岛津LC-20AT高效液相色谱操作步骤
1、流动相的处理
◆共有5个流动相储液瓶。

一般RP-HPLC中，A（无机相）、B（有机相）为
分析流动相；C（水）、D（甲醇）用于柱子后处理清洗；50%甲醇-水用于清洗自动进样针
◆流动相体积V A、B=100+总流速×比例系数×分析时间（mL）；V c≥300mL；
V D≈350mL；V50%甲醇≈300mL
◆所有流动相须用0.22um孔径滤膜过滤（根据有机相和无机相选用相应滤膜），
清洗储液瓶，不能在清洗过程中留下污迹，并超声30min，超声完成后禁止剧烈摇晃
2、开机
◆开启插座电源电脑开机
◆打开仪器电源（LC—20AT最后打开，等待数秒后“control”指示灯亮）
◆打开软件（Labsolution 仪器LC—20A），若连接正常则软件
显示LC就绪
3、自动排气
◆将各流动相过滤头缓慢放入流动相中
◆在简单设置界面设置总流速为0.2mL/min；在自动排气界面设置自动排气参
数（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ各流动相≥5min，自动进样器≥25min），不勾选“排气结束后运行控制器”
◆“下载”“执行自动排气”
◆等待排气结束
4、样品处理
◆稀释后的样品（浓度约1mg/mL，不宜过高）用注射器经0.22um过滤器注
入样品瓶
◆样品应≥2/3样品瓶体积（1.5mL样品瓶）
◆按序号依次将样品瓶放入自动进样器的样品架上
◆切记：将样品架推到底！
5、系统平衡及设置分析条件
◆自动排气完成后，设置柱温、检测波长等参数(建议柱温高于环境10℃)，
用梯度洗脱初始流动相平衡柱子（流动相比例与梯度洗脱初始比例一致）
◆“下载”“激活/取消激活仪器”，此时系统显示：等待柱温稳定
◆缓慢增加总流速至样品分析所需流速，V max=1ml/min（每隔1分钟增大
0.2mL/min，注意每次增大都点击“下载”）
◆在时间程序界面设置梯度洗脱条件
◆若要保存方法文件：文件方法文件另存
◆等待基线平稳（留意泵压力是否稳定），待系统显示：LC就绪，右击，进行
基线测试斜率（一般＜3000即可）
◆开始测样
6.“单次分析开始”或“批处理”
6.1单次分析开始
◆依次输入样品名（样品ID可有可无）、样品瓶、瓶架（1）、进样体积等
◆注意数据文件所在文件夹，输入数据文件名打开
◆确定
6.2批处理
◆“向导”
◆“新建”，样品组号（1），选择“未知样品”，依次输入文件名及其他
◆注意批处理文件所在文件夹，勾选“数据文件名自动递增”、不勾选“自动创
建文件名”
◆完成
◆选中全部序列
◆开始批处理
7.柱子后处理：先用易溶解样品的流动相清洗（一般用高比例有机相洗15min），10%甲醇洗30min，再用90%甲醇洗30min；长期不使用保存于纯甲醇中
方法一：
◆在简单设置界面设置：流动相C-90%；流动相D-10% 下载
◆切换柱温箱off
◆30min后设置：流动相C-10%；流动相D-90% 下载
方法二（推荐）：
◆设置洗柱程序
◆“下载”
◆“单次分析开始”样品瓶输入“-1”文件名“洗柱”
◆系统提示“禁用采集”确定
8.数据处理（打开Labsolution 再解析）
8.1标准曲线
◆数据处理打开文件“向导”
◆勾选特征峰、外标法
◆依次输入最大级别数（标曲的点数）、单位、化合物名、浓度等完成◆应用到方法方法另存为
◆主项目批处理打开批处理文件
◆填写表格：首行（标准、初始化标准点），（标准样数与前面的最大级别数相
对应，剩下的为未知）、（文件方法为先前保存的方法，向下填充）、（标准样品级别号分别1.2.3.4.5未知样品0）
◆批处理再解析开始批处理文件另存
◆主项目校准曲线（可找到已做成的标曲）
8.2生成报告
◆打开要生成报告的数据文件
◆视图手动积分栏，处理数据文件
◆生成报告
◆右击“属性”进行调整，预览、打印
8.3检测限、定量限的确定、扣除背景（略）
9.实验结束后，“切换泵ON/OFF ”确认泵泵压力降为零
关软件
10.电脑关机关闭插座电源。

注意事项
LC—20A（G）液相教学视频要在英文目录下才可以播放，不能含中文字
在流速较大时，若发现泵压力接近19MPa尚有上升趋势，必须马上降低流速。