题也有机遇问题
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制备单克隆抗体的基本原理：
致敏的B淋巴细胞
骨髓瘤细胞 （myeloma）
（能够分泌特异性的抗体 ，
（不能分泌特异性的抗体，
不能在体外长期生存 ）
但能在体外长期生存）
阳性杂交瘤细胞 (hybridoma)
1
（既能分泌特异性抗体，
2
又能够在体外长期生存）
克隆化培养
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（产生单克隆的阳性杂交瘤细胞）
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比单抗更容易捕捉抗原。 因为含有抗不同表位的抗体，多种抗 体都可与抗原结合。
抗体的纯化、标记比单抗难 因为含有各种不同类型、亚类的抗体， 提纯、标记的方法有所差别。同时,血 清中含有的杂蛋白比较多.
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二、抗体的制备
1、单克隆抗体的制备
▪ 无法采用生物化学的方法从多抗中分离 ▪ 必须采用细胞杂交的方法来制备 ▪ 能否筛选到理想的单克隆抗体有技术问
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人工抗原合成常用的载体
载体的 特点
载体表面应首先应具有化学活性基团。 载体应具备一定的容量，可以偶联足够的分子。 载体应该是惰性的，不应干扰偶联分子的功能。 载体应具有足够的稳定性，且应该是廉价易得的。
牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)、钥孔血蓝蛋白(KLH)、 人血清白蛋白(HSA)及人工合成的多聚赖氨酸(PLL)等是常用 的载体蛋白。
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生产单克隆抗体
2
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单抗与多抗的区别
抗体组成 抗体性质 纯化标记 种属来源 制备周期 制备技术 经费
单抗 单一 个体的属性 容易，效果好 绝大多数是小鼠 长 (最短4个月） 复杂 多
多抗 复杂 群体综合的性质 难度高一些 兔子、羊、豚鼠等 短（2个月） 简单 少
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一、抗体的一些基本概念
▪ 单克隆抗体 (Monoclonal Antibody,McAb) 单个B淋巴细胞克隆所分泌的抗体
▪ 多克隆抗体 (Polyclonal Antibody) 多个B淋巴细胞克隆所分泌的抗体
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抗原（antigen ，Ag）
表位，抗原结合位点，抗原决定簇（epitope）
1 4
Ag
2 3
8
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1 4
Ag 2
3
9
B1ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
B2
B3
B4
多克隆抗体
B3 B3 B3 B3
单克隆抗体
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1、单克隆抗体的特点
特异性强，具有抗原结合位点的专一 性。（不是抗原的专一性！）
因结合位点的单一性，有时不易捕捉 抗原，一株单克隆抗体与抗原不易产 生凝集反应或沉淀反应。
▪ 抗体的性质相同，容易纯化、标记。
第十章 抗原和抗体的制备与应 用
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• 抗原——是指能够刺激机体产生（特异性）免疫 应答，并能与免疫应答产物抗体和致敏淋巴细胞 在体内外结合，发生免疫效应（特异性反应）的 物质。
• 抗原的基本特性： ①诱导免疫应答的能力，即免疫原性。 ②与免疫应答的产物发生反应，即抗原性（免疫反
应性）。
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免疫原——具有免疫原性的物质
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单克隆抗体有交叉反应是由于不
同的抗原上有完全相同的表位（100% 的交叉反应）,或有相似的表位（不同 程度的交叉反应）。
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2、多克隆抗体的特点
多抗是单抗的混合物，因此多抗的性 质是一个群体综合的性质。 特异性一般比单抗差 因为由不同性质的抗体组成，只要其 中含交叉反应的抗体，多抗就有交叉 反应，所以多抗更容易有交叉反应。
• ③基因工程抗原：将编码免疫原性氨基酸序列的基因克隆化并与适当 载体（如细菌粒或病毒）DNA分子相结合，然后引入受体细胞中（如 原核细胞的大肠杆菌或真核细胞酵母菌及哺乳类动物细胞）使之表达， 即能获得免疫原性之融合蛋白，经纯化后可做为疫苗，此即基因工程 疫苗。
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人工结合抗原
半抗原 偶联桥
载体蛋白
构决定簇的抗原，称之为人工抗原。
• ①人工结合抗原：将无免疫原性的简单化学基团与蛋白质载体偶联， 或将无免疫原性的有机分子如二硝基苯（DNP）或三硝基苯（TNP） 与蛋白质载体结合，形成载体-半抗原结合物，均属人工结合抗原。
• ②人工合成抗原：用化学方法将活化氨基酸聚合，使之成为合成多肽。 只由一种氨基酸形成的聚合体称为同聚多肽，如由左旋赖氨酸形成的 共同聚多肽（PLL）。
半抗原：能与对应抗体结合出现抗原-抗体反应 、又不能单独激发人或动 物体产生抗体的抗原。它只有反应原性，不具免疫原性，又称不完全 抗原。一些比一般半抗原分子量小，但有特异结构的化学活性基团物 质（ 如青霉素、磺胺剂等 ） ，称为简单半抗原。
载体蛋白：制作人工结合抗原时与半抗原进行偶联的具有免疫原性的生 物大分子，主要为大分子的蛋白质。如：牛血清白蛋白(BSA)。
化学组成 大分子蛋白、多糖等
免疫原性的 化学基础
分子量
﹥ 10000 具有免疫原性 ；4000 ﹤免疫原﹤
10000 呈弱免疫原性 ； 4000 ﹤ 一般不具 有免疫原性。
化学结构
一般而言，分子结构和空间结构愈复杂的物 质免疫原性愈强
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人工抗原
• 人工抗原：用化学合成法或基因重组法制备含有已知化学结