两种不同检测方法测定血清钙离子的比较【摘要】为了比较在宁夏彭阳县人民医院检验科实验室两种血清钙离子检测方法的分析性能，分别采用恒星科技公司HX-7185K/NA/CL/GA/PH Analyzer分析仪的离子选择电极法(简称恒星)和上海爱诺电子有限公司MOL—300全自动生化分析仪及配套出品的甲基麝香草酚蓝比色法试剂盒(简称爱诺)进行测定，比较指标为不精密度、线性范围、抗干扰性、相关及偏倚。
结果，血清钙离子浓度在0～3.95mmol/L时，两家分析仪在本实验室总的变异系数(CV)＜5%，检测线性范围为0～4.0mmol/L。
血红蛋白＜10g/L、胆红素＜300mg/L、维生素C＜5 g/L，对两分析方法检测干扰＜10%，在可接受范围内。
甘油三酯(TG)＜20 mmol/L时恒星不受影响(干扰＜10%)。
爱诺TG＞15mmol/L时低值血清干扰＞10%，高值血清不受干扰。
50份血样进行相关分析的结果显示恒星和爱诺测定血清钙离子的相关性良好(r=0.98，P＜0.01)。
恒星较爱诺测定血清钙离子结果偏低，平均偏倚为0.19，线性回归分析Cusum检验显示两种方法间偏移无统计学意义(P＞0.05)。
实验室温度变化±5℃恒星测定血清钙离子结果不受影响而爱诺受温度影响较大，对同一份样本用恒星与爱诺测定血清钙离子的最小至最大偏差范围为1.3%～20%，平均为4.1%。
本实验室两种不同检测方法测定血清钙离子的精密度、线性范围、抗干扰性符合要求。
【关键词】血清钙离子；离子选择电极法；比色法
宁夏彭阳县人民医院检验科实验室原有一台恒星科技公司HX-7185K/NA/CL/GA/PH Analyzer分析仪，现又购买一台上海爱诺电
子有限公司MOL—300全自动生化分析仪，这两种仪器均能检测血清钙，现将仪器及方法进行比较。
1 对象与方法
1．1 对象
选择50份不同浓度水平的血清(其中包括高、中、低水平定值质控各两套)标本用于相关性及偏倚分析，并收集高、中、低三个水平的血清钙混合，以1mL分装后-20℃储存，用于不精密度测定。
1.2 仪器与试剂
恒星科技公司HX-7185K/NA/CL/GA/PH Analyzer分析仪(定期自动定标)和上海爱诺电子有限公司MOL—300全自动生化分析仪及配套出品的甲基麝香草酚蓝比色法试剂盒(更换试剂批号时定标)，用于离子选择电极法配套校准品批号035911，035912，035913；用于MOL—300全自动生化分析仪及配套出品的甲基麝香草酚蓝比色法试剂盒的配套校准品，来源不详，浓度为0、0.79、1.78、2.37、3.16、3.95 mmol/L。
干扰物质为血红蛋白10g/L、胆红素300mg/L、维生素C 5g/L、甘油三酯(TG)20 mmol/L。
1.3 测定原理
1.3.1 离子选择电极法
离子选择电极是一种化学传感器，它能将溶液中的某种离子的活度变成电位信号，然后通过仪器来测量。
电极电位随溶液中离子活度变化的关系服从Nernst方程，选择电极的电位与溶液中被测离子活度的对数成线性关系。
离子选择电极仪通常采用比较法来测定样本
中的离子钙和pH值，即先测量两个已知浓度标准液中的离子钙和pH 的电极电位，在仪器程序内建立一条斜率曲线，然后测量样本中的离子钙和pH的电极电位，从建立的斜率曲线上求出样本中的离子钙和pH，并计算出标准化离子钙浓度。
1.3.2 甲基麝香草酚蓝比色法
血清钙离子在碱性溶液中与甲基麝香草酚蓝结合，生成蓝色的络合物。
加入适当的8-羟基喹啉，可消除镁离子对测定的干扰，与同样处理的钙标准液进行比较，以求得血清总钙的含量。
1.4 方法学评价
参考美国临床和实验室标准协会(clinical and laboratory standards institute，CLSI)评价方案对试剂、仪器的不精密度、线性、抗干扰性、相关性及偏倚进行评价。
1.4.1 不精密度
参考EP5—A文件［1］，采用两种方法对高、中、低三份混合血清，连续测定10d，每天测定两批，批间间隔的时间不小于2h，每批对样品做双份测定，取均值，计算批内、批间、天间及总不精密度。
1.4.2 线性实验
取病人的异常高值血清1份［作为浓度CA1］和正常人血清一份［作为浓度CA5］，取等体积的CA1和CA5干扰混合构成浓度3(CA3)，取等体积的CA1和CA3混合构成浓度2(CA2)，取等体积的CA3和CA5混合构成浓度4(CA4)。
5份标本随即排列测定，对每个样本做双测定。
1.4.3 干扰实验
在正常人血清中各加一定量的血红蛋白10g/L、胆红素300mg/L、维生素C 5g/L、TG 20 mmol/L，干扰物与混合血清按1∶9的比例混合。
血红蛋白干扰浓度为：1、2、4、8、10 g/L；胆红素干扰浓度为：50、100、200、300 mg/L；维生素C干扰浓度为：1、2、3、4、5 g/L；TG干扰浓度为：5、10、15、20 mmol/L，取等体积的生理盐水作为无干扰血清，同时测定这些标本的浓度，每个浓度做双测定，结果取均值，以干扰程度为10%作为该系统对干扰的最高限［1］。
1.4.4 相关性及偏倚分析
从正常和钙离子减低的人群中随机取50份样本，经过2500r/min 15 min离心分离后-20℃储存测定。
样本经恒星及爱诺测定结果进行Passing Bablok回归和Bland-Altman方法学比较。
1.5 温度干扰实验
同一份样本两方法同时测定10次，实验进行当中，实验室温度变化±5℃，连续测定5d，比较两方法得到的两组数据组内、组间的偏差。
1.6 统计学分析
统计学分析采用Microsoft Excel 2003、SPSS11.0软件和Medcalc ，回归线性检测采用Cusum方法检测，P＜0.05表示回归偏倚具有统计学意义。
相关性分析采用Pearson相关，P＜0.05表示相关具有统计学意义。
偏倚分析采用Bland-Altman方法。
以两比较方法的均值作为X轴，差值作为Y轴。
2 结果
2.1 不精密度
两种方法在高、中、低不同水平混合血清的批内、批间、天间及总不精密度见表1。
当血清钙离子浓度在0～3.95mmol/L时，其总CV均5%。
表1 血清钙离子测定的不精密度（略）
2.2 测定线性分析
见表2。
线性分析结果显示当血清钙离子浓度在0～3.95mmol/L时，两种方法测定线性良好，偏倚较小。
表2 两种分析方法测定血清钙离子线性结果分析（略）
2.3 干扰实验
分别选用两个不同水平(高、低)的混合血清，加入不同浓度的干扰品，以等体积的生理盐水作为无干扰血清，同时测定标本的浓度，结果以干扰程度为10%作为该系统对干扰的最高限。
结果显示：血红蛋白＜10g/L，胆红素＜300mg/L，维生素C ＜5g/L对两家分析方法在高、低值血清钙离子浓度检测干扰＜10%，在可接受范围内。
TG＞20 mmol/L时恒星不受影响(干扰＜10%)。
爱诺TG＞15mmol/L时低值血清干扰＞10%，高值血清不受干扰(图1)。
2.4 相关性分析
相关性检验结果显示恒星血清钙离子浓度的测定值与爱诺进行的测定值呈显著相关，r分别为0.98，P＜0.01。
Passing-Bablok 回归分析显示恒星血清钙离子浓度的测定结果与爱诺进行的测定结果的回归方程为Y=0.091+0.899X；对于斜率95%可信区间为0.81～0.93。
对于截距95%可信区间为-0.01～+0.20，线性回归的Cusum检验证明
偏倚无统计学意义，P＞0.05。
3 讨论
目前测定血清钙离子的方法多种多样。
全自动生化分析仪具有多项目、多样本、高速度的检测处理能力，但目前全自动生化分析仪的设计原理及其试剂间化学污染的缺陷［2］，在日常分析过程中受自身、环境影响很大(温度、试剂、比色杯清洁，全自动分析仪样品加样针、试剂加样针的清洁系统)［3-5］，污染具有偶然性，并不是每次都出现［6］，导致污染的难判断性。
而恒星离子选择电极法避免了上述影响。
本实验室采用了离子选择电极法和甲基麝香草酚蓝比色法，仪器均为国产仪器，实验室所用的两套定值质控(中生北控、上海执诚的高、中、低值)监测每天、每批的质量。
确保实验在可控的实验室条件下进行。
通过指标评价本实验室两种不同检测系统测定血清钙离子的不精密度、线性范围、抗干扰性符合要求。
【参考文献】
［1］徐国宾，蒋琳.临床生物化学常规定量方法的分析性能评价［J］.中华检验医学杂志，2007，30：141-143.
［2］于嘉屏.全自动生化分析仪及试剂间化学污染对测定结果的影响［J］.中华检验医学杂志，2007，30：1301-1302.
［3］蒋文英，李泽孟，樊雪英.日立7170A全自动生化分析仪防交叉污染程学序的设计［J］.现代检验医学杂志，2003，18：36-37.
［4］于雷.全自动生化分析仪项目间试剂的交叉污染及其避免方法［J］.临床检验杂志，2003，21：168.
［5］李浩，缪应业，郭昭静.生化全自动分析仪分析顺序对检测结果的影响［J］.临床检验杂志，2001，19：212.
［6］Dixon K.A theoretical study of carryover in selective access analysers.［J］.Ann Clin Biochem，1990，27：139-142.。