高效液相色谱法测定通脉颗粒中阿魏酸含量
李军山;白新涛;张博
【摘要】目的建立测定通脉颗粒中阿魏酸含量的高效液相色谱法.方法色谱柱为Dionex C18柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-1％醋酸溶液(30:70),流速为1.0 mL／min,测定波长为321 nm.结果平均回收率为98.72％,RSD为0.73％,阿魏酸质量浓度在0.507-15.210 μg／mL范围内与峰面积线性关系良好,系统精密度的RSD为0.01％.结论高效液相色谱法测定通脉颗粒中阿魏酸含量,可用于通脉颗粒的质量控制.%Objective To establish HPLC method for determination of ferulic acid in Tongmai Granules. Methods Chromatographic column is Dionex C18 column( 250 mm ×4. 6 mm,5 μm ); the mobile phase is methanol -1％ acetic acid solution (30 ∶ 70); and the flow rate is 1.0 mL/min; the wavelength is 321 nm. Results The average recovery rate is 98. 72％ ,the relative standard difference (RSD) is 0. 73％ , the linear range of ferulic acid is 0. 507 - 15. 210 μg/mL,and the sys tem precision is 0. 01％. Conclusion It is available to control the quality of Tongmai Cranules by applying HPLC to determine the content of ferulic acid.
【期刊名称】《中国药业》
【年(卷),期】2011(020)017
【总页数】2页(P37-38)
【关键词】高效液相色谱法;通脉颗粒;阿魏酸;含量测定
【作者】李军山;白新涛;张博
【作者单位】神威药业有限公司,河北,石家庄051430;神威药业有限公司,河北,石家庄051430;神威药业有限公司,河北,石家庄051430
【正文语种】中文
【中图分类】R284.1;R286.0
通脉颗粒是治疗心脑血管疾病的口服制剂，由丹参、川芎、葛根3味药材组方，
具有活血通脉作用，用于治疗缺血性心脑血管疾病、动脉硬化、脑血栓、脑缺血、冠状动脉粥样硬化性心脏病、心绞痛等[1]。
1991年《中华人民共和国卫生部药品标准·中药成方制剂(第四册)》中收录的通脉颗粒质量标准暂无含量测定项。
在2010年版《中国药典(一部)》[2]中，川芎药材增加了阿魏酸含量作为川芎的质量
控制点，阿魏酸(ferulic acid)化学名为4－羟基－3－甲氧基苯丙烯酸，是来自于
多种植物的一种酚酸，在细胞壁中与多糖和蛋白质结合成为细胞壁的骨架，在某些方面具有确切的药理活性，且毒性很低[3]。
为更有效地控制此制剂质量，笔者采
用高效液相色谱法检测产品中阿魏酸含量。
现报道如下。
1 仪器与试药
Dionex Ultimate 3000型高效液相色谱系统(Ultimate 3000四元泵，Ultimate 3000自动进样器，Ultimate 3000二极管阵列检测器，变色龙色谱工作站)。
阿魏酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号为110773－200611);通脉颗粒(本公司自制，规格为10 g/袋，批号分别为 10011583，10011882，10012282，10020483，10020882，10021081，10021181，10031383，10031583，10032482);甲醇(ACI Labscan，色谱纯)，冰醋酸(天津市化学试剂一厂，分析纯)，纯化水(本公司制备)。
2 方法与结果
2.1 色谱条件[2]
色谱柱:Dionex C18柱(250 mm ×4.6 mm，5μm);流动相:甲醇－1%醋酸溶液(30∶70);流速:1.0 mL/min;检测波长:321 nm;进样量:10 μL。
2.2 溶液制备
取本品细粉约2 g，精密称定，加入70%甲醇溶液50 mL，水浴回流30 min，放冷，提取液转移至蒸发皿，用30 mL甲醇分多次洗涤容器，洗涤液与提取液合并
蒸干，残渣用70%甲醇溶液多次溶解并转移定容至10 mL容量瓶中，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。
精密称取阿魏酸对照品适量，用70%甲醇溶液制成每
1 mL含
2 μg的溶液，作为对照品溶液。
取处方中缺川芎的其他药味，按制法制
成阴性样品，再按供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。
2.3 方法学考察
空白干扰试验:分别精密量取阴性对照品溶液、对照品溶液和供试品溶液10 μL进样，记录高效液相色谱图，见图1。
结果在阿魏酸对照品峰处未见其他干扰峰。
图1 高效液相色谱图A.阴性对照品溶液 B.对照品溶液 C.供试品溶液
线性关系考察:精密称取阿魏酸对照品0.01014 g，置100 mL容量瓶中，加入70%甲醇溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。
精密吸取该贮备液 0.5，1.0，2.0，5.0，10.0，15.0 mL，分别置100 mL容量瓶中，用70%甲醇溶液稀
释至刻度，摇匀，分别进样10 μL。
以对照品质量浓度(μg/mL)为横坐标、峰面积为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程 Y=0.9904 X －0.0357，r=1.0000(n=6)。
结果表明，阿魏酸质量浓度在 0.507 ～15.210 μg/mL 范围内与峰面积线性关系
良好。
精密度试验:取质量浓度为2.028 μg/mL的阿魏酸对照品溶液10μL，连续进样 6 次。
结果峰面积分别为 1.9415，1.9413，1.9413，1.9414，1.9417，1.9411，RSD 为 0.01%(n=6)。
稳定性试验:取同一供试品溶液，室温保存，于 2，4，6，8，10，24 h时测定1次。
结果峰面积的 RSD=0.5%(n=6)，表明供试品溶液在24 h内稳定。
重现性试验:取同一批样品(批号为10011583)，依法制备供试品溶液并测定含量。
结果的 RSD为0.8%(n=6)，表明方法重现性良好。
加样回收试验:称取样品细粉约1.0 g(含量0.184 mg/袋)，精密称定，平行做6份，分别精密加入质量浓度为10.14 μg/mL的阿魏酸对照品溶液1.6，1.6，2.0，2.0，2.4，2.4 mL，再精密加入 70%甲醇溶液50 mL，依法操作，测定含量，计算回
收率。
结果见表1。
表1 阿魏酸加样回收试验结果(n=6)样品含量
(μg/mL)1.8411.8631.8831.9021.8571.856加入量
(μg/mL)1.6221.6222.0282.0282.4342.434测得量
(μg/mL)3.4473.4613.9093.8944.2384.262回收率
(%)99.0198.5299.9098.2297.8298.85 X(%)RSD(%)98.720.73
2.4 样品含量测定
取本品10批，依法测定。
结果批号为10011583，10011882，10012282，10020483，10020882，10021081，10021181，10031383，10031583，10032482 的样品中，阿魏酸的含量分别为 0.184，0.182，0.189，0.190，
0.190，0.192，0.189，0.193，0.191，0.190 mg/袋(n=2)。
3 讨论
通过用乙醇、甲醇、50%乙醇、50%甲醇、70%乙醇、70%甲醇溶液分别回流30 min、1 h、2 h几种前处理方法比较，结果70%甲醇溶液回流提取30 min最充分，故选择加70%甲醇溶液水浴回流30 min的样品处理方法。
通过DAD检测器对阿魏酸进行色谱检测，确定最大测定波长为321 nm。
参考文献:
[1]WS3－B－0824－91，中华人民共和国卫生部药品标准·中药成方制剂(第四册)[S].
[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:中国医药科技出版社，2010:38.
[3]胡益勇，徐晓玉.阿魏酸的化学和药理研究进展[J].中成药，2006，28(2):253.。