2. 器材 (1) 解剖刀、剪及镊子。 (2) 解剖盘。 (3) 表面皿。 (4) 匀浆器。 (5) 台秤。 (6) 离心管和离心机（台式） (7) 试管及试管架 (8) 恒温水浴 (9) 毛细玻璃管



(10)直尺 (11)2H铅笔 (12)层析滤纸（国产新华1号滤纸） (13)电热鼓风干燥箱 (14)层析用具：玻璃钟罩、层析缸和小 烧杯。 针、线、喷雾器。
1%丙酮酸溶液
1/15mol/L pH7.4磷酸缓冲液
10滴
2ml
10滴
2ml
0.05%碘乙酸
酶液
10滴
1ml 37℃ 40min
10滴
1ml （煮沸）
30%乙酸
5滴
5滴
100℃ 10min,流水冷却,过滤取滤液
ʺ纸上层析法检查
@ 点样 ₤取15cm直径的圆形滤纸，在圆心处用圆规划一个3cm的同
心圆。
锥形瓶（50ml） 移液管(2.5ml) 微量滴定管(5ml) 小台秤


操作方法
击毙动物（家兔），迅速放血，取出肝脏，在 玻璃皿上剪成碎糜。 取50ml锥形瓶2个，各加入3ml Locke氏溶液和 2ml pH7.6的磷酸缓冲液。在一个锥形瓶中， 加入3ml0.2mol/L丁酸溶液，另一个锥形瓶作 为对照。取约0.5g肝组织两份（相等重），分 别置于两个锥形瓶内，混匀，于37℃恒温水浴 内保温。
转氨酶催化。
ʺ它们的最适pH接近7.4。在各种转氨酶中，以谷
氨酸—草酰乙酸转氨酶（简称谷草转氨酶、GOT） 及谷氨酸—丙酮酸转氨酶（简称谷丙转氨酶、GPT） 活力最强。
ʺ 上述两种酶均广泛存在于生物机体中，在正常
人血清中也有少量存在。机体发生肝炎、心肌 梗塞病变时，血清中转氮酶活力显著增加
ʺ本实验利用纸层析法，检查由谷氨酸和丙酮
酸在谷丙转氨酶的作用下所生成的丙氨酸，证 明组织内氨基移换作用。
ʺ 为了防止丙酮酸被组织中其它酶所氧化或还原，
可加碘乙酸或溴乙酸抑制酵解作用或氧化作用。
₪试剂和器材



1. 试剂 (1) 实验动物----家兔 (2) 1/15mol/L磷酸缓冲液（pH=7.4） (3) 1%谷氨酸溶液（用KOH中和至中性） (4) 1%丙酮酸溶液（用KOH中和至中性） (5) 0.1%碳酸氢钾溶液 (6) 0.05%碘乙酸溶液 (7)15%三氯醋酸溶液


根据滴定样品与滴定对照所消耗的硫代硫酸钠 之差，可以计算由丁酸氧化生成丙酮的量。


试剂和器材
1. 材料 动物：家兔 2. 试剂 (1)Locke氏溶液：取0.9g氯化钠、0.042g氯化 钾、0.024g 氯化钙、0.015g碳酸氢钠及0.1g葡萄糖，溶于 水中，稀释到100ml (2)0.1mol/L碘溶液:称取12.7g碘和约25g碘化钾, 溶于水中,稀释到1000ml,混匀,用标准硫代硫酸 钠溶液标定.

本实验用新鲜肝糜与丁酸保温，生成的丙酮可 用碘仿反应测定。在碱性的条件下，丙酮与碘 生成碘仿。反应式如下：
2NaOH+I2→NaIO+NaI+H2O CH3COCH3+3NaOI→CHI3+CH3COONa+2NaOH




碘仿 剩余的碘，可用标准硫代硫酸钠滴定。
NaOI+NaI+2HCl→I2+2NaCI+H2O I2+2Na2S2O3→Na2S4O6+2NaI
氨基转移反应的定性鉴定
ʺ₪实验目的 ʺ 学习一种鉴定氨基移换作用的简便方法及 其原理 ʺ进一步掌握纸层析的原理和操作技术 ʺ了解氨基移换作用在中间代谢中的意义
₪实验原理
ʺ 氨基移换酶也称转氨酶,它能催化α-氨基酸的
氨基与α-酮酸的α-酮基互换，这种作用称为氨 基移换作用。
ʺ任何一种氨基酸进行转氨作用时，都由其专一的

保温2小时后，取出锥形瓶，各加入2ml 15% 三氯乙酸溶液，在对照瓶内追加3ml 0.2mol/L 丁酸溶液。混匀，静置15min后过滤，分别吸 取5ml滤液，放入另外两个锥形瓶中，各加 5ml 0.1N碘溶液和10%NaoH 5ml，摇匀后静置 10 分 钟 加 入 5ml 10% HCl 中 和 。 然 后 ， 用 0.1mol/L硫代硫酸钠溶液滴定剩余的碘，滴至 浅黄色时，加几滴淀粉溶液作指示剂。摇匀， 并继续滴到蓝色消失，记录滴定样品与对照所 用的硫代硫酸钠的毫升数，并按式计算样品丙 酮含量：


丙酮含量=（B－A）×0.9667×10 5 式中，B为测定对照实验所消耗的 0.1mol/L硫代硫酸钠溶液ml数；A为滴定 样品所消耗的0.1mol/L硫代硫酸的溶液 ml数；0.9667为1ml 0.1mol/L硫代硫酸钠 溶所相当的丙酮mg数。
思考题:



1.什么叫氨基移换(或转氨基)作用? 试说明该作用得特点,及在中间代谢中得 意义. 2.为什么说脂肪酸β-氧化实验的关键是 制备新鲜的肝糜? 3.什么叫酮体?为什么正常代谢时产生的 酮体量很少?



(8) 标准丙氨酸溶液(0.1%) (9) 标准谷氨酸溶液(0.1%) (10)0.1%水合茚三酮乙醇溶液 (11)酚溶剂：在大烧杯中，加蒸馏水40ml，再 加入新蒸馏的无色的苯酚150g。在水浴中加热 搅拌，混合至酚完全溶解。将该溶液倒入盛有 100ml蒸馏水的500ml分液漏斗内，轻轻振荡 混合，使其成为乳状液。静置7-10h，乳状液 变成两层透明的溶液，下层为被水饱和的酚溶 液（即酚溶剂），放出下层，贮存在棕色试剂 瓶中备用。
₤在同心圆的圆周上取4个点， 样的位置。
每个点的距离相近，为点
₤用4支毛细管口分别取样品和对照的滤液，以及标准谷氨酸
和丙氨酸，再轻轻触到4个点样的位置上，使每种溶液分别 形成直径为2-3mm的圆斑，每次点样后，自然风干或吹风机 吹干，再点下一次，重复3-4次。
@ 纸上层析分离氨基酸 ₤在15cm直径的圆形滤纸中心剪一个小圆孔 ₤取一滤纸卷成圆筒，用剪刀将该圆筒状的滤纸的下端
@ 纸上层析中氨基酸的鉴定
₤ 取出滤纸，晾干或吹干，以除去酚溶剂
₤用喷雾器向滤纸均匀喷洒0.1%茚三酮乙醇溶液
注意：茚三酮有毒性
₤用风筒吹热风使滤纸中温度加热至60-80℃，使
氨基酸显色
₤计算Rf值，确定氨基酸的种类
实验二 脂肪酸的β-氧化


实验目的
1.了解脂肪酸的β-氧化作用； 2. 通过测定和计算反应液内丁酸氧化生 成丙酮的量，掌握测定β-氧化作用的方 法及其原理。







(3)pH7.6,mol/L的磷酸缓冲液. (4)0.2mol/L丁酸溶液:取18ml正丁酸,用 1mol/L氢氧化纳溶液中和至pH=7.6,并稀 释至1000ml。 (5)15%三氯乙酸溶液。 (6)10%氢氧化钠溶液。 (7)10%盐酸溶液。

3. 器材 玻璃皿 试管及试管架 漏斗 剪刀及镊子 恒温水浴
沿纵向剪为灯刷状，而滤纸的上端插入至15cm直径的圆 形滤纸的小圆孔中。
₤圆筒装的滤纸灯刷状的一端放在盛有层析剂的培养
皿中，灯刷状的滤纸和层析剂（酚溶液）相接触
注意：酚有腐蚀性。
₤培养皿上盖上大小一样的培养皿，纸上层析开始。
待层析剂（酚溶液）展开至15cm直径的圆形滤纸边 缘1cm时，纸上层析结束。


实验原理
根据β—氧化学说，机体组织能将脂肪酸氧化 生成乙酰辅酶A。两分子乙酰辅酶A可再缩合 成乙酰乙酸。在肝脏内，乙酰乙酸可脱羧生成 丙酮，也可还原生成β-羟丁酸。乙酰乙酸、β羟丁酸和丙酮总称为酮体。酮体为机体代谢的 中间产物。在正常情况下，其产量甚微；患糖 尿病或食用高脂肪膳食时，血中酮体含量增高， 尿中也能出现酮体。
₪操作方法
ʺ 酶液的制备
₤将兔击晕，迅速解剖，取出肝脏，在低温 条件下剪碎 ₤称取1.5g肝脏，放入匀浆器中，再加入3ml 磷酸缓冲液。研成匀浆 ₤倒入离心管中，在500r/min的条件下， 离心5min，取上清液，即为制备的酶液
ʺ体外氨基移换反应 试管 1%谷氨酸溶液 1 (样品) 10滴 2 (对照) 10滴