COOH CH－NH2 CH2 CH2 COOH ＋ COOH C=O CH3
α-酮戊二酸
丙氨酸
谷氨酸
丙酮酸
2. 层析
层析系统通常都有两个相组成：固定相和流动相。
混合物在层析系统中的分离决定于该混合物的组分 在这两相中的分配情况，一般用分配系数来描述。
常用的分配层析包括柱层析、纸层析、薄层层析。
纸层析法
肌肉组织氨基移换作用 （纸层析法）
一、实验目的
1. 了解氨基移换作用的原理。
2. 熟悉纸层析法的基本原理。 3. 掌握纸层析法分离鉴定氨基酸的方法。
二、实验原理
氨基移换作用（转氨基作用）
在转氨酶的作用下，某一氨基酸去掉α-氨基生成相 应的α-酮酸，而另一种α-酮酸得到此氨基生成相应的氨基 酸的过程。
4、显色
把层析后的滤纸取下，吹风机吹干后，用喷雾器
均匀喷洒0.5％茚三酮溶液，再用吹风机吹干。
四、实验结果
计算各个色斑的Rf值
五、结果分析
分析色斑的成分以及是否发生氨基移换反应
固定相：吸附在滤纸纤维之间的水分
流动相：层析液水饱和酚
谷氨酸：亲水性氨基酸 丙氨酸：疏水性氨基酸 分离原理： 利用混合物各组分在固定相和流动相中分配系数 差异而分离
3. 显色反应
茚三酮与α-氨基酸反应生成紫红色化合物
相对迁移率Rf
三、实验步骤
1、酶液的制备
2、氨基移换反应
加入物（ml） 肌匀浆 0.1 mol/L丙氨酸溶液 对照管 10滴

人体内最重要的两种转氨酶：
谷丙转氨酶（GPT）/丙氨酸转氨酶（ALT）
谷氨酸 +丙酮酸
GPT
α-酮戊二酸 +丙氨酸
谷草转氨酶（GOT）/天冬氨酸转氨酶（AST） 谷氨酸 +草酰乙酸
GOT
α-酮戊二酸 +天冬氨酸
正常人各组织中GPT及GOT 活性 (单位/克湿组织)
组织 GPT GOT 组织 GPT GOT
煮沸 5 min
0.5 ml
测定管 10滴
37 ℃ 5 min
0.5 ml
0.1 mol/Lα-酮戊二酸溶液
0.01 mol/L 磷酸盐缓冲液
0.5 ml
1.5 ml
0.5 ml
1.5 ml
混匀， 37 ℃ 50 min
煮沸5 min
3、层析
圆滤纸上标记 点样 制作滤纸芯 滤纸芯插入圆滤纸
组装层析装置
肝
肾 心 4800 91000 156000 99000
胰腺
脾 肺 血清
2000 28000
1200 700 16 14000 10000 20
血清转氨酶活性，临床上可作为疾病诊断和预
后的指标之一。
COOH CH2 CH2 C=O COOH ＋ COOH H－C－NH2 CH3 ALT