2、确定目的基因的碱基序列后，怎样才能合 成或改造目的基因（DNA）？
可以通过人工合成的方法获取或基因的定点诱变技 术来改变。
基因会发生突变，突变可以自发，也可以诱发，这是每个稍 有生物学知识的人都知道的常识。但在加拿大生物化学家 M·史密斯（1932－2000）发明定点突变法之前，突变株的 产生必须经由自然界或用化学等方法诱使基因体突变。这类 方法属于随机突变，突变株必须在生物性状上有所改变，才 能确定有突变发生，但除非用分子生物方法或遗传方法找到 此突变处，否则无法确定突变位置。也就是说，这种突变是 盲目的。而史密斯发明的定点突变法却是有目的的，该法可 经由设计好的寡核苷酸，在任何一个基因片段上进行随意或 设计好的突变，也就是说，这种突变是预先设定好的，所以 也有人将该法称为“反遗传法”。
癌症的基因治疗分二个方面：药物作用于癌细胞， 特异性地抑制或杀死癌细胞；药物保护正常细胞免受化 学药物的侵害，可以提高化学治疗的剂量。疱疹病毒 （HSV）胸腺嘧啶激酶（TK）可以催化胸腺嘧啶和其它 结构类似物磷酸化而使这些碱基3’-OH缺乏,从而阻断 DNA的合成，杀死癌细胞。HSV—TK催化能力可以通过 基因突变来提高。从大量的随机突变中进行筛选出一种 酶,在酶活性部位附近有6个氨基酸被替换，催化能力20 倍以上。
3．胰岛素改造
天然胰岛素制剂在储存中易形成二聚体和六聚体， 延缓胰岛素从注射部位进入血液，从而延缓了其降血 糖作用，也增加了抗原性，这是胰岛素B23-B28氨基 酸残基结构所致。利用蛋白质工程技术改变这些残基， 则可降低其聚合作用，使胰岛素快速起作用。该速效 胰岛素已通过临床实验。
4．治癌酶的改造
• 干扰素是由效应T细胞产生的糖蛋白，可阻 断细胞分裂间期，抑制DNA复制，从而可用 于治疗疾病。但干扰素在体外很难保存。
• 玉米中赖氨酸的含量比较低
• 在已研究过的几千种酶中，只有极少数可以应用 于工业生产，绝大多数酶都不能应用于工业生产， 这些酶虽然在自然状态下有活性，但在工业生产 中没有活性或活性很低。这是因为工业生产中每 一步的反应体系中常常会有酸、碱或有机溶剂存 在，反应温度较高，在这种条件下，大多数酶会 很快变性失活。提高蛋白质的稳定性是工业生产 中一个非常重要的课题。一般来说，提高蛋白质 的稳定性包括：延长酶的半衰期，提高酶的热稳 定性，延长药用蛋白的保存期，抵御由于重要氨 基酸氧化引起的活性丧失等。
• 植物方面
– 提高植物的抗虫、抗病、抗逆性 – 改良植物的品质
Hale Waihona Puke • 动物方面– 提高动物生长速度 – 改善畜产品的品质 – 用转基因动物生产药物 – 用转基因动物作器官移植的供体
• 研制药物 • 基因治疗
科学家面临新的问题
• 在已研究过的几千种酶中，只有极少数可 以应用于工业生产，绝大多数酶都不能应 用于工业生产，这些酶虽然在自然状态下 有活性，但在工业生产中没有活性或活性 很低。
• 干扰素是一种抗病毒、抗肿瘤的药物。将人的干 扰素的cDNA在大肠杆菌中进行表达，产生的干 扰素的抗病毒活性为106 U/mg，只相当于天然 产品的十分之一，虽然在大肠杆菌中合成的β-干 扰素量很多，但多数是以无活性的二聚体形式存 在。为什么会这样？如何改变这种状况？研究发 现，β-干扰素蛋白质中有3个半胱氨酸（第17位、 31位和141位），推测可能是有一个或几个半胱 氨酸形成了不正确的二硫键。研究人员将第17位 的半胱氨酸，通过基因定点突变改变成丝氨酸， 结果使大肠杆菌中生产的β-干扰素的抗病性活性 提高到108 U/mg，并且比天然β-干扰素的贮存 稳定性高很多。
蛋白质工程除了用于改造天然蛋白质或设计制造新的 蛋白质外，其本身还是研究蛋白质结构功能的一种强有 力的工具，它在解决生物理论方面所起的作用，可以和 任何重大的生物研究方法相提并论。
蛋白质工程的进展与前景
• 蛋白质工程目前的现状：成功的例子不多， 主要是因为蛋白质发挥其功能需要依赖于 正确的空间结构，而科学家目前对大多数 蛋白质的空间结构了解很少。
漂白粉的主要成分为：CaCl2和Ca(ClO)2 有效成分为：Ca(ClO)2
聚氯乙烯塑料
农药
盐酸——
氯化氢的水溶液
自来水厂加氯 消毒监测系统
小结
• 一、氯气和水反应 • 1.反应原理 • 2.新制氯水和久置氯水的主要成分及性质 • 二、氯气和碱反应 • 1.氯气和氢氧化钠的反应 • 2.漂白粉的制备和应用 • 三、氯气在生产、生活中的应用
讨论： 1、怎样得出决定这一段肽链的脱氧核苷酸序列？
请把相应的碱基序列写出来。
每种氨基酸都有对应的三联密码子,只要查一下遗传 密码子表,就可以将上述氨基酸序列的编码序列查出 来。但是由于上述氨基酸序列中有几个氨基酸是由 多个三联密码子编码,因此其碱基排列组合起来就比 较复杂,至少可以排列出16种。同学们可以根据学过 的排列组合知识自己排列一下。首先应该根据三联 密码子推出mRNA序列为GCU（或C或A或G） UGGAAA（或G）AUGUUU（或C），再根据碱基 互补配对规律推出脱氧核苷酸序列：CGA（或G或T 或C）ACCTTT（或C）TACAAA（或G）。
地了解蛋白质的二维重组和三维晶体结构;
（4）设计各种处理条件，了解蛋白质的结构变化，包 括折叠与去折叠等对其活性与功能的影响；
（5）设计编码该蛋白的基因改造方案，如定点突变；
（6）分离、纯化新蛋白，功能检测后投入实际使用。
（二）蛋白质改造工程举例
1．水蛭素改造
水蛭素是水蛭唾液腺分泌的凝血酶特异抑制剂，它有 多种变异体，由65或66个氨基酸残基组成。水蛭素在 临床上可作为抗栓药物用于治疗血栓疾病。为提高水蛭 素活性，在综合各变异体结构特点的基础上提出改造水 蛭素主要变异体HV2的设计方案，将47位的Asn（天冬 酰胺）变成Lys（赖氨酸），使其与分子内第4或第5位 Thr（苏氨酸）间形成氢键来帮助水蛭素N端肽段的正 确取向，从而提高凝血效率，试管试验活性提高4倍， 在动物模型上检验抗血栓形成的效果，提高20倍。
活动3 比较基因工程和蛋白质工程
基因工程
蛋白质工程
相同点 都要改造基因，都属于分子水平
产生新的 基因型，无新基因 基因（型）
产生的蛋白质
原有的
新的
联系
蛋白质工程以基因工程为基础， 是基因工程的应用和延伸
2．生长激素改造
生长激素通过对它特异受体的作用促进细胞和机体 的生长发育，然而它不仅可以结合生长激素受体，还 可以结合许多种不同类型细胞的催乳激素受体，引发 其他生理过程。在治疗过程中为减少副作用，需使人 的重组生长激素只与生长激素受体结合，尽可能减少 与其他激素受体的结合。经研究发现，二者受体结合 区有一部分重叠，但并不完全相同，有可能通过改造 加以区别。由于人的生长激素和催乳激素受体结合需 要锌离子参与作用，而它与生长激素受体结合则无需 锌离子参与，于是考虑取代充当锌离子配基的氨基酸 侧链，如第18和第21位His（组氨酸）和第17位Glu （谷氨酸）。实验结果与预先设想一致，但要开发作 为临床用药还有大量的工作要做。
例如：
干扰素（半胱氨酸）
体外很难保存
改造
干扰素（丝氨酸）
体外可以保存半年
玉米中赖氨酸含量比较低
天冬氨酸激酶
改造
（352位的苏氨酸）
玉米中赖氨酸含量可提高数倍 天冬氨酸激酶（异亮氨酸）
二氢吡啶二羧酸合成酶 改造 （104位的天冬酰胺）
二氢吡啶二羧酸合成酶 （异亮氨酸）
蛋白质工程的概念
• 蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律 及其与生物功能的关系作为基础，通过基 因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行改 造或制造一种新的蛋白质，以满足人类对 生产和生活的需求。
氯气的性质
复习旧知：
• 铁在氯气中点燃：
• 氢气在氯气中点燃：
活动与探究
实验1 实验2 实验3
实验现象
结论（或化学方程 式）
干燥的有色布条不褪色， 干燥的氯气不能漂白， 而湿润的有色布条褪色 湿润的氯气能漂白。
新制的氯水使PH试纸先变红 后褪色，而稀盐酸使PH试纸 变红。
新制氯水有酸性（H+） 和漂白性。
有白色沉淀产生
有氯离子存在。
快动手
请写出氯气和水的反应方程式：
Cl2＋H2O
HCl+HClO
HClO 次氯酸
1.弱酸，次氯酸是一元弱酸，酸性弱于碳酸 2.不稳定，易分解，光照时分解速率加快
光照
2HClO===2HCl+O2
3.具有强氧化性，能杀死病菌，具有漂白性
总结 新制氯水成分
分子：H2O Cl2 HClO
你掌握了吗？
1.氯水可用来消毒、杀菌，又可作为漂白剂，
其中起主要作用的是（ ）B
A.Cl2 B.HClO C.HCl D.H2O
2.下列关于氯水的说法正确的是（ BD）
A.新制的氯水只含有氯气分子和水分子 B.新制氯水使紫色石蕊试液先变红后褪色 C.光照氯水有气泡逸出，该气体主要是氯气 D.氯水久置后，几乎无漂白性
漂白粉
漂粉精
4.与碱反应 Cl2+2NaOH==NaCl+NaClO+H2O （用于实验中尾气的吸收）
2Cl2+2Ca(OH)2==CaCl2+Ca(ClO)2+2H2O （工业上制取漂白粉）
漂白粉的漂白原理： Ca(ClO)2+H2O+CO2==CaCO3+2HClO 长期将漂白粉置于空气中会失效
有意思的是这一给生命科学研究及应用领域带来革命性 突破的方法竟然是史密斯和其同事在喝咖啡时闲聊出来的。 现在，几乎每个生物实验室都会用定点突变法来研究基因或 蛋白质的功能。
➢ 蛋白质工程的主要步骤通常包括： （1）从生物体中分离纯化目的蛋白； （2）测定其氨基酸序列； （3）借助核磁共振和X射线晶体衍射等手段，尽可能