常用试剂配制-生物、化学．常规试剂配制和测定方法一、溶液的配制1000 mL）1. Mandels营养盐溶液（g）称重量（名14 ）)硫酸铵（(NHSO42420 ）磷酸二氢钾（KHPO423 尿素）HNCONH （223 ）MgSO·7HO硫酸镁（244O）氯化钙（CaCl·2H22注：用煮沸10 min后的蒸馏水配制。
微量元素溶液（1000 mL）2. Mandels）量（g称重名3.7 氯化钴（CoCl·O）6H221.4 ）·ZnSO7HO硫酸锌（241.6 O）MnSO硫酸锰（·H245.0）硫酸亚铁（FeSO·7HO24后的蒸馏水配制。
注：用煮沸10 min3. DNS试剂的配制（1000 mL）（1）取：3,5-二硝基水杨酸（CHNO）7.5 g7472氢氧化钠（NaOH ）14.0 g充分溶解于1000 mL 水中（水预先煮沸10 min）（2）加入：酒石酸钾钠（CHOKNa·4HO）216.0 g 24465.5 mL℃水浴中融化）50 苯酚（在6.0 g偏重亚硫酸钠（NaSO）522使5天后便可使用，平时盛一小瓶(250 mL)（3）充分溶解后盛于棕色瓶中，放置用，要放在冰箱中冷藏。
此溶液每月配制一次。
注意：倒入瓶中时要尽量装满！！的配制（1000 mL）4. 考马斯亮蓝G-250mL 乙醇中，加入100 mL 即0.1g溶于50 95%称考马斯亮蓝G-250 100 mg）（w/v85 %磷酸，用蒸馏水稀释至1000 mL ，滤纸过滤。
最终试剂中含0.01 % w/v）磷酸。
（w/v）乙醇，8.5 %（，考马斯亮蓝G-2504.7 %1000 mL）5. 1.0 M柠檬酸缓冲溶液的配制（(g) 量量Mn重分名称子210 210 O）H柠檬酸（CHO·2678 74.5 40NaOH准确称取柠檬酸210 g，溶于约750 mL煮沸（10 min）蒸馏水中，待柠檬酸充分溶解后加入氢氧化钠74.5 g，完全溶解后将上述溶液转移到1000 mL容量瓶中，冷却后将容量瓶定容到1000 mL（原始pH4.45）。
（检验方法：取1.0 M柠檬酸缓冲溶液稀释20倍，测定稀释液的pH值，pH值应为4.8）6. 标准糖溶液的配制和标准方程的测定（1）标准糖溶液的配制准确称取2.000 g葡萄糖/木糖（葡萄糖/木糖需105 ℃烘干3 h），蒸馏水溶解，全部转移至1 L容量瓶内，摇匀，配制成2 g/L葡萄糖/木糖溶液。
取9个100 mL容量瓶、1支20 mL刻度吸管，分别吸取2 g/L葡萄糖/木糖溶液10 mL、20 mL、30 mL、40 mL、50 mL、60 mL、70 mL、80 mL、90 mL依次加入容量瓶，蒸馏水定容，摇匀。
即为0.2 g/L、0.4 g/L、0.6 g/L、0.8 g/L、1.0 g/L、1.2 g/L、1.4 g/L、1.6 g/L、1.8 g/L、2.0 g/L葡萄糖/ 木糖标准溶液。
取6个30 mL容量瓶、1支20 mL刻度吸管，分别吸取2 g/L葡萄糖溶液10 mL、12 mL、14 mL、16 mL、18 mL、20 mL依次加入容量瓶，每瓶再加入1.5 mL柠檬酸缓冲液，蒸馏水定容，摇匀。
即为1.0 g、1.2 g、1.4 g、1.6 g、1.8 g、2.0 g 酶解葡萄糖。
（2）标准方程的测定：①葡萄糖/木糖标准方程的测定取10支25mL刻度管，10支1mL刻度吸管，分别加入0.2 g/L、0.4 g/L、0.6 g/L、0.8 g/L、1.0 g/L、1.2 g/L、1.4 g/L、1.6 g/L、1.8 g/L、2.0 g/L葡萄糖/木糖标准溶液1 mL，DNS溶液3 mL。
100 ℃煮沸5 min，水浴冷却后定容至25 mL，摇匀。
以蒸馏水作为空白对照，550 nm测定吸光度A。
以A为纵坐标，C为横坐标，制定标准曲线。
（7230型分光光度计输出方程为：A = MC + N，723型分光光度计输出方程为：C = KA + B）②酶解木糖标准方程测定（测定木聚糖酶活力）取6支25 mL刻度管，6支2 mL刻度吸管，分别加入1.0 g、1.2 g、1.4 g、1.6 g、1.8 g、2.0 g酶解木糖标准溶液1.5 mL，DNS溶液3 mL，100 ℃煮沸5 min，水浴冷却后定容至25 mL，摇匀。
以蒸馏水作为空白对照，550 nm测定吸光度A。
以A为纵坐标，C为横坐标，制定标准曲线。
（7230型分光光度计输出方程为：A =MC + N，723型分光光度计输出方程为：C = KA + B）③酶解葡萄糖标准方程测定（测定滤纸酶活力、CMC酶活力）取6支小试管，6支2 mL刻度吸管，分别加入1.0 g、1.2 g、1.4 g、1.6 g、1.8 g、2.0 g酶解葡萄糖标准溶液1.5 mL，DNS溶液3 mL，100 ℃煮沸5 min，水浴冷却后，量筒定容至50 mL（定容至25 mL，测定CMC酶活力），摇匀。
以蒸馏水作为空白对照，550 nm测定吸光度A。
以A为纵坐标，C为横坐标，制定标准曲线。
（7230型分光光度计输出方程为：A = MC + N，723型分光光度计输出方程为：C = KA + B）7. 柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液的配制0.1 mol/L0.2 mol/L磷酸氢二/mL柠檬/mL10.729.2811.158.8511.608.4012.097.9112.637.3713.226.7813.856.1514.555.4515.454.5516.473.5317.392.6118.171.8318.731.2719.150.8519.450.55注：NaHPO，Mr =141.98；0.2 mol/L溶液为28.40 g/L42NaHPO·2HO，Mr =178.05；0.2 mol/L溶液为35.61 g/L 224CHO·HO，Mr =210.14；0.1 mol/L溶液为21.01 g/L2768酶活力的测定二、—纤维素酶的总体酶活力1. 滤纸酶活力的测定et ）推荐的标准方法测定[Ghose,T.K., 采用国际理论和应用化学协会（IUPAC 等于）（，一个滤纸酶活力的国际单位FPIU al,Pure & Appl.Chem.,1987,59,257-268]葡萄糖量的酶量。
测定方法如下：在标准反应条件下每分钟生成1 μmol##，）卷成筒状的滤纸条（1 ×-5 6cm支小试管中加入50 mg取7支试管在其中1##有底物无酶，67支试管按下表操作。
（5为有酶无底物空白对照）适当稀释酶液，取####### 7 目项45 3 61 2稀释酶液（mL）酶解葡萄糖0.5 0.5 0.3 0.4 0.21.5mL标样mL）0.05 M柠檬酸缓冲液（1.3 1.11.51.21.0180将上述试管盖上塑料布，用橡皮筋扎紧后置于恒温水浴器中，保持在振幅，5 min3 mL DNS试剂，在沸水中反应50 和温度℃下保温60 min后立即取出加入波长550 nm冷却后加水至50 mL并充分摇匀，待滤纸完全沉淀后，取上层清液于值。
反应生成的葡萄糖的量根据葡萄糖标准曲线求得。
下测定吸光度A酶量所生成葡萄糖的毫克数为横坐标，酶量的对数为0.5mL0.4、以0.2、0.3、葡萄糖的酶量，按下式计算样品的滤纸酶活力mg纵坐标作图，从图中找出生成2 ）：FPA（葡萄糖 2 mg =滤纸酶活力mL）60min×0.18(mg/μmol)×生成2mg葡萄糖的酶量（。
1μmol一个滤纸酶活力单位定义为每分钟生成葡萄糖所需的酶量，单位：IU/mL葡萄糖）仍无法生成酶液（指酶液没有被稀释的时候！2 mg备注：当加入0.5 mL 时，按下式计算：数）（葡萄糖滤纸酶活= 0.185 ×mg葡萄糖苷酶活力的测定β-2. 方法一：葡萄糖氧化酶测定法一。
按国际标准方法测定[Ghose,T.K.,etal,Pure & Appl.Chem.,1987,59,257-268]底物即生等于标准条件下每分钟转化1 μmol葡萄糖苷酶活力国际单位个β-(IU/mL) 2 μmol葡萄糖的酶量来表示。
成纤维15 mmol/L的纤维二糖溶液（0.513 g预先用0.05 M的柠檬酸缓冲液配制的柠檬酸缓冲液，现配现用）二糖/100 mL0.05 M 每个样品应做三个不同酶量（1）葡萄糖苷酶活力β-估计0.1 <0.3 0.2 0.1 （IU/mL）0.1/0.2/0.30.2/0.3/0.50.3/0.5/0.80.5/0.8/1.0取酶液量（mL）加料：试管中加入酶液、缓冲液和纤维二糖溶液如下：（2纤维二糖溶液mL ）mL）（（（mL）1 1－酶液适量样品0 1 1 酶液空白11纤维二糖空白每个试管共2mL，用塑料纸包扎好。
注意：纤维二糖溶液必须用0.05M柠檬酸配制。
（3）酶解反应：试管置于50 ℃水浴中，保温30分钟，取出，沸水中放置5分钟使酶失活，冷却至室温。
（4）加显色剂（葡萄糖氧化酶测定试剂）：取试管中冷却液30 μL，加入显色剂3.0 mL，混匀；同时做一个葡萄糖标样：取1 g/L葡萄糖标样30 μL，加显色剂3.0 mL，混匀；置于37 ℃水浴中，保温15分钟，取出。
（5）测吸光度：505 nm，用蒸馏水调零，测各试管溶液吸光度A值。
1g/L葡萄左右。
0.7糖标样的吸光度为mg数：（6）计算产生的葡萄糖吸光度品样）（m 测得酶空白所含葡萄糖= 2 ×1g/L葡萄糖标样吸光度纤维二糖空白mg]－[纤维二糖空白葡萄糖= [测得葡萄糖mg]样品实际产生的葡萄糖mg）（－[酶空白葡萄糖mg] ×[酶液量mL]注：纤维二糖空白所产生的响应值，当纤维二糖溶液为新鲜配制时，一般很低。
为横坐标作图，为纵坐标，实际产生的葡萄糖mg作图：以log(酶液量mL)7（）mL。
求出生成1 mg葡萄糖时对应的酶液量葡萄糖苷酶活力：计算β-（8）0.0926IU/mL）葡萄糖苷酶活力β- =mL）生成1mg葡萄糖对应的酶液量（葡萄糖时，注：当加入1mL酶液仍不能生成1mg 数）0.0926×（葡萄糖mg葡萄糖苷酶活力β- =补充：葡萄糖含量测定☆过氧化物酶终点比色法测定。
葡萄糖测定试剂盒由上海荣采用葡萄糖氧化酶-R和，使用时将R（缓冲液）和R（酶试剂）R盛生物技术有限公司生产，内含2112等量混合。
葡萄糖经葡萄糖氧化酶氧化成葡萄糖酸和过氧化氢，后者在过氧化物酶氨基安替比林与苯酚偶联缩合成可被分光光度计测定的醌类化合4的作用下，将-物。