微生物实验室的安全操作规程1 实验室安全1.1 微生物实验室的生物安全性1.2 科室安全文档（a）生物危害防护：实际操作规程见（《实验室生物安全通用要求》，中华人民共和国国家标准GB19489-2004。

2004-01-05发布，2004-10-01实施。

）（b）实验室安全：原则和措施见（《微生物和生物医学实验室生物安全通用准则》，中华人民共和国卫生行业标准WS 233-2002。

2002-12-03发布，2003-08-01实施。

）1.3 应用：以上的操作规程应用于微生物科室的所有部门。

工作人员或访问人员必须遵守各项规定。

1.4 关于新规定或现行规定的修改案：任何新规定或现行规定的修改案必须通知负责科室安全的人员及相关人员，他们将建议科室主任考虑实施。

1.5 生物性危害1.5.1 与各种操作有关的生物危害水平取决于：a.处理的传染性物质的本身：按照传染性物质对个人和社区的潜在危险性以及经空气传播的可能性，其划分成不同等级。

所采用的等级划分详见＂《实验室生物安全通用要求》＂；原则和措施（见《微生物和生物医学实验室生物安全通用准则》）。

b.使用的设备和设施：处理不同等级的传染性物质的要求在＂实验室安全＂中已规定。

这些符合要求的设备都要承担重要临床工作，科室负责人必须保证中应污染物水平。

c.培训，特别是员工的安全性培训和安全性经验积累。

所有员工应该接受一定训练，能安全处理任何实验室可能碰到的物质，避免将实验不能处理或规定之外的传染性物质暴露在实验室，即使暴露事故在实验室，即使暴露事故发生也要会正确处理。

1.5.2 传染性物质的分类1.5.2.1分类系统生物危害防护：［见1.2 (a)］，根据生物因子对个体和群体的危害程度将其分为4级，危害等级Ⅳ最具危害性。

1.5.2.2危险群/生物安全水平：1－4a.危险群/生物安全水平：1——对健康成人无致病性，对社区无危害性。

通常一般微生物操作就足够，不需特殊安全设备，工作的附近要有洗手设施。

培养基上包含未鉴定物，因此，妥善处理对各级安全水平都至着重要。

b.危险群/生物安全水平：2——人类疾病相关物质，这种物质对实验室工作人员有中度危险，并具有一定程度社区危险性。

医院微生物室所涉及的绝大多数物质属此安全水平，生物危害警告应张贴，并且限制接近，应用醒目标语，若是能产生空气传播或飞溅的I，II类物质都应使用相应的操作台。

实验室应提供类似防护衣、手套和眼罩，尤其是配戴隐形眼镜者，也应提供类似安全水平的洗手设施，并且临近工作区也应有高压灭菌装置。

所有废物和反复使用设备的去污染应有特定的程序。

c.危险群/生物安全水平：3——人类疾病相关物质，具有潜在空气传播性，能引起严重的、致命的疾病，对实验室工作人员高度危险，并具有一定程度社区危险性。

所有含有或怀疑含有生物3级物质的标本必须标以＂小心污染＂标签，并且同时标于盛放标本容器和申清单。

应对所有血液、体液、分离的人体组织等有普通防护意识，它们都应被视作传染源。

在此生物安全水平等级，实验室应控制对其接近。

凡涉及该类物质都应使用I或II类工作台操作，也可以遵循II级操作注意事项，对所有废物进行去污染处理，包括工作服和重复使用设备。

d.危险群/生物安全水平：4——对个人的危险如生物安全3级，但对社区有高度危险性。

这些传染性物质包括：蜱源性脑炎病毒支里半亚－刚果牛血热病毒Marburg Virus艾波拉病毒Lagsa fever VirusJunin HF VirusMachupo HF VirusGuanaruto HF VirusHerpesvirus simiae (B Virus)1.6 以下预防措施，所有实验工作人员必须遵守：1.6.1 工作服a.所有实验室成员在工作期间必须始终穿着所提供的工作服。

离开实验室时，工作服须挂在指定地方，不得在实验室外冼工作服。

b.在处理含有或怀疑含有生物安全3级物质的标本时，必须在工作服外穿隔离衣。

c.在生物安全操作台内处理标本和培养基时，必须戴手套。

1.6.2 洗手池洗手池须供应洗洁剂和纸巾。

1.6.3 洗手所有工作人员在离开工作区必须洗手，并且要先脱去工作服和手套。

1.6.4 食物、饮水、吸烟、化妆品食物和饮料不允许带入任何处理标本的房间。

不允许在处理标本的任何地方吸烟。

不允许在处理标本的任何地方使用化妆品。

1.6.5 伤口和擦伤手上的伤口和擦伤必须覆盖保护物。

1.6.6 个人衣物个人衣物不允许带入实验室，并且必须保存在带锁的柜子里。

1.6.7 口吸移液管这是禁用的。

要求使用机械移液装置。

1.7 常规预防措施应用于所有血液、体液、组织标本的操作中：1> 无论何时都应尽可能避免使用注射器、针头或其它锐器。

2> 使用过的针头和一次性切割器必须丢入专门的带有盖子的桶内，以备安全处理，防止容器过满盛装。

3> 使用过的针头不许重新使用或再用手操作。

4> 打烂的玻璃必须放入坚硬的容器（不要用手），然后再放入黑色垃圾袋，如果是污染的，使用黄色垃圾袋。

5> 在接触具有潜在性传染性标本培养基、组织，必戴保护性手套，防止皮肤直接接触。

如果手套有可见的污染，必须先除去污染，再更换。

手上有皮炎或伤口的工作人员的需要间接接触传染性物质的人员应戴保护性手套。

6> 在处理完标本、结束工作，甚至在上述规定带手套时，应常规洗手。

7> 当血液、血液制品或其它体液污染发生时，应停止工作洗手，戴一次性手套再清除污染区。

建议用含有效氯1000ppm的次氯酸钠溶液。

如果污染区较大用浸有次氯酸钠溶液的湿布覆盖10min去污染，并标示相应的警告，丢弃废物及手套到生物安全级物理容器。

注意飞溅的水滴和流淌的水会将污染带到主污染区以外。

8> 所有在实验室使用的具有潜在污染性的物质都需去污染，最好先高压，再做处理。

9> 任何可能产生飞溅或气雾的操作都应在生物安全操作台里进行。

这些操作包括离心，分离血清，混合，超声，收集组织受精卵，以及处理含有浓集的感染物质标本。

1.8 实验室物质处理a> 黑色塑料袋用来收集未污染或经高压处理的废物。

b> 废纸篓用来收集未污染的废纸、用过的纸巾等。

c> 所有可能传染的物质必须高压或焚化。

d> 所有丢弃的标本、培养基和实验室废物必须放在专门容器里e> 用白色聚丙烯罐盛装2%新鲜配置次氯酸液，以临时放置工作中丢弃的标本、污染吸头和棉拭子，待一天工作结束之后，再经高压处理。

f> 黄色塑料袋用来处理污染的实验室废物。

它们应封口，再由工人拿去焚烧。

g> 带盖、带标签硬质容器用来盛装针头等锐器。

1.9 实验室传染性物的消毒高压a.所有培养基的传染性物质都要高压，除非准备焚烧的，高压的最大好处是使传染性物质离开实验室可保证安全。

b.用作此目的的高压设备应在医学技师监督下由实验室工人操作。

c.高压设备应定期由医院设备组测试、检修。

这些测试包括商业使有的芽胞试纸实验。

多个高压设备应有使用记录，并自使用之日起由医学技师连续记录。

任何不符都要向安全人员报告。

1.10 去污染去污染剂：1> 次氯酸溶液：用白色聚丙烯罐装新鲜配置的含有效氯1000ppm的2％次氯酸溶液，放在多个工作室。

2> 5%的Printol：其50％水溶液用来处理溅在地板和家具上的污染。

3> 戊二醛：新鲜配制成一定浓度，主要用于不能使用次氯酸钠的仪器去污染，如离心机等。

4> 75％乙醇：主要用于对清洁表面的快速去污染。

1.11 离心机1.11.1 注意事项：a> 使离心机用的试管应具是厚管或塑料的，离心前应仔细检查是否缺损。

b> 离心机需放置在合适的位置，操作都应能看见离心缸，以便能正确地将离心架放在转子上。

c> 离心桶和离心架配对使用，负载后需仔细平衡。

d> 为避免脱架和试管内溶液溅出，开始采用低转速，然后逐渐升高。

e> 离心机内缸应由高级人员定期检索，内壁必须用戊二醛定期清洁，去污染。

f> 在对含有或怀疑含有生物安全操作3级标本离心时，必须加盖密封，密封盖只有在一级生物安全操作台内才能打开。

1.11.2 离心时，试管破裂a> 如果正在离心时，发生或怀疑发生试管破裂，电动机应立即断电，并在30min 后才能打开离心机盖。

b> 如离心后发现破裂，应立刻关闭机盖，保持至少30min。

c> 立即通知安全员。

d> 戴厚手套，使用镊子或用镊子夹棉鉴清除破碎玻璃碎片。

e> 所有破裂试管，玻璃碎片，离心桶和转子必须放在专门消毒剂中去污染，要求消毒剂不具腐蚀性，对浸生物安全物质有效。

然后，或者浸泡至24小时，或者高压。

f> 未破裂，带盖的试管也应放在另一含有消毒剂的容器中1后，再对其内容物处理。

i> 离心缸必须用戊二醛棉拭子清洁，过夜，再重复擦拭，再用水清洁洗净并干燥。

g> 含有生物安全3级物质的密封离心桶必须在密封状态下取出，在一级生物安全操作台内打开。

如果试管破裂，离心桶密封盖应松松地盖上，对离心桶高压。

1.12 破裂和溢出任何重要的破裂的溢出都应通知安全人员。

在处理含有或怀疑含有生物案例的溢出物，应先得到安全人员的建议。

1.12.1 病毒培养基的泄漏a> 用浸有20％次氯酸钠的纸巾覆盖溅洒出的污染物用容器碎片。

b> 覆盖10－15min。

c> 戴一次性手套，清扫纸巾和碎片于合适的容器（如塑料袋，但不包括含有碎玻璃或其它锐利物体），用一片硬纸板去清扫，不能用刷子或尘掸，除非它们适于高压。

手指远离碎玻璃。

d> 将碎片和使用后的废物放在实验室废物箱。

e> 用常规工作消毒剂擦拭污染区及其周围可能飞溅区。

1.13 泄漏的标本实验室不泄漏的标本，但要以塑料密封后退还到病房。

1.14 紫外线消毒：培养基，试剂分装和病人血清应存放－70°C和－30°C冰箱。

操作存放于－30°C或以下温度冰箱物质，应戴手套，例如当标本从低温冰箱取出或放入时。

1.15 生物安全柜（台）实验室应配备II级生物安全柜。

1.15.1 级别I ：基本要求：定向流动保护，要求气流从外流入安全柜，并且远离操作者，指向传染物。

经HEPA过滤排后，紧好由导管引向室外，以便清除去污染后的各种蒸汽。

II：基本要求：经过滤气体垂直流向，既保护操作者也要保护工作不受污染。

IIA：70％的过滤气体重新循环至工作区，废气导向室外经HEPA过滤。

和内流经式工作区的气流速度平均0.4m/s或略高。

IIB：流进气体流速平均0.5m/s或更好。

按照不同型别（IIB1，IIB2，IIB3），气体排出比例从70％到100％。

根据工作选择不同型。