移〔1〕，而目前针对前列腺癌侵袭和转移的机制及有效的治疗措施研究较少，一个重要原因是缺乏合适的动物模型.为了建立一种更接近于人类肿瘤体内自然生长过程的前列腺癌动物模型，我们通过原位注射人前列腺癌细胞Du145技术建立起BALB/c裸鼠的前列腺癌原位种植瘤模型如下.
1材料和方法
1.1材料
雄性BALB/c裸鼠10只，6wk龄，体质量20ｇ左右，由第四军医大学实验动物中心提供.均在SPF条件下层流架内饲料饮水自由摄入.Du145细胞系由美国ChungLW惠赠.用含100mL/L 胎牛血清（杭州四季青公司）的RPMI1640培养液（美国Gibco公司）在37℃，50mL/LCO2的孵箱内培养，以1.25g/L胰酶和0.2g/LEDTA的混合液消化传代.
1.2方法
裸鼠用10g/L戊巴比妥钠（75mg/kg）麻醉，仰卧位，胶带固定四肢，下腹部正中横切口1cm，暴露膀胱和精囊腺，用棉签轻压膀胱顶壁、腹侧壁，并向下游离至膀胱颈，推开肌肉及生殖腺进一步暴露前列腺，可见其大小约1.0ｍｍ×1.5ｍｍ×2.0ｍｍ，分左右2叶，呈粉红色，有明显的腺体组织特征.用1mLTB针筒、29G针头轻轻挑起一侧前列腺包膜，缓慢进针，直至顶起对侧包膜，明确针尖进入包膜后，再缓慢推注Du145细胞悬液50μL（6×106个），以包膜向上鼓起，脱离腺体表面为满意标准.恢复脏器的解剖位置，用70可吸收线分别间断缝合腹壁肌肉层和皮肤层，待鼠苏醒后回笼.以裸鼠出现恶液质、处于濒死状态作为观察终点，颈椎脱臼法处死.尸解并观察荷瘤部位肿瘤的生长情况.裸鼠处死后，立即在100mA，40kV，5.23ms条件下行Ｘ线检查.裸鼠与球管距离为1.0ｍ；然后取前列腺、膀胱、盆腔淋巴结、肝脏和肺脏标本，40g/L甲醛固定、石蜡薄层切片4μm，HE染色后光镜下观察有无转移灶.
2结果
2.1肿瘤模型的建立裸鼠注射后14d可于下腹前列腺部触及结节，黄豆大小、表面光滑、质硬、活动度差.19d出现恶液质，解剖后发现6只裸鼠前列腺部位有包块形成，直径0.8～1.5ｃｍ.病理证实原位移植瘤模型建立成功.
2.2侵袭和转移前列腺部位包块呈结节状、质硬，与周围精囊腺、输精管、膀胱及肠管黏连.肝脏有明显的肉眼病变，体积缩小、颜色泛黄、表面被膜皱缩、遍布黄色斑点状病变.2只裸鼠前列腺原位肿瘤侵及膀胱（Fig1），病理检查未见肝、肺、盆腔淋巴结肿瘤转移灶；X线也未发现骨骼病变.
2.3HE染色结果前列腺组织内有成群密集的未分化上皮细胞，细胞排列紊乱，有丰富的、泡沫样的嗜酸细胞象，异形性明显，核大深染，核内有多形的、数目不均的染色质（Fig2），有巨核细胞，间质成分少，瘤体中间无坏死，仅见极少腺样结构；肝脏呈急性重型肝炎表现，镜下可见：肝细胞弥漫性的大片坏死，以小叶中央最为明显，肝窦扩张充血，小叶内有淋巴细胞和巨噬细胞为主的炎性细胞浸润，小叶增生不明显.
3讨论
人前列腺癌动物模型是研究前列腺癌发病机制、肿瘤与宿主关系、癌肿侵袭与转移过程和治疗措施有效性不可缺少的理想实验工具，因此，建立理想的前列腺癌动物模型应能最大程度地模拟人类前列腺癌的发生过程并具备以下特点〔2〕:①人源性肿瘤,可分泌前列腺特异性抗原(PSA)；②肿瘤特性与人类前列腺癌相似；③对激素的治疗反应与人前列腺癌相似.。