散点图-红细胞
红细胞体积/红细胞血红蛋白浓度（V/HC）散点 图：分九个区，有助于贫血的分类和诊断。
第四节 血细胞分析仪 性能评价与全面质量控制
性能评价
安装新机或大维修后需进行仪器性能评价，包括： 精密度
批内精密度：同一批样本重复测定结果的评价。 批间精密度：对两批或以上样本重复测定结果的评价。 总精密度：同一标本多次测量的结果接近程度，包含随 机误差和携带污染率双重变异因素。 准确性：测定结果与真值一致性的程度（表3-14）
激光散射法示意图
1样本流 6 3 4 2鞘流液 3激光源 5 4透镜 5低角度散射光 6高角度散射光
1 2
激光散射法
低角度散射光（前向散射光），反映细胞大小
和数量。 高角度散射光（侧向散射光），反映细胞内部 颗粒、细胞核等。 流式细胞术光散射：荧光染色，得到荧光强度 信号，与细胞所含核酸有关。优于阻抗法，是 五分类仪器的主要原理之一。
第一节 检测原理
1.电学
电阻法
射频电导法
激光散射法：染色和非染色
2.光学
分光光度法---检测血红蛋白
一. 血细胞计数原理
电阻抗法
经典的库尔特原理
测量细胞数量和体积 三分群血液分析仪主要原理
电阻抗法
血小板与红细胞同一检测通道 特殊装置辅助:扫流技术、鞘流技术、浮动 界标。
射频电导法
红细胞异常直方图
★血小板直方图
1.左偏态分布，单峰，主要在2-15fl，2-30fl检测 2.异常图形：大血小板、血小板聚集、小RBC、 RBC碎片
散点图-白细胞
每一条轴分别表示一种检测原理或检测角度的细胞信息， 任何一个点反映的是综合信息。 散点上下、左右、前后的变化与细胞大小、内部结构、颗 粒、胞核胞质等有关。
准确度和精密度
★性能评价
线性范围（稀释效应）：
指测定值与稀释倍数是否呈比例关系。线性关系范围越宽 越理想。P ＜ 0.01, 非线性相关；P ＞ 0.05，未偏离线 性。
MCH MCV MCHC RBC
★性能评价
携带污染率
连续测定1份高值样本3次（i1、i2、i3）再测定1份低 值样本3次（j1、j2、j3） 携带污染率（%）＝（j1-j3）/（i3-J3）
复检规则
国际血液分析仪显微镜复检规则41条
镜检三方面内容：
1.取细胞分布良好的区域，估算WBC、 PLT(正常可见8-15个血小板/油镜视野 ) 2.白细胞分类 3.血细胞形态观察（WBC、RBC、PLT）

福建省立医院检验科复检规则
序号
1
相关参数 WBC(109 /L)
★流式细胞光散射、电阻抗、射频、特殊细胞染色
1.4DIFF通道
阻抗+射频：分粒细胞、淋巴、单核三群 流式光散射：溶解红细胞、血小板，白细胞荧光染色，荧光强度与 细胞所含核酸有关。先分四群：中性粒细胞和嗜碱细胞，淋巴， 单核，嗜酸和未成熟粒细胞。
2.嗜酸细胞通道 3.WBC/BASO通道
聚次甲基染RNA、噁嗪染DNA
前 向 散 射 光
R B C
LFR MFR HFR
得到参数： Ret%、 Ret# HFR\MFR\LFR IRF\ Ret-He
PLT
荧光强度
有核红细胞参数检测原理
VCS法
非白细胞区域：有核红、血小板聚集、 大血小板、疟原虫等。
流式细胞激光散射法
聚次甲基荧光染色：NRBC裸核化， 荧光强度比白细胞低。
可比性（仪器与常规检测程序）：
指血液分析仪测定结果，与常规方法所测结果相比较。 显微镜法是血细胞检验基础。
对异常标本和干扰物的灵敏度 标本老化：观察标本随时间变化对结果的影响 白细胞分类计数评价（表3-15）
全面质量控制
质量保证、仪器校准和性能评价均有国际公认 的一系列标准文件。 质量保证 分析前：环境、仪器、试剂、校准品、质控品、参考
1.白细胞计数通道：电阻抗 2.白细胞分类通道：双鞘流+细胞化学染色 染液中含溶血素及氯唑黑E，对单核细胞初级颗粒、嗜 酸颗粒、中性颗粒及细胞膜（细胞膜、核膜、颗粒膜）染 色。 3.嗜碱性粒细胞通道
分光光度法
测定血红蛋白:
溶血剂使红细胞溶血，释放出血红蛋白，血红蛋白与溶血剂中某些成 分结合，形成稳定化合物，在特定的光波（530-550nm）下比色， 吸光度变化与血红蛋白浓度成正比(Lambert-Beer比色定律)。
血小板系列参数
血小板平均体积（MPV)、未成熟血小板比率（IPF) 、血小板分 布宽度（PDW) MPV 正常人MPV与PLT呈非线性负相关。 1.鉴别血小板减低的原因： MPV增高，骨髓增生功能良好，血小 板减低是由于血小板破坏过多； MPV减低，再障或急性白血病。 2.评估骨髓造血功能恢复情况：造血功能恢复时，MPV增高早于 PLT增高。 3.原发性血小板减少性紫癜（ITP）PLT、MPV、PDW？ ★ IPF 网织血小板是胞质中残留RNA的血小板。 鉴别血小板减低的原因：骨髓造血功能良好时， IPF增高。
第三章
血细胞分析仪检验
简介
手工计数法的局限性 仪器优势：精度高、速度快、易操作、功能强 血液分析仪发展 血液分析仪功能：细胞计数、白细胞分类、扩 展功能
★20世纪50年代，美国库尔特（W.H.Coulter）发明
电子血细胞计数仪并申请专利。
血液分析仪优势 检测项目多 速度快 精度高 易操作
碱性溶血剂破坏其他白细胞。
4.IMI通道
加入硫化氨基酸，与幼稚细胞结合，且不被溶血剂溶解。
WBC/BASO通道
完成五分类
异常淋 巴 幼稚粒细 胞
嗜碱
淋巴
其他白 细胞
单 核
中 性 嗜酸
嗜 碱
多角度偏振光散射法（MAPSS) 红细胞内血红蛋白逸出，鞘液进入，折光系数与 鞘流相当，不干扰白细胞检测。
第二节 检测参数和结果显示
仪器应满足的两个要求： 1.筛检和直接报告正常结果 2.报警提示异常结果：结果超出范围、细胞异常、 标本干扰等
结果显示：数据、图形（直方图、散点图）、
报警（图形、符号、文字） 直方图：曲线图形，XY轴？ 散点图：点组成的图形，XY轴？
数据
符号
参考值
直方图
★白细胞直方图
前 向 散 射 光 WBC NRBC
侧向荧光
二. 白细胞分类原理
白细胞三分群原理
★白细胞直方图
仪器将体积为35～450fL的血细胞，分为256个通道 （channel）。每个通道：1.64fl。根据细胞大小，分别置 于不同的通道中，显示血细胞体积分布直方图(Histogram)。
★白细胞直方图
FCM原理
侧向荧光 核酸量 （DNA和RNA) 650nm 以上 半导体激光 633nm
染色后的白细胞
12
侧向散射光 核和颗粒
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
前向散射光
细胞体积
激光散射法运用
白细胞计数 红细胞计数：
低角度(2°～3°)：测量红细胞体积。 高角度(5°～15°)：测定血红蛋白浓度。 血小板计数： 低角度(2°～3°)：测量细胞大小。 高角度(5°～15°)：测量细胞密度。可与小RBC、RBC 碎片区分。 加入荧光染色，成熟RBC无DNA/RNA，不被染色。未成 熟血小板染色较成熟血小板强。
电磁波通过细胞发生衰减，与细胞内部化学 成分、核质比、颗粒等有关。 特别有助于鉴别体积相同，内部结构不同的 细胞。
激光散射法
在不同角度测定散射光强度，与细胞表面结构 和内部颗粒、细胞核有关。比电阻抗法分群准 确，是五分类仪器主要检测原理。
光源：气体激光、固体激光、钨光源 鞘流：流体动力聚焦 细胞悬液 光检测器
1.35-90fl小细胞群：淋巴 2.90-160fl中间细胞群： 单核、嗜酸、嗜碱、幼稚 3.160-450fl大细胞群： 中性粒细胞
直方图出现异常，不同部位有不同含义
白细胞五分类检测原理 VCS原理
体积
电导
光散射
VCS
体 积
旋转光散射
激光散射法（钨光源）、过氧化物酶染色
过氧化物酶活性强度：嗜酸>中性粒细胞>单核。 淋巴和嗜碱细胞无过氧化酶活性
报警
报警来源：标本异常，超出项目参考范围，符合复检标
准 报警形式：图形、符号、文字 报警信息：（表3-18---3-21) 报警处理
干扰因素分析


RBC:WBC增加、RBC凝集、大PLT、PLT聚集 HB：脂血、高胆红素、WBC高、PLT高 WBC：有核红、未溶解RBC、WBC聚集 PLT：小RBC、RBC碎片、PLT聚集、大PLT、 WBC碎片
溶血剂
1.含氰化物：形成氰化血红蛋白，540nm(改良HiCN 法）。氰化 物有毒。 2.不含氰化物:如SLS（月桂酰硫酸钠）法，需用HiCN校准。
方法学评价
三分类已较少用
五分类，准确度及精密度更高。 仍无法取代人工镜检。
第二节 临床应用
红细胞参数
红细胞体积分布宽度（RDW）
白细胞系列参数
中间细胞群MID、未成熟粒细胞IG、造血祖细胞HPC MID：单核细胞、嗜酸、嗜碱、幼稚细胞、异淋、 浆细胞 IG：早幼粒细胞至杆状核粒细胞各阶段，不包括原 始粒细胞。 HPC：干细胞移植时，检测供体HPC变化，便于选 择采集时机。
第三节 血细胞分析仪 检验图形与临床应用
仪器将体积为35～450fL的血细胞，分为256个通道 （channel）。每个通道：1.64fl。根据细胞大小，分别置 于不同的通道中，显示血细胞体积分布直方图(Histogram)。
★白细胞直方图
1.35-95fl小细胞群：淋巴 2.95-160fl中间细胞群： 单核、嗜酸、嗜碱、幼稚 3.160-450fl大细胞群： 中性粒细胞