发光免疫技术
测定发光强度
生物素-亲合素技术 . 结合其它标记技术
金标பைடு நூலகம்疫技术
检测金颗粒沉淀
表
敏感度
+，++++ + ++ + ++ +++ +++ +++
++ +++ + ++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++
• 亲和力与亲和性、抗体的结合价和抗原的有 效决定簇数目相关。
• 亲和力越大，抗原抗体. 结合越牢固。
亲和常数
抗体与抗原结合是可逆的反应，在平衡时其
亲和常数K= 抗原抗体复合物浓度 游离抗原浓度游离抗体浓度
• K值大的抗体与抗原牢固结合，不易 解离，说明该抗体有高亲和力。
.
三、亲水胶体转化为疏水胶体
• 血清学反应条件下，抗原抗体均带负电荷， 使极化的水分子在其周围形成水化层，成为 亲水胶体。
• 当抗原与抗体结合后，表面电荷减少，水化 层变薄；而且由于抗原抗体复合物形成后， 与水接触的表面积减少，由亲水胶体转化为 疏水胶体。
• 在电解质作用下，各疏水胶体之间靠拢，形 成可见的抗原抗体复合物。
.
亲水胶体转化为疏水胶体示意图
*交叉反应(cross reaction) 两种不同的抗原 物质具有部分相同或类似结构的抗原决定簇， 则可与彼此相应的抗体.反应。
特异性示意图
.
二、比例性（proportionality）
*最适比(optimal ratio)或等价点(equivzlence point) 最迅速出现沉淀时的抗原抗体的浓度 比或量比。
微镜观察红细胞或胶
凝集抑制试验
乳等颗粒和各种凝集
协同凝集试验
现象
抗球蛋白试验
补体参与反应 补体溶血试验
以裸眼或光电比色仪
中和反应
补体结合试验 病毒中和试验
观察测定溶血现象 病毒感染性丧失
毒素中和试验
外毒素毒性丢失
免疫标记技术 荧光免疫技术
检测荧光现象
放射免疫技术
检测放射性
酶标免疫技术 检测酶底物显色
.
第三节 抗原抗体反应类型
1.沉淀反应 2.凝集反应 3.补体参与的反应 4.中和反应 5.免疫标记
.
抗原抗体反应的基本类 型
反应表 类型 沉淀反应
实验技术 液相沉淀试验
检测方法 观察沉淀、检测浊度
琼脂凝胶扩散 观察扫描沉淀线或环
凝集反应
凝胶电泳技术 直接凝集试验
或峰或弧 用裸眼、放大镜或显
间接凝集试验
.
疏水作用力（疏水键）
• 概念：两个疏水基团在水溶液中相互接触时， 由于对水分子排斥而趋向聚集的力。
• 抗原决定簇与抗体上的结合点靠近，互相间 正、负极性消失，亲水层立即失去。
• 此力在抗原抗体反应中的结合是很重要的。 • 提供的作用力最大，约占总结合力的50％。
.
抗原抗体结合力示意图
抗体 O
H
.
抗体
一
混
、
有
抗
SPAg
原
抗
体
结
合
抗体-SPAg
抗体-SPAg
二
分
、
离
分
剂
离
抗
体
抗体
可逆性. 示意图
抗原抗体反应影响因素
一、反应物自身因素 *抗原：1.理化特性 2.Ag决定簇数量 3.Ag决定簇种类 *抗体：1.来源 2.特异性与亲和力 3.浓度
.
• 二、环境条件： • *电解质：0.85%NaCl • *酸碱度：pH6～9 • *温度：15～40℃
氢键结合力 N
H
静电引力 -
-+ 范得华力
+-
疏水作用力
排斥的水
抗原
O N + + -+
+-
.
二、抗原抗体亲和性（affinity）
* 亲和性 是抗体分子上一个抗原结合点与对 应的抗原决定簇之间的相适应性而存在着的 引力，这是抗原与抗体之间固有的结合力。
* 亲和力（avidity) 是指反应系统中复杂抗 原与相应抗体之间的结合能力。
转化
NaCl
亲水胶体
疏水胶体
.
可见反应
抗原抗体反应的特点
*1.特异性 *2.比例性 *3.可逆性
.
一、 特异性（specificity） *概念：抗原分子，只能与由它刺激所产生的抗
体结合而起反应的专一性能。
*决定因素：由抗原决定簇和抗体分子超变区之 间空间结构的互补性决定的。
• 抗体分子N端可变区形成3nm×1.5nm×0.7nm的槽沟， 只有与其空间结构互补的抗原决定簇才能如楔状嵌入。
20.9kJ/mo1。
.
范德华引力（Van der Waals forces）
概念：抗原和抗体相互接近时，由于分子的 极化作用而出现的引力。
• 结合力的大小与两个相互作用基团的极化程 度的乘积成正比、与它们之间距离的7次方 成反比，键能约为4.2～12.5kJ／mol。
• 这种引力的能量小于静电引力。 • 具有特异性。
第二节 抗原抗体反应
• 抗原抗体反应的化学本质 • 抗原抗体反应的特点 • 影响抗原抗体反应的因素
.
抗原抗体反应的化学本质
• 结构基础 • 抗原抗体的结合力 • 反应过程
.
.
.
一、抗原抗体结合力
•抗原和抗体的结合是互补性的特异性结合 •不形成牢固的共价键，通过非共价键结合 •这种弱的结合力涉及几种分子间的作用力
• 等价带(equivalencezone)抗原与抗体分子比 例合适的范围。
• 带现象：Ag与Ab比例不适而不出现可见反应。 * 前带(prozone) 抗体过量时。 * 后带 (postzone) 抗原过量时。
.
比例性示意图
抗体过量 比例合适 抗原过量
抗 体 沉 淀 的 量
前带
等价带
.
后带
抗原的量
*1．静电引力 *2．范德华引力 *3．氢键结合力 *4．疏水作用力
.
静电引力（库伦引力）
（electrostatic forces） （coulombic forces）
• 概念：抗原和抗体分子带有相反电荷的 氨基和羧基基团之间相互的引力。
• 引力的大小与两个相互作用基团间的距 离的平方成反比；平均键能约为
.
氢键结合力(hydregen bond forces)
• 概念：供氢体上的氢原子与受氢体原子 间的引力。
• 供氢体：羧基、氨基和羟基 • 受氢体：羧基氧、羧基碳和肽键氧等 • 能的大小取决于氢键的方向：氢键具有高度
的方向性。
• 氢键结合力与供氢体和受氢体之间距离的6次 方成反比，键能约20.9kJ/mol。
三、可逆性（reversibility)
•概念：是指抗原与抗体结合成复合物后，在 一定条件下可解离为游离抗原与抗体的特性。
• 解离后抗原抗体仍保持原有特性。 • 一定条件：低pH、高浓度盐等。 • 常用于解离抗原抗体复合物的物质有：
3mol/L硫氰化钾、pH2.4 0.1mol/L甘氨酸、 7mol/L尿素等。