比较项目 原理
培养基性质 培养基特有成分
植物组织培养 细胞的全能性
固体培养基 蔗糖 植物激素
动物细胞培养 细胞增殖
液体培养基 葡萄糖 动物血清
培养结果 培养目的
植物体
细胞株、细胞系
快速繁殖、培育 获得细胞或细胞
无病毒植株
分泌蛋白
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思考：
1、动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物组培培养基 有何独特之处？
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（3）整个制备过程为何要经过两次筛选?
（第一次筛选得到杂交瘤细胞（多种）， 第二次需先在多孔培养板上，在每孔只有 一个杂交瘤细胞的情况下开始培养，然后 再筛选出能产生特异性抗体的细胞群。由 于该细胞群是单个杂交瘤细胞克隆得来的 ，所以产生的抗体必然是化学性质单一的 ，特异性强的单克隆抗体。这里的单克隆 确有单个细胞克隆的含义，只不过克隆的 不是B淋巴细胞，而是杂交瘤细胞。）
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动物 细胞 工程 常用 技术
动物细胞培养 核移植 动物细胞融合 单克隆抗体技术
胚胎移植技术
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一、动物细胞培养
动物组织细胞间隙中含 动物胚胎或幼龄动
有细一 胞讨定网论量络:细的 起胞蛋 来株与白 形细质 成胞，具系将有的物特点的组织（胰、分蛋器解白官弹酶性纤维）
一定有弹何性不同和?韧性的组织 细胞悬浮液
和器官。
原代培养
10代细胞 细胞株
传代培养
50代细胞 细胞系
无限传代
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1、动物细胞的培养过程
取动物器官 和组织
(1)请据图简述动物细胞的培养过程
(2)思考:动物细胞培养有哪些方面 的应用?
幼龄动物
剪碎组织
胰蛋白酶处理
单个细胞
细胞培养
动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础
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2、有关概念
细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞 生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的 改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这 种传代细胞为细胞系。
细胞株和细胞系的区别： 细胞系的遗传物
质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制， 容易传代培养。
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3、动物细胞培养 的条件 (1)无菌无毒的环境 (2)营养 (3)温度和pH (4)气体环境
骨髓瘤细胞 细胞融合、筛选
杂交瘤细胞
细胞培养 筛选，继续培养
足够数量的、能产生 特定抗体的细胞群
体外培养 注射到小鼠腹腔
精品课单件 克隆抗体
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思考：
1、本过程利用了哪些原理？
免疫原理，细胞融合原理和动物细胞培养原理
2、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合？
这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传 物质，不仅具有B细胞分泌抗体的能力，而且还有 无限增殖的本领，因而可以获得大量单克隆抗体
主要成分：葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。 独特之处有：1、液体培养基 2、成分中有动物血清等 2、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞 培养材料？ 因为这些组织或器官上的细胞生命力旺盛，分裂能力强
3、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？
成块组织不利培养，分散了做成细胞悬浮液利于培养
B淋巴细胞产生抗体。 3、B淋巴细胞有什么特点？
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B淋巴细胞与抗体
１．B淋巴细胞受抗原刺激后，可以 产生抗体。
２．动物体内的B淋巴细胞可以产生 百万种以上的抗体，每种抗体对特定的抗 原具有特异性免疫作用。
３．每一个淋巴细胞只能产生一种抗 体。
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单克隆抗体
由单个B淋巴细胞经过无性繁殖 （克隆），形成基因型相同的细胞群， 这一细胞群所产生的化学性质单一、特 异性强的抗体称为单克隆抗体。
比较：植物的组织培养的条件
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4. 动物细胞培养的应用
(１)大规模生产有重要价值的蛋白质生物制品。
如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体
(２)解决为大面积烧伤病人移植皮肤问题。 （利用贴壁生长和接触抑制原理）
(３)检测有关物质毒性。
(４)培养正常或病变细胞，用于科研。
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植物组织培养和动物细胞织培养那样最终培养成新个 体？
不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的
动物个体
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Ａ母绵羊
Ｂ母绵羊
多 莉 羊 的 培 育 过 程
问
3 、 是 否 符 合 孟 德 尔 遗 传 ？
题、“多莉羊”是雄还是雌？2 、谁是“多莉”的母亲？1
卵细 胞
细胞拆合技术 乳腺细胞
特点： 特异性强、灵敏度高
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如何大量生产单克隆抗体？
• 利用淋巴细胞产生抗体的功能 • 利用肿瘤细胞无限增殖的特性 • 利用细胞融合的技术将两种细胞融
合获得具有淋巴细胞和肿瘤细胞特 性的杂交瘤细胞
• 利用动物细胞培养技术大量培养杂 交瘤细胞
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单克隆抗体制备过程
注射抗原
B淋巴细胞
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用灭活的病毒诱导动物细胞融合过程
思考讨论： 为什么细胞融合过程 中使用的病毒需要 灭活？
病毒颗粒 细胞核
细胞核
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二、单克隆抗体
1、什么是抗体？其本质是什么？
抗体是机体受抗原刺激后产生的、 并能与该抗原发生特异性结合的 具有免疫功能的球蛋白。
2、传统的抗体生产方法及缺陷是什么？ 抗体是从何来的？
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（1）为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B淋巴细 胞融合?
（小鼠骨髓瘤细胞可以在体外培养条件下大量 增殖，B淋巴细胞能够产生抗体，细胞的同源性 越近，融合形成的杂种细胞越易成活。） （2）骨髓瘤细胞是癌细胞吗?
（有无限增殖能力（失去凋亡机制，失去接触 抑制等）的细胞是肿瘤细胞，而具有转移能力 的肿瘤细胞，称为癌细胞，所以说，瘤细胞不 能等于癌细胞。）
• 原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为 原代细胞。培养的第1代细胞与传10代以内 的细胞称为原代细胞培养。
• 传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配 制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的 培养瓶中继续培养，称为传代培养。
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2、有关概念
细胞株：原代细胞一般传至10代左右细胞 生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存 活到40~50代，这种传代细胞为细胞株。
细胞质
细胞核
细胞核移植
融合后的卵细胞
卵裂
早期胚胎 胚胎移植
C母绵羊子宫
妊娠 分娩
精品课件 多莉羊
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一、动物细胞融合
1、概念： “2个或多个动物细胞”→“1”、“杂交单核细胞”
2、过程： 细胞A
细胞B
物理法 化学法
仙台病毒
灭活的病毒
疱疹病毒
杂种细胞
新城鸡瘟病 毒