海水中磷酸盐的测定
一、实验目的
掌握抗坏血酸还原磷钼蓝法测定海水中活性磷酸盐的基本原理，熟悉样品的采集和保存，测定的操作过程和注意事项，如试剂的配制，分光光度计或营养盐自动分析仪的使用等。

二、方法原理
在酸性介质中，活性磷酸盐与钼酸铵反应生成磷钼黄络合物，在酒石酸锑钾存在下，磷钼黄络合物被抗坏血酸还原为磷钼蓝络合物，于882nm波长处进行分光光度测定。

三、试剂及其配制
1. 磷酸盐标准液
（1）磷酸盐标准贮备溶液：c（PO43--P）=10000 μmol/L
称取1.3609g磷酸二氢钾（KH2PO4，优级纯，在100-115℃烘2h，置于干燥器中冷却至室温），用少量水溶解后，全量转移至1000ml容量瓶中，用水稀释至标线，混匀。

低温冷藏，有效期六个月。

（2）磷酸盐标准使用溶液：c（PO43--P）=100 μmol/L
移取1ml磷酸标准贮备溶液于100ml容量瓶中，用水稀释至标线，混匀，贮存于棕色玻璃瓶中，有效期1天。

2. 硫酸溶液：体积分数为17%
在水浴冷却和不断搅拌下，将60ml硫酸（H2SO4, ρ=1.84g/ml）缓慢加入300ml 水中，贮存于玻璃中
3. 钼酸铵溶液：ρ=30.0g/L
称取15.0g钼酸铵[(NH4)6Mo7O24·4H2O]溶于水中并稀释至500ml，贮于聚乙烯瓶中，避光保存。

4. 抗坏血酸溶液：ρ=54.0g/L
称取5.40g抗坏血酸（C6H8O6）溶于水中并稀释至100ml。

此液贮于聚乙烯瓶中，避免阳光直射。

有效期为一星期，在5-6℃下低温保存，可稳定一个月。

5. 酒石酸锑钾溶液：ρ=1.4g/L
称取1.4g酒石酸锑钾（KSbO·C4H4O6·1/2H2O）溶于水中并稀释至1000ml，贮于聚乙烯瓶中，有效期为六个月。

6. 硫酸-钼酸铵-酒石锑钾混合溶液
依次量取100ml硫酸溶液，40ml钼酸铵溶液，20ml酒石酸锑钾溶液，混合
均匀。

临用时配制。

四、仪器及设备
分光光度计；100mL容量瓶（8*1=8个）；50mL容量瓶（8*6=48个），25 mL 比色管（8*14=112个）；500-1000mL棕色试剂瓶若干；移液器；玻璃棒；实验室常备仪器及设备。

五、分析步骤
1. 绘制工作曲线
（1）在6个100ml容量瓶中，分别移入磷酸盐标准使用溶液0ml, 1ml, 2ml, 3ml, 4ml, 5ml，用超纯水稀释至标线，混匀。

此标准溶液系列磷酸盐浓度依次为0μmol/L, 1μmol/L, 2μmol/L, 3μmol/L, 4μmol/L, 5μmol/L。

（2）取六个25ml比色管，分别依次移入10ml上述标准系列溶液，各加入0.8ml硫酸-钼酸铵-酒石酸锑钾混合溶液和0.2ml抗坏血酸溶液，混匀。

（3）显色10min后，在分光光度计上，用1 cm比色池，以超纯水作参照液，于882nm波长处测量吸光值An，其中空白吸光值为Ab。

（4）将测定数据记录于标准曲线数据表（参见表1）中。

以扣除空白吸光值Ab后的吸光值An为纵坐标，标准溶液系列磷酸盐浓度Cn为横坐标，绘制标准工作曲线，并用线性回归法求出该工作曲线的截距a和斜率b。

表1 活性磷酸盐标准曲线测定记录表
绘制者：校对者：
2. 水样测定
（1）量取10.0 mL水样于25ml比色管中，各加入0.8ml硫酸-钼酸铵-酒石酸锑钾混合溶液和0.2ml抗坏血酸溶液，混匀。

（2）显色10min后，在分光光度计上，用1 cm比色池，以超纯水作参照液，于882nm波长处测量吸光值Aw，其中空白吸光值为Ab。

（3）水样中的磷酸盐浓度按下式计算：
C(PO43--P)=
b a
A A
b -
-)
(w
式中，c(PO43--P)，水样中磷酸盐的浓度，μmol/L；A w，水样中磷酸盐的吸光值；Ab，空白吸光值；a，b分别为标准曲线中的截距和斜率。

表2 活性磷酸盐测定记录表。