索氏抽提法测粗脂肪
作者XX
2、脂类组成及分类
食品中脂肪的存在形式有游离态的，如动物性脂肪和植物性油脂；也有结合态的，如天然存在的磷脂、糖脂、脂蛋白及其某些加工食品（如焙烤食品、麦乳精等）中的脂肪与蛋白质或碳水化合物等形成结合态。
脂类是脂肪酸和醇所组成的酯类及其衍生物。
他包括脂肪、蜡、磷脂、糖脂、类固醇等，其元素组成主要是碳、氢、氧，有的还有氮、磷、硫。
按脂类的化学组成，可将其分成三类。
（1）单脂类
单脂类大由脂肪酸与醇类所形成的脂。
脂肪酸与甘油所形成的酯称为脂肪，脂肪酸与高级一元醇形成的酯称为蜡。
（2）复合脂类
复合脂类是有脂肪酸、醇和其他基团组成的酯。
重要的复合脂类有磷脂、糖脂、硫脂和蛋白脂等。
（3）脂肪伴随物
指能溶于油脂的非酯物质，因常与油脂伴随在一起而得名。
比较重要的有脂肪酸、高级醇类、色素和脂溶性维生素等。
二、脂类的提取及样品预处理
脂类不溶于水，但能溶于有机溶剂，脂类的测定大多是利用脂类的这一化学性质进行的。
由于脂类包括单脂类、复合脂类和脂肪伴随物，其化学性质及在各种食品中的存在状态不同。
因此，对于不同种类、性状的食品所选用的有机溶剂也不同。
对于结合态脂类或由于被食品中其他组分所包裹不易被有机溶剂直接提取的脂类，需要在提取前经过一定的预处理，破坏结合态或分解包裹组分，使脂类游离出来。
提取脂类常用的有机溶剂有乙醚、石油醚、氯仿-甲醇等。
1、提取剂的选择
（1）乙醚对脂肪的溶解能力强，是脂肪测定的最常用的试剂。
但乙醚中约含2%的水分，含水乙醚回同时食品中的非脂类物质（如糖类等）提取出来，使结果偏高，所以测定时应使用有、无水乙醚，待测样品应预先干燥。
乙醚只适于游离态脂肪的提取，对于复合脂类的提取效果不是很好，对于结合态脂肪则需要先将结合态破坏，游离出脂肪，再用乙醚提取。
（2）石油醚提取脂肪的能力低于乙醚。
用石油醚作提取剂时，允许样品中含有微量水分，它没有胶溶现象，不会夹带胶态的淀粉、蛋白质等物质。
石油醚也只适于游离态脂肪的提取。
（3）氯仿-甲醇是提取磷脂、蛋白脂、脂蛋白的有效溶剂，适用范围很广，特别适用于鱼、肉、家禽、蛋等食品中脂类的测定。
2、样品的预处理
（1）乙醚提取脂肪时，样品应预先干燥。
乙醚渗入细胞中的速度与样品的含水量有关，样品很潮湿时，乙醚不能渗入组织内部，而且样品被水分饱和后，提取脂肪的效率降低。
（2）对于面粉及其焙烤制品，如点心、鸡蛋面等，由于脂类被淀粉包裹，乙醚不能充分渗入样品内部，或由于脂肪与蛋白质、糖类形成结合脂，不能用非极性溶剂直接提取。
因此，需将包裹的糖类水解，或将结合脂破坏
（3）牛乳中的脂肪并不呈溶解状态。
而是以脂肪球呈乳浊液状态存在，它周围有一层膜，
使脂肪球得以在乳中保持乳浊液的稳定状态。
用浓硫酸可破坏脂肪球膜，使脂肪游离出来。
乳的胶体性状及脂肪球膜还可利用氨-乙醇溶液将非脂成分溶于氨-乙醇溶液中，使脂肪游离出来。
一、目的
脂肪广泛存在于许多植物的种子和果实中，测定脂肪的含量，可以作为鉴别其品质优劣的一个指标。
脂肪含量的测定有很多方法，如抽提法、酸水解法、比重法、折射法、电测和核磁共振法等。
目前国内外普遍采用抽提法，其中索氏抽提法（Soxhlet extractor method）是公认的经典方法，也是我国粮油分折首选的标准方法。
通过本实验的学习,掌握索氏抽提法测定粗脂肪含量的原理和操作方法。
二、原理
本实验采用索氏抽提法中的残余法，即用低沸点有机溶剂（乙醚或石油醚）回流抽提，除去样品中的粗脂肪，以样品与残渣重量之差，计算粗脂肪含量。
由于有机溶剂的抽提物中除脂肪外，还或多或少含有游离脂肪酸、甾醇、磷脂、蜡及色素等类脂物质，因而抽提法测定的结果只能是粗脂肪。
三、实验材料、主要仪器和试剂
1．实验材料
油料作物种子、中速滤纸
2．仪器：
（1）索氏脂肪抽提器（图）冷凝管
(2）干燥器(直径15～18cm，盛变色硅胶)
（3）不锈钢镊子（长20cm）滤纸筒抽提管
（4）培养皿
（5）分析天平（感量0.001g）虹桥管
（6）称量瓶
（7）恒温水浴
（8）烘箱接收瓶（9）样品筛（60目）
3．试剂
无水乙醚或低沸点石油醚（A.R.）索氏抽提器
四、操作步骤
1．将滤纸切成8cm×8cm，叠成一边不封口的纸包，用硬铅笔编写顺序号，按顺序排列在培养皿中。
将盛有滤纸包的培养皿移入105±2℃烘箱中干燥2h，取出放入干燥器中，冷却至室温。
按顺序将各滤纸包放人同一称量瓶中称重（记作a）、称量时室内相对湿度必须低于70％。
2．包装和干燥
在上述已称重的滤纸包中装入3g左右研细的样品，封好包口，放入105±2℃的烘箱中干燥3h，移至干燥器中冷却至室温。
按顺序号依次放入称量瓶中称重（记作b）。
3．抽提
将装有样品的滤纸包用长镊子放入抽提筒中，注入一次虹吸量的1.67倍的无水乙醚，使样品包完全浸没在乙醚中。
连接好抽提器各部分，接通冷凝水水流，在恒温水浴中进行抽提，调节水温在70～80℃之间，使冷凝下滴的乙醚成连珠状（120～150滴/min或回流7次/h以上），抽提至抽取筒内的乙醚用滤纸点滴检查无油迹为止（约需6～12h）。
抽提完毕后，用长镊子取出滤纸包，在通风处使乙醚挥发（抽提室温以12～25℃为宜）。
提取瓶中的乙醚另行回收。
4．称重
待乙醚挥发之后，将滤纸包置于105±2℃烘箱中干燥2h，放入干燥器冷却至恒重为止（记作c）。
五、结果与计算
粗脂肪含量（%）=( b－c)/(b－a)×1
式中：a：称量瓶加滤纸包重（g）
b：称量瓶加滤纸包和烘干样重（g）
c：称量瓶加滤纸包和抽提后烘干残渣重（g）
六、附注
（1）测定用样品、抽提器、抽提用有机溶剂都需要进行脱水处理。
这是因为：第一，抽提体系中有水，会使样品中的水溶性物质溶出，导致测定结果偏高；第二，抽提体系中有水，则抽提溶剂易被水饱和（尤其是乙醚，可饱和约2％的水），从而影响抽提效率；第三，样品中有水，抽提溶剂不易渗入细胞组织内部，结果不易将脂肪抽提干净。
（2）试样粗细度要适宜。
试样粉末过粗，脂肪不易抽提干净；试样粉末过细，则有可能透过滤纸孔隙随回流溶剂流失，影响测定结果。
（3）索氏抽提法测定脂肪最大的不足是耗时过长，如能将样品先回流1～2次，然后浸泡在溶剂中过夜，次日再继续抽提，则可明显缩短抽提时间。
（4）YG-Ⅱ型油分测定器容量大，适合于样品较多的选种鉴定工作使用，温度控制在70℃左右，8h可提取完毕。
（5）必须十分注意乙醚的安全使用。
抽提室内严禁有明火存在或用明火加热。
乙醚中不得含有过氧化物，保持抽提室内良好通风，以防燃爆。
乙醚中过氧化物的检查方法是：取适量乙醚，加入碘化钾溶液，用力摇动，放置1min，若出现黄色则表明存在过氧化物，应进行处理后方可使用。
处理的方法是：将乙醚放入分液漏斗，先以1/5乙醚量的稀KOH溶液洗涤2～3次，以除去乙醇；然后用盐酸酸化，加入1/5乙醚量的FeSO4或Na2SO3溶液，振
摇，静置，分层后弃去下层水溶液，以除去过氧化物；最后用水洗至中性，用无水CaCl2或无水Na2SO4脱水，并进行重蒸馏。
七、思考题
1．如何利用残余法测定油料作物种子中的粗脂肪含量？
残余法测定油料作物种子中的粗脂肪含量，是用低沸点有机溶剂（乙醚或石油醚）回流抽提，除去样品中的粗脂肪，以样品与残渣重量之差，来计算粗脂肪含量。
2．测定过程中为什么需要对样品、抽提器、抽提用有机溶剂都要进行脱水处理？
进行脱水处理的原因有三：第一，抽提体系中有水，会使样品中的水溶性物质溶出，导致测定结果偏高；第二，抽提体系中有水，则抽提溶剂易被水饱和（尤其是乙醚，可饱和约2％的水），从而影响抽提效率；第三，样品中有水，抽提溶剂不易渗入细胞组织内部，结果不易将脂肪抽提干净。
3．在实验过程中安全使用乙醚应注意哪些问题？
抽提室内严禁有明火存在或用明火加热。
乙醚中不得含有过氧化物，保持抽提室内良好通风，以防燃爆。
4．测定样品粒子粗细有什么要求？
试样粗细度要适宜。
试样粉末过粗，脂肪不易抽提干净；试样粉末过细，则有可能透过滤纸孔隙随回流溶剂流失，影响测定结果。