—验证文件—工艺验证文件名称: 洁净室（区）空气消毒效果及周期再验证文件编号: SX/YZ6.4-06版本号: 2013版本编制: 日期：年月日审核: 日期：年月日批准: 日期：年月日实用标准文案目录1概述 (1)2验证目的 (1)3验证范围 (1)4验证方案制定的依据 (1)5验证人员职责分工 (1)6验证仪器设备 (2)6.1验证所需仪器设备仪表 (2)6.2仪器仪表校验记录确认 (2)7验证材料 (2)7.1材料的选取 (2)7.2材料的用量 (2)7.3材料的主要用途 (2)7.4材料的确认 (2)8验证方法 (2)8.1熏蒸消毒方法 (2)8.2熏蒸参数 (3)8.3熏蒸时间周期 (3)8.4生物指示剂试验方法 (3)8.5物体表面菌试验方法 (4)8.6沉降菌试验方法 (4)9验证环境 (4)9.1无菌实验室检测环境确认 (4)9.2洁净车间环境确认 (5)9.3洁净车间的清洁 (5)10验证检测 (5)10.1生物指示剂检测 (5)10.2物体表面菌检测 (5)10.3沉降菌检测 (5)10.4 验证标准 (6)11验证结果的综合评价 (6)12 再验证周期 (6)目录附件1 人员资格确认表附件2 计量器具确认记录附件3 洁净车间空气消毒剂的确认记录附件4 洁净车间空气消毒剂的确认记录附件5 洁净车间熏蒸消毒方法确认记录附件6 消毒试验方法确认记录附件7 检测环境确认报告附件8 生物指示剂检测记录附件9 洁净车间消毒后物体表面菌检测记录附件10 洁净室消毒30天后物体表面菌检测记录附件11 洁净车间消毒后沉降菌检测记录附件12 洁净车间消毒后30天沉降菌检测记录附件13 验证结果附件14 验证结果分析及评价附件15 验证结论附件16 验证报告附件17 验证证书天台县双星医疗器械厂编号SX/YZ6.4-06洁净室（区）空气消毒效果及周期再验证版本2013验证方案页数第1页共6页1概述甲醛是常用的消毒剂，其3～5%的水溶液或乙醇溶液能破坏细菌繁殖体及许多芽孢、真菌和病毒，使其蛋白质、酶类变性。
甲醛熏蒸消毒法是洁净厂房消毒灭菌的常用方法，当相对湿度在65%以上、温度在24~40℃时，甲醛的消毒效果最好。
每立方米空间用34～40%甲醛液10ml，加热熏蒸，密闭一定时间后，通风，置换室内空气中的甲醛。
2验证目的为确认熏蒸消毒法能够对洁净室（区）空气进行有效的消毒，选择最安全合理的熏蒸时间和空气消毒周期，制定特制订本验证方案，进行验证。
3验证范围适用于本厂洁净室（区）的空气消毒效果及周期的验证。
4验证方案制定的依据GB15980-1995一次性使用医疗用品卫生标准YY0033-2000《无菌医疗器具生产管理规范》GB\T16294-2010《医药工业洁净室(区)沉降菌的测试方法》5验证人员职责分工小组职务岗位职责组长质管科长1.负责验证方案的审批。
2.负责验证的协调工作，以保证本验证方案规定项目的顺利实施。
3.负责验证数据及结果的审核。
4.负责验证报告的审批。
5.负责发放验证证书。
6.负责再验证周期的确认。
组员生技科长1.负责洁净厂房的清洁。
2.负责熏蒸消毒前物料的转移或密封。
3.负责熏蒸消毒的实施。
4.负责验证所需仪器。
组员 办公室1.负责对人员资质的确认。
组员 专职检验员1.负责验证所需的试剂、试液等的准备。
2.负责仪器、仪表、量具等的校正。
3.负责取样及样品的检验。
4.负责拟订再验证周期。
确认结果记录于附录1 《人员资格确认记录》天 台 县 双 星 医 疗 器 械 厂 编 号 SX/YZ6.4-06洁净室（区）空气消毒效果及周期再验证版 本 2013 验证方案页 数第2页 共6页6验证仪器设备6.1验证所需仪器设备仪表温控仪(干燥箱) SX-JQ-007 温控仪 (细菌培养箱) SX-JQ-009 电子天平SX-JS-001手提式压力蒸汽灭菌器（压力表） SX-JQ-004 尘埃粒子计数器 SX-JS-011 温湿度表 SX-JQ-010 温湿度表SX-JQ-012微压表 SX-JQ-0276.2仪器仪表校验记录确认。
确认结果记录于附录2《计量器具确认记录》 7验证材料 7.1消毒材料的选取①熏蒸材料选取：甲醛溶液与高锰酸钾②生物指示剂挑战性试验：黑色枯草变种芽孢杆菌 7.2材料的用量：①甲醛（40%）10毫升／立方米、高锰酸钾5克／立方米计算用量②生物指示剂：注挤吹车间、中转库、组装车间远离风口处各两组。
7.3材料的主要用途：①甲醛（40%）：对细菌、病毒、霉菌、芽孢有强大的杀灭作用。
②生物指示剂：验证对耐受菌种的杀灭作用。
7.4材料的确认：应对消毒品种的合格供方、产品牌号等进行确认，见附件3《洁净车间消毒剂确认记录》。
8验证方法8.1熏蒸消毒方法1.根据洁净区待消毒区域的空间容积，计算消毒剂用量并准确称量。
2.关闭洁净室与外界联系的全部门和传递窗，并确认洁净室调配室人员全部撤离，停止空气净化系统运转。
天台县双星医疗器械厂编号SX/YZ6.4-06洁净室（区）空气消毒效果及周期再验证版本2013验证方案页数第3页共6页3.熏蒸前对检查洁净室关键房间的温湿度，应达到甲醛消毒的最佳条件。
4.先将甲醛倒入容器中，后加入高锰酸钾，人立即离开。
5.对房间进行熏蒸消毒。
启动空调机，使甲醛气体循环约30分钟，关闭空调机，熏蒸试验时间为10小时。
6.启动空调机，25%氨水加入组合风柜排风口内不锈钢容器中，总用量为12.5L/次，打开送排风系统排风中和12小时。
记录见附件4《洁净车间熏蒸消毒方法确认记录》。
8.2熏蒸参数版本验证参数 2011版验证 2013版再验证熏蒸时间 8~10小时 8~10小时（选取10小时为例）消毒周期30天30天药品计量甲醛（35%--40%）15ml/m ³高锰酸钾7.5g/m ³甲醛（35%--40%）15ml/m ³高锰酸钾7.5g/ m ³枯草黑色变种芽孢生物指示剂七组（一组阳性对照）温湿度相对湿度在65%以上、温度在24~40℃相对湿度在65%以上、温度在24~40℃8.3熏蒸时间与周期：本次再验证选取熏蒸10小时并通风12小时后；下个消毒周期30分钟前的2种情况下进行生物指示剂试验（只做消毒后）、物体表面菌和沉降菌检测，对消毒效果及周期进行再验证。
8.4生物指示剂试验方法：在消毒前将枯草黑色变种芽胞生物指示剂放入注挤吹塑车间、中转库、组装车间远离风口各两处。
在消毒结束，新风循环12小时后，检验人员将菌片放入培养液中（培养液浸透菌片）。
然后置37℃48小时培养，另取一支未经消毒的指示剂作阳性对照。
8.5物体表面菌试验方法：在达到设定的熏蒸消毒时间（10小时），通风12小时后分别对洁净室（区）的各种表面进天 台 县 双 星 医 疗 器 械 厂 编 号 SX/YZ6.4-06洁净室（区）空气消毒效果及周期再验证版 本 2013 验证方案页 数第4页 共6页行取样、培养，检测是否有菌生长。
8.5.1取样点：分别包括设备、操作台、墙壁、地面等的开放表面与死角、缝隙处。
8.5.2准备：灭菌的生理盐水、灭菌的1ml刻度吸管、灭菌的平皿及普通营养琼脂培养基、无菌的棉签、试管、酒精灯。
8.5.3取样方法：将内径为5cm×5cm的灭菌规格板，放在被检物体表面，用浸有灭菌生理盐水的棉拭子，在规格板内涂抹10次（往返计为1次），将棉拭子放入10mL灭菌生理盐水的采样管中。
8.5.4阴性对照的确认将本次未用完的，稀释液、棉拭子、培养基等分别设阴性对照，按规定方法进行接种并培养。
8.6沉降菌试验方法：在达到设定的熏蒸消毒时间（10小时），通风12小时候将制备好的营养琼脂培养基平皿按洁净室（区）沉降菌日常监测布点图放置，打开培养皿盖，暴露30分钟后，盖好皿盖倒置装入密封装置后转至培养室，将培养皿倒置于恒温培养箱内，在30～35℃中培养48小时。
8.6.1准备：灭菌的平皿及普通营养琼脂培养基、酒精灯、恒温培养箱、高压灭菌锅。
8.6.2取样方法测试方法采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经规定时间内，在适宜的生长条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内活微生物数，并以此来评定洁净室（区）的洁净度是否符合标准要求。
8.7试验方法确认对生物指示剂消毒方法、物体表面菌试验方法、沉降菌试验方法进行确认，见附录5《消毒试验方法确认记录》9验证环境天台县双星医疗器械厂编号SX/YZ6.4-06洁净室（区）空气消毒效果及周期再验证版本2013验证方案页数第5页共6页9.1无菌实验室检测环境确认检查并确认无菌实验室检测环境应符合YY0033-2000标准的相应的洁净要求。
见附件6《无菌实验室检测环境确认记录》。
9.2洁净车间环境确认检查并确认洁净车间环境应符合YY0033-2000标准的相应的洁净要求。
见附件见附件6《无菌实验室检测环境确认记录》。
9.3洁净车间的清洁熏蒸消毒前，将净化车间内物料转移或密封，进行清洁，减少药物对产品的污染，见附件6《无菌实验室检测环境确认记录》。
10验证检测10.1生物指示剂检测：经48小时培养后，若培养液变浑浊，颜色由红色变黄判为阳性。
培养液澄清，颜色不变为阴性，继续培养至七天。
见附录7《生物指示剂检测记录》10.2物体表面菌检测：将每个采样管振打80次，混匀，10倍递减稀释，对每个稀释度(取3个稀释度)，分别用灭菌的刻度吸管取1ml将浸出液放于灭菌的培养皿（每个稀释度2个平皿）,并注入20ml的40-45℃的普通营养琼脂培养基，待凝固后，在30-35℃下倒置培养24小时,观察结果，取菌落数为30-300的平板计算，求出平均菌落数。
结果计算： 菌数/ cm 2 =见附录8-1《洁净车间消毒后物体表面菌检测记录》；8-2《洁净室消毒30天后物体表面菌检测记录》。
10.3沉降菌检测：10.3.1沉降菌测试前，被测试洁净室（或洁净区）温、湿度须达到规定的要求，静压差、换气次数、空气流速必须控制在规定值内。
10.3.2平皿进入被测房间前要先灭菌，采样时使用规定为Φ90mm ×15mm 培养皿；由微生物检测员按《培养基配制》的要求配制营养琼脂培养基，培养基于121℃湿热灭菌30分钟，冷却天 台 县 双 星 医 疗 器 械 厂 编 号 SX/YZ6.4-06洁净室（区）空气消毒效果及周期再验证版 本 2013 验证方案页 数第6页 共6页至45℃后灌注培养皿内，培养24h 观察是否无菌；检查每个培养皿的质量，培养基及培养皿有变质、破损或污染的不能使用,将带培养基的培养皿密封转至监测区域(密封装置应进行消毒)。