四、实验步骤
（1）点样：取一块硅胶板（10 × 20 cm），用定量毛细管
吸取甲基红、甲基橙、甲基黄及试样各 1 µ L，分别点在
硅胶板上，点样间距为 1 ~ 1.5 cm。 （2）展开：将点好的薄层板放置在密闭的展开槽中，用展 开剂进行展开（一般需 30 min左右），斑点间隔 2 cm左 右即可。然后取出薄层板将展开剂挥发至干。
三、仪器与试剂
• 仪器：
• 岛津 CS-930 型薄层色谱扫描仪具有多功能、自动化程度较 高的特点，它包括主机及 DR-2 数据处理机两部分。CS-930 型薄层色谱扫描仪与常见光密度法仪器不同之处在于它具有 双波长、锯齿扫描、校正曲线线性化器和背景校正的功能。 • （1）双波长法：试样斑点最大吸收波长定为样品波长λ1 ， 试样斑点不吸收的波长定为参考波长λ2 。选用双波长法可以 提高灵敏度、平滑基线和增强校正曲线的线性。 • （2）锯齿扫描法：用以消除因斑点形状不规则、大小不等 以及浓度分布不均匀带来的测量误差。 • （3）校正曲线线性化：校正曲线线性化器校正光束被薄层 板上的吸附剂所分散，致使测定的吸光度不与物质含量成正 比偏离线性的影响。 • （4）背景补偿：补偿背景吸收光的影响。
到薄层斑点上，对整个斑点进行扫描，用仪器测量通过斑
点或被斑点反射的光束强度的变化达到定量分析的目的。 • 本实验根据试样中甲基红、甲基橙、甲基黄有不同的 极性，在硅胶板上用混合展开剂展开，可将它们分开。然 后采用岛津 CS-930 型双波长薄层色谱扫描仪，可直接在 薄层板上对甲基红斑点进行定量分析。
（3）测量：
A. 将薄层板固定于平台，接通电源开启主机，主机系
统自检后进入 CSLeabharlann 930 型薄层色谱扫描仪分析系统。
B. 对欲测斑点进行原位光谱扫描，根据斑点的吸收光谱选择 最大吸收峰波长作为λ1；选择斑点吸收光谱的基线部分，
既该化合物无吸收处的波长为样品的参考波长λ2。
C. 选择测试分析参数。 D. 确定光斑起始位置，进行色谱扫描。 E. 对色谱峰进行查找编辑。 F. 做工作曲线。 G. 执行定量，测得试样中甲基红的含量。 H. 确定要输出的内容与格式，打印分析实验报告。
五、思考题
• 1. 解释甲基红、甲基橙及甲基黄在硅胶板上以正丁
醇、无水乙醇和环己烷混合物为展开剂时，各组份
的位置，并说明各Rf 值不同的原因。 • 2. 本实验的误差来源主要在哪里？实验过程应注意 哪些？
双波长薄层色谱扫描法测 定甲基红含量
一、实验目的
学习利用岛津 CS-930 型薄层色谱扫描仪测定 甲基红含量的原理与方法，初步了解 CS-930 型 薄层色谱扫描仪的结构与使用。
二、实验原理
• 用于定量的薄层色谱仪称为薄层色谱扫描仪或薄层
色谱光密度计，用此种仪器对薄层上被分离的物质进行直
接定量分析的方法称为薄层色谱扫描法。其分析的基本原 理是用一束长宽可以调节的一定波长、一定强度的光照射
• 试剂：
• 甲基红 分析纯 0.1%（60% 乙醇溶液）
• 甲基橙 • 甲基黄 • 试 样 指示剂规格 0.06%（水溶液） 指示剂规格 0.06%（95% 乙醇溶液） 内含甲基红0.1%，甲基橙 0.06% 和甲基黄0.06%
• 无水乙醇 分析纯 • 展开剂 无水正丁醇﹕无水乙醇﹕无水环己烷 = 3﹕1﹕4