Infection of E.coli by Ff baceriophage
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主要衣壳蛋白pVIII
¾ 每个病毒子含约2700个拷贝，约10% 能有效地融合外源多肽或蛋白。 ¾ 以pIII融合子方式表达的多肽是低 价的，而以pVIII融合子方式表达的 多肽则是高价的（每个病毒子~200 个拷贝）。 ¾ 这种高价pVIII展示所增加的亲和力 有利于筛选到亲和力非常低的配体， 而低价pIII展示则将筛选限制在具 有个拷贝的外源多 肽）。
Schematic representation of M13 Phage Schematic representation of T7 Phage
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M13噬菌体的组成和结构
Structure of M13 filamentous phage
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噬菌体展示系统 Phage on display
• 噬菌体展示原理 – 噬菌体展示定义、分类 – 简介噬菌体及淘选过程 噬菌体展示应用 商业化噬菌体展示系统
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什么是噬菌体展示
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噬菌体展示技术
Smith在1985年首次证实外源DNA可以插入丝状噬 菌体基因III中，并与pIII蛋白融合展示。
Smith GP. Science 1985; 228:1315-7
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是一项筛选技术，将外源多肽或蛋白与噬菌体的衣壳蛋白融合表 外源多肽或蛋白 达，融合蛋白展示在病毒颗粒的表面，而编码该融合子的DNA则位于 DNA 病毒粒子内。 使大量多肽与其DNA编码序列之间建立了直接联系，使各种靶分 子（抗体、酶、细胞表面受体等）的多肽配体通过淘选得以快速鉴定。
表型——基因型 展示肽——编码基因
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噬菌体展示系统 Phage on display
Of Needles and Haystacks
Exponential growth in publications referring to phage display. The number of Medline citations containing the terms ‘phage’ and ‘display’ are plotted against the year of publication. TIBTECH NOVEMBER 1999 (VOL 17).
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Types of phage display system
pVIII 展示的多肽比较小，如 果太大会影响噬菌体壳蛋白的 组装。 pIII只要不影响感染，可以展 示300 aa的多肽。 噬菌质粒能展示的蛋白已经达 到86 kDa。
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NEB 完美品质 成就科学梦想
报告人：杨毅 MD PhD
Email: support@
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展示系统 Display System
Phage Display Cell Based Cell Surface Display
Cell Free
Ribosome Display mRNA Display
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噬菌体展示系统的分类
Classification of phage display systems
根据噬菌体不同 根据噬菌hage M13, f1, fd T7, T4, lamda
Vector Vector True Phage Phagemid
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次要衣壳蛋白pIII
BRIEFINGS IN FUNCTIONAL GENOMICS AND PROTEOMICS. VOL 1. NO 2. 189–203. JULY 2002
¾406 aa 组成，5个拷贝，位于噬菌体的尾部。 ¾由三个功能区组成： ¾N1 穿膜区：作用于E.coli细胞膜上的TolA蛋白； 穿膜区： 与噬菌体的入侵有关。 ¾N2 受体结合区：负责结合F菌毛。 区： ¾CT 疏水区：组装前黏附在细菌内膜上；与噬菌 疏水区： 体组装终止有关。 ¾G1、G2: 甘氨酸片段，在感染过程中，增加各个 功能域之间的灵活性。nology
Life Cycle of M13
¾pIII蛋白结合于 E.Coli 的F 纤毛; ¾细菌的Tol蛋白复合体解聚噬 菌体的衣壳蛋白，转运至胞浆 （再用）; ¾病毒ssDNA进入细菌的胞浆合 成dsDNA； ¾以dsDNA为模版合成所有的病 毒蛋白，且通过滚环复制合成 组装病毒所需的ssDNA。 ¾第一代噬菌体在感染10分钟后出现在培养液中（37oC）。 ¾感染后1小时内平均每个细胞分泌1000个噬菌体。
¾丝状噬菌体：M13、f1和fd 。 ¾单链DNA病毒,6407 bp。 ¾基因组编码11种蛋白质，其中5 种为结构蛋白质。 ¾与展示密切相关的有两种结构蛋 白质。 ¾DNA在细菌内滚环复制，细菌不 被裂解，但生长速度减慢，并且 分泌大量噬菌体颗粒。
Schematic representation of M13 Phage