（微生物的分离—平板涂抹法）
实验程序2（微生物的分离—混菌法）





制平板 吸取稀释液 取一吸管，以无菌操作法分别吸取10－4、10－5 、 10－6稀释液0.1mL，加在空培养皿中。 混菌 水平轻轻转动培养皿，使菌液、培养基充分混 匀铺平，放在平坦的桌面上，凝固后倒置于恒 温培养箱培养。 计算出每克土壤中放线菌的数量。 挑取单个菌落，进行划线分离。
实验四 微生物的分离纯化
土壤微生物的分离和培养



目的要求 实验原理 实验材料 实验步骤 实验结果 思考题
目的要求

初步掌握微生物的分离、培养和菌种的基 本方法。 练习微生物接种、移植和培养的基本技术， 掌握无菌操作技术。

实验原理

从混杂微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的 过程称为微生物分离与纯化。微生物在固体培养基上生长 形成的单个菌落，通常是由一个细胞繁殖而成的集合体。 因此可通过挑取单菌落而获得一种纯培养。获取单个菌落 的方法可通过稀释涂布平板或平板划线等技术完成。值得 指出的是，从微生物群体中经分离生长在平板上的单个菌 落并不一定保证是纯培养。因此，纯培养的确定除观察其 菌落特征外，还要结合显微镜检测个体形态特征后才能确 定，有些微生物的纯培养要经过一系列分离与纯化过程和 多种特征鉴定才能得到。
思考题

平板培养时为什么要把培养皿倒置？ 在划线分离时，为什么每次都需要将接种环 上的剩余物烧掉？


制备菌稀释液： 1. 培养大肠杆菌和白色葡萄球菌的混合菌液6-8h 2. 另取装有9mL无菌水试管5支，用记号笔编上 10－2、10－3、10－4、10－5、10－6。取已稀释成 10－1的菌液，用无菌吸管吸取1mL菌液加入10－ 2的无菌水的试管中，并在试管内轻轻吹吸数次， 使之充分混匀，即成10－2土壤稀释液。同法依次 连续稀释至10－4、10－5 、10－6稀释液。
实验材料
菌种： 大肠杆菌 白色葡萄球菌 培养基：灭菌的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基。 其它：无菌培养皿、无菌三角玻棒、记号 笔、接种环、酒精灯、火柴、试管，试管 架，移液枪
实验步骤
稀释涂板法 稀释混合平板法（混菌法） 划线分离 微生物的培养


制平板： 每组制培养 皿3付。

实验步骤1（微生物的分离—稀释涂平板法）
图－1 菌液的制备和 稀释液的取样




吸取稀释液 取一吸管，以无菌操作法分别吸取10－4、 10－5、 10－6菌液0.1mL，加在已制好的平 板培养基上。 涂板 用玻璃刮铲将稀释液在培养机上充分混匀 铺平，倒置于恒温箱培养。 计算出每管中细菌的数量。 即用某一培养皿内真菌的菌落数乘以该培 养皿接种液的稀释倍数即得。 挑取单个菌落，进行划线分离。
实验程序3（微生物的分离—平板划线法）


制成平板。 凝固后，用接种环取相应的菌液一环（10－1）在平板上划 线。 1.连续划线法：将挑取有样品的接种环在平板培养基表面 作连续划线。完毕后，倒置于28～300C温室培养。 2.分区划线法：用接种环以无菌操作挑取土壤稀释液1环， 先在培养基的一边作第一次平行划线3—4条，再转动培养 皿约600C角，并将接种环上剩余物烧掉，待冷却后通过第 一次划线部分作第二次划线会，同法依次作第三次和第四 次划线。划线完毕，盖上皿盖，倒置于温室培养。 挑取单个菌落接种于斜面培养基上，如果不纯，再移植纯 化，最后得到纯培养。