Rf ＝
原点到层析点中心的距离 原点到溶剂前沿的距离
注意事项
整个操作过程中，手只能接触滤纸两侧边缘， 否则手指上的汗液会造成滤纸出现众多斑点。
在点样时，不要将毛细管插错了试剂瓶。 展层结束后，切勿忘记用铅笔描出溶剂前沿。 点样斑点不能太大（直径应小于0.5cm），防
止氨基酸斑点重复。 吹风温度不宜过高，否则斑点变黄。
植物体内的转氨基作用
【实验目的】
1. 学习转氨基反应的原理。 2. 掌握用纸层析法鉴定转氨基的方法。
【实验原理】
氨基转移酶（转氨酶）在植物体内广泛存 在。植物通过转氨酶的作用，可将α-氨基酸上 的氨基转移到α-酮酸原来酮基的位置上，结果 形成一种新的α-酮酸和一种新的α-氨基酸， 所生成的氨基酸可用纸层析法检测。
3.实验试剂
0.1M丙氨酸溶液、0.1M谷氨酸溶液、0.Mα酮戊二酸溶液（用NaOH中和至pH7.0)、含有 0.4M蔗糖的0.1M磷酸缓冲液（pH8.0）、磷酸缓 冲液（pH7.5）、30%三氯乙酸溶液、扩展剂、 显色剂
【操作步骤】
（一）酶液的提取
取发芽2-3天的绿豆芽5g，放入研钵中， 加2ml磷酸缓冲液（pH8.0）研磨成匀浆，转 入试管中。再用该缓冲溶液3ml冲洗研钵，一 并转入试管中备用。
本实验反应体系中的底物为丙氨酸和α酮戊二酸，将其与绿豆芽匀浆制备的酶液一起 保温，在植物转氨酶的催化下会产生丙酮酸与 谷氨酸。利用纸层析法鉴定出谷氨酸的存在， 则证明植物体内具有转氨基作用。
谷丙转氨酶
【实验材料和主要仪器、试剂】 1.实验材料
绿豆芽
2.实验仪器
研钵、试管、移液管、恒温浴箱、层析缸、层 析纸、毛细管、吹风机
（二）酶促反应
取3支干燥洁净的试管编号，按下表分别 加入试剂和酶液（单位ml）。
管号
0.1Mα-酮戊 二酸溶液
1
0.5
2
0.5
3
-
0.1M丙氨 酸溶液
0.5 0.5
酶液
0.5 0.5 0.5
磷酸缓冲液 (pH7.5)
1.5 2.0 2.0
பைடு நூலகம்
试管摇匀后，置于37℃水浴30min，取出后 各加3滴30%三氯乙酸溶液终止酶促反应，再转 入沸水浴处10min，使蛋白质完全变性沉淀，冷 却后（离心或过滤，取上清液或滤液）备用。
（三）层析鉴定
1.饱和：将盛有约10ml扩展剂的培养皿置于密闭 的层析缸内，使缸内空气饱和。
2.标记：层析滤纸一张作标记。离底边2cm处用 铅笔轻轻划一条与底边平行的线，并等距离地 在直线上确定5个点作为点样原点。
3.点样：毛细管吸取上述上清液或滤液及谷氨酸、 丙氨酸标准液分别点样，反应液点5～6滴，标 准试剂液点加2滴 ，干后重复点一次，直径最 大不超过3mm。
4.展层：点样后，用线将滤纸绑成筒状（两边 不能接触），直立于培养皿中（点样面朝外， 点样端朝下），盖上层析缸盖展层。当溶剂扩 展至滤纸上沿约1厘米时，取出滤纸，用铅笔 描出溶剂前沿界线，吹干。
5.显色：用喷雾器均匀喷上0.5%茚三酮乙醇溶 液，热风吹干即可显出各层析斑点。
6.测量色谱图中的各色素斑的Rf值，进而比较 酶反应液与氨基酸标准品，得出结论。