4、按下列顺序依次降温：室温→4℃ 20min →-20℃ 30min →-80℃过夜→液氮保存。

也可使用程序降温盒更为方便，细胞冻存管放入程序降温盒内可直接放入-80℃过夜，再转至液氮罐内。

注意程序降温
盒内异丙醇的量必须高于最低刻度线；冻存5次后异丙醇需要跟换一次，以免影响冻存效果。

5、冻存细胞后应取出一管复苏，检测细胞的存活率。

理论上细胞可在液氮内长期保存，为稳妥起见可在细胞冻存半年后复苏培养，观察细胞生长情况，再继续冻存。

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